大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

目的 对大鼠的心肌微血管内皮细胞(myocardial microvascular endothelial cells,MMVECs)离体培养方法进行改良,建立该细胞的缺氧模型.方法 取出7日龄左右的Wistar大鼠的心脏,用胰蛋白酶和胶原酶二次消化法获得MMVECs,密度梯度离心法纯化细胞,计算细胞纯度;用免疫细胞化学方法检测微血管内皮细胞特异性第Ⅷ因子、CD34及CD31相关抗原;将原代培养的细胞置于持续通人体积分数为1％O2、5％ CO2和94％N2的自制缺氧装置中,并在37℃孵箱中分别缺氧处理4、6、12、18、24h,各时间段均设置正常对照组;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测缺氧对大鼠MMEVCs增值活力的影响,Hoechst33342染色观察缺氧诱导该细胞凋亡形态学变化.结果 细胞形态特征及相关抗原检测证实:与仅用二次消化法培养细胞相比,密度梯度离心纯化后所得MMVECs纯度提高(P＜0.01);MTT比色实验:随着培养时间的延长,与正常对照组相比,各缺氧组OD值均有所降低,其中缺氧12、18和24h的OD值降低显著(P均＜0.01);从缺氧12h开始,各缺氧组的OD值逐渐降低,与12h相比均有显著差异(P＜0.01或P＜0.05);Hoechst33342染色:缺氧12h细胞开始出现核固缩、碎裂、蓝色浓染等典型的凋亡形态学变化,随着缺氧时间延长该变化更为明显.结论 该原代离体培养方法可以获得纯度较高的MMVECs;缺氧对MMVECs的增殖有抑制作用,本方法可以简便、有效地建立MMVECs的缺氧模型.     

从bFGF/Akt/Caspase通路探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡愈合的机制

目的:通过观察2型糖尿病Sprague Dawley(SD)大鼠溃疡创面肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt),半胱氨酸天冬氨酸酶-9(cystein-asparate protease-9,Caspase-9)的表达,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡愈合的作用机制。方法:制备2型糖尿病SD大鼠溃疡模型,随机分为糖尿病生肌象皮膏组、糖尿病凡士林组、糖尿病生理盐水组,正常组大鼠溃疡模型成模即为模型组。糖尿病生肌象皮膏组用生肌象皮膏纱条外敷,糖尿病凡士林组用凡士林纱条外敷,糖尿病生理盐水组和模型组用生理盐水纱条外敷伤口。各组分别于在造模后第1,3,7,14,21天观察创面愈合情况,取溃疡创面肉芽组织备用。采用苏木素-伊红(hematoxylineosin staining,HE)染色法于光镜下观察创面肉芽组织形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测创面中bFGF的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定创面p-Akt含量,免疫组织化学法检测创面中Caspase-9表达情况。结果:与糖尿病凡士林组、糖尿病生理盐水组比较,生肌象皮膏显著上调了溃疡创面肉芽组织中bFGF表达水平(P0.05),增加了p-AKT的含量(P0.05),同时抑制了Caspase-9的表达(P0.05)。结论:生肌象皮膏可通过bFGF/Akt/Caspase通路,促进糖尿病难愈创面愈合。     

2016—2018年天津医科大学代谢病医院住院药房降压药的使用情况分析

目的 了解2016—2018年天津医科大学代谢病医院住院药房降压药的使用情况,为临床合理用药提供依据。方法 采用WHO推荐的限定日剂量（DDD）法对天津医科大学代谢病医院住院药房降压药的用药金额、用药频度（DDDs）、日均费用（DDC）和排序比（B/A）等进行统计分析。结果 2016—2018年降压药的销售情况总体比较平稳,占比逐年升高。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类药物的销售金额及构成比连续3年居首位,钙拮抗剂次之,利尿剂最低。具体药物中硝苯地平控释片的销售金额和DDDs在2016、2017年均排第1位,但2018年降到了第4位,苯磺酸氨氯地平片从2016年的第13位上升到2018年的第1位,增长幅度比较大。DDC最高的是琥珀酸美托洛尔缓释片,最低的是氢氯噻嗪片,大部分药品的B/A值都在1.00左右。结论 2016—2018年天津医科大学代谢病医院高血压患者降压药物的选择与使用相对合理,用药情况符合指南要求。     

1型糖尿病和2型糖尿病患者低血糖恐惧感和生活质量的比较研究

目的比较1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)患者低血糖恐惧感和生活质量的差异。方法采用多中心目的抽样方法选取2019年2至8月于天津市三家三级医院内分泌科就医的T1DM(21例)和T2DM(269例)患者作为研究对象,其中男156例(53.8%),女134例(46.2%),年龄(55.12±9.54)岁。对纳入的研究对象进行问卷调查。问卷包括一般资料调查表、中文版低血糖恐惧-忧虑量表(CHFSII-WS)、健康生活质量调查量表(SF-36)和世界卫生组织五项身心健康指标(WHO-5)。计量资料比较采用Kruskal Wallis H检验或Mann-Whitney U检验,多组间比较采用单因素方差分析。计数资料的比较采用χ²检验。采用多元线性回归分析方法进行多因素分析。结果T1DM与T2DM患者低血糖频次及低血糖类型的差异具有统计学意义(χ²=80.648,P<0.05;χ²=118.856,P<0.05)。T1DM与T2DM患者CHFSⅡ-WS、WHO-5、SF-36中的生理功能(PF)、躯体疼痛(BF)、总体健康(GH)、社会功能(SF)、情感职能(RE)、心理健康(MH)、健康变化(HT)维度评分差异具有统计学意义(均P<0.05)。经历不同类型低血糖症状的糖尿病患者在CHFSⅡ-WS、SF-36的PF、SF、HT维度评分差异具有统计学意义(均P<0.05)。多元线性回归分析显示,糖尿病分型、WHO-5评分、性别、精神健康、定期监测血糖、经济情况为低血糖恐惧感的独立影响因素(偏回归系数为-1.621、0.027、0.407、-0.010、0.479、-0.226,均P<0.05)。结论T1DM患者的低血糖频率、严重程度和恐惧感程度比T2DM患者更高。低血糖在增加低血糖