基于网络药理学与分子对接探讨木瓜治疗膝骨关节炎的分子机制

目的:基于网络药理学探索木瓜治疗膝骨性关节炎的分子作用机制。方法:基于口服生物利用度(OB)及药物相似性(DL),通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选木瓜的主要活性成分。运用GeneCards、OMIM数据库建立膝骨性关节炎靶标数据库。通过Cytoscape 3.7.1软件构建"活性成分-作用靶标-疾病"可视化交互网络;运用STRING数据库构建蛋白互作网络,分析相关蛋白互作关系;对核心靶点进行京都基因与基因百科全书(KEGG)通路及基因本体(GO)生物过程富集分析。通过Discovery Studio软件对药物活性成分与疾病靶点进行分子对接验证。结果:筛选得到木瓜活性成分3个,涉及44个作用靶点。网络分析结果表明,靶点主要涉及调节细胞代谢、凋亡等生物学过程,通过调节细胞凋亡、肿瘤坏死因子(TNF)、p53、核转录因子-κB(NF-κB)、糖基化终末产物(AGE)及其受体(RAGE)等信号通路来发挥治疗膝骨关节炎的作用。分子对接结果表明,木瓜活性成分与膝骨性关节炎的血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素-6(IL-6)、雌激素受体1(ESR1)等靶点对接吻合度较好。结论:木瓜治疗膝骨性关节炎具有多系统、多成分、多靶点的特点;其可能的作用机制包括控制炎症,调控关节软骨代谢、生长和修复,促进细胞增殖、分化,抑制细胞凋亡和抵抗氧化应激等以达到控制疾病发生发展的目的;木瓜中槲皮素、白桦脂酸、表儿茶酸等活性成分可能是其治疗膝骨性关节炎的物质基础。     

碘乙酸钠诱导的大鼠膝骨关节炎模型肠道菌群变化及其潜在影响

目的:研究碘乙酸钠诱导的大鼠膝骨关节炎(KOA)模型肠道菌群变化情况,探究肠道菌群与KOA的潜在联系。方法:将SPF级大鼠分为空白对照组和KOA组,通过膝关节局部注射碘乙酸钠制造大鼠KOA模型。通过16SrDNA检测大鼠粪便中的肠道菌群变化情况,蛋白印记法检测结肠组织中NF-κB和TNF-α蛋白表达,RT-qPCR检测结肠组织中Caspase-1和IL-1β基因表达情况,苏木精-伊红染色观察结肠黏膜通透性变化,苏木精-伊红染色观察关节滑膜和软骨组织的病理变化情况。ELISA检测血液上清中LBP,IL-1β,TNF-α及IL-10炎症因子水平。结果:与空白对照组相比,从KOA组中筛选出明显变化的肠道菌群,以Akkermansia和疣微菌门变化最为显著,结肠黏膜通透性增加,结肠组织中NF-κB p65及TNF-α蛋白表达升高,结肠组织中Caspase-1和IL-1β基因表达升高,血液中促炎因子LBP,IL-1β及TNF-α蛋白含量升高,抗炎因子IL-10蛋白含量降低。结论:KOA病理状态下肠道菌群发生变化,结肠炎症反应增强,结肠炎症反应或许在提高全身炎症反应水平、促进与肠道菌群相关的KOA的病理进程中起到重要的桥梁作用。     

缺氧诱导因子在膝关节骨性关节炎发病机制中作用研究

正膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)属于痹症范畴,包括"痛痹"、"膝痹"和"骨痹"等,主要病理特征为滑膜炎症、软骨破坏、软骨下骨病变,造成长期慢性疼痛,最终可导致膝关节活动受限甚至残疾不得不行关节置换,给工作和生活造成严重影响~[1]。目前,KOA的发病机制尚未明确,一项针对KOA的非手术指南中指出,其发病可能与生物力学改变,基质金属蛋白酶(MPP)激活活化,炎症因子分泌,软骨、软骨下骨和滑膜病变等相关,提     

三色散凝胶贴膏剂的HPLC指纹图谱研究和多元成分含量测定

目的  建立三色散凝胶贴膏剂的HPLC指纹图谱,同时对其多种成分进行含量测定,为其质量控制提供依据。方法  采用Hypersil Gold C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长为240 nm,进样量为20 μL,建立三色散凝胶贴膏剂的HPLC指纹图谱,运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012A版对其进行相似度评价;采用外标法,利用混合对照品测定12个成分的含量。结果  在选定的色谱条件下建立了三色散凝胶贴膏剂的HPLC指纹图谱,共标定16个共有峰,与对照品比对出12个成分,10批三色散凝胶贴膏剂的相似度在0.943~0.994之间;12个成分在一定浓度范围内均成良好的线性,相关系数均大于0.999 1,平均加样回收率在95.35%~99.43%之间,RSD均小于3.0%,12个成分在10个批次中的含量基本一致。结论  建立的三色散凝胶贴膏剂指纹图谱及含量测定方法,准确可靠,重复性好,可为进一步完善三色散凝胶贴膏剂的质量控制提供参考。      

耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺

对耐热芽孢杆菌(Thermophilicbacillus)XJT9503保藏、菌种活化、种子培养基和发酵培养基及7,25,250,3000L发酵罐的中试发酵工艺参数进行了研究,确定了耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺.在3000L发酵罐上控制罐温为46℃、转速180r/min、通气量4L/(L·min),培养18h后发酵酶活最高达13240U/mL.     

基于HMGB1探讨“易层”贴敷对KOA大鼠滑膜纤维化的影响

目的 基于HMGB1研究“易层”贴敷对膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜纤维化的影响。方法 30只SPF级SD大鼠,随机均分为空白对照组、模型组及易层组。KOA模型通过碘乙酸钠构建,造模成功后,易层组外敷“易层”贴敷28 d。末次给药后腹主动脉采血并提取各组滑膜组织,HE染色观察滑膜炎症;ELISA检测血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α,抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β含量;Western blot和qPCR检测滑膜HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和基因表达量。结果 HE染色显示易层组炎性细胞浸润较模型组显著减少,排列较为规则;模型组较空白对照组IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高（P<0.05）,易层组较模型组IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.05）,模型组较空白对照组IL-4含量明显升高（P<0.05）,IL-10、TGF-β含量明显降低（P<0.05）,易层组较模型组IL-10含量明显升高（P<0.05）;HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和基因水平在模型组较空白对照组表达增加（P<0.05）,易层组较模型组表达下调（P<0.05）。结论 “易层”贴敷能够抑制滑膜纤维化,其作用机制可能与抑制HMGB1、平衡促炎因子和抑炎因子有关。      

单侧外固定支架加夹板固定合桃红四物汤治疗肱骨干粉碎性骨折10例

自1997年—2004年,本院147例肱骨干骨折病人行保守或手术治疗,其中10例肱骨干粉碎性骨折,骨折经复位和夹板或悬吊石膏固定,治疗不满意,笔者选用单侧外固定支架加夹板固定进行治疗,术后给予加味桃红四物汤内服,其效果满意,现报道如下。1临床资料本组10例肱骨干粉碎性骨折,男7例,女3例;年龄22￣72岁,平均50岁;右8例,左2例;闭合性骨折9例,开放性骨折1例;A O分型B2型2例,B3型4例,C 1型2例,C 2型2例;手术时间,伤后4￣96h,平均26h;住院天数7￣19天,平均14天。2治疗方法臂丛麻醉后平卧,上肢置胸前位。先行肱骨远端螺纹钉置入,取肱骨远端外侧小切…     

基于Netrin-1介导神经萌发探讨温经活血外治法对膝骨关节炎大鼠疼痛的影响

  目的  研究Netrin-1介导感觉神经萌发对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis, KOA)大鼠疼痛行为的影响及温经活血外治法的干预作用。  方法  随机将30只大鼠平均分为空白组、KOA组及外治法组。KOA模型通过前交叉韧带横断术构建, 造模成功后, 外治法组使用温经活血外治法代表方——“易层”贴敷28 d。给药完成后各大鼠腹主动脉采血并提取各组滑膜组织和背根神经节(Dorasal root ganglion, DRG)组织, 苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining, HE)染色观察滑膜炎症, 神经镀银染色滑膜观察神经萌发; ELISA检测血清中促炎因子白介素-6(Interleukin 6, IL-6)和疼痛介质P物质(Substance p, SP)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)含量; Western blot和qPCR检测滑膜组织Netrin-1、CGRP和DRG组织神经元表面受体结直肠癌缺失基因(Deleted in colorectal cancer, DCC)、非协调同源-5(Uncoordinated-5, UNC5)蛋白和基因表达量。  结果  HE染色显示外治法组炎性细胞浸润较KOA组明显减少, 神经镀银显示外治法组较KOA组神经纤维数量明显减少; KOA组较空白组IL-6和SP含量明显升高, 外治法组较KOA组IL-6和SP含量明显减少; KOA组较空白组Netrin-1、CGRP、DCC蛋白和基因表达明显升高, UNC5则明显降低, 外治法组较KOA组Netrin-1、CGRP、DCC蛋白和基因表达明显降低, UNC5则明显升高。  结论  温经活血外治法能够缓解KOA疼痛, 其作用机制可能与抑制Netrin-1、影响神经萌发和抑制疼痛因子有关。      

基于UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术研究膝痹宁对KOA模型大鼠的软骨保护效应

  目的  运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)技术分析膝痹宁的药物活性成分, 通过干预膝骨关节炎(KOA)模型大鼠代谢因素探讨膝痹宁软骨保护效应的作用机制。  方法  制备膝痹宁水提物, UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术分析膝痹宁的活性成分。将大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组, 提取大鼠软骨组织, HE染色、番红O-固绿染色观察组织结构形态; qPCR和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、PPARγ辅助激活因子1α(PGC1α)及基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平; 取各组大鼠血清完成代谢组学分析。  结果  经鉴定, 膝痹宁含活性成分56种; 组织学切片提示膝痹宁具有软骨保护作用, 并能上调KOA大鼠软骨组织PPARγ、PGC1α的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01), 降低MMP3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01);此外, 代谢组学研究发现, 膝痹宁对13种KOA差异代谢物存在干预作用, 涉及10条代谢通路。  结论  膝痹宁具有多种药物活性成分, 其KOA软骨保护效应与药物活性成分对KOA的代谢调控有关。      

第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗拇外翻

目的 :探讨第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗轻、中度拇外翻的临床疗效。方法:自2015年6月至2017年6月,采用第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗拇外翻32例(40足),其中男3例3足,女29例37足;年龄22～80岁,平均57.57岁;病程2～32年,平均14年;轻度9足,中度31足。术前患者合并拇囊炎,伴有第1跖趾关节周围疼痛并存在负重行走时疼痛加重。手术前后拍摄足负重正侧位片,比较拇外翻角(hallux valgus angle,HVA),第1、2跖骨间角(intermetatarsal angle,IMA),并采用美国足踝外科协会拇外翻评分(AOFAS)评价临床疗效。结果:32例患者获得了随访,时间12～24个月,平均15.2个月。术后切口均愈合良好,无感染、跖骨头坏死等并发症发生。术前HVA、IMA分别由(32.08±5.59)°、(11.63±2.24)°减小至术后12个月的(10.31±4.36)°、(5.02±2.34)°,差异有统计学意义(P0.05)。AOFAS评分由术前的56.75±6.42提高至术后12个月的88.80±3.99 (P0.05)。结论:第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗轻、中度拇外翻畸形可获得较好的临床效果,为拇外翻治疗提供了更多的选择。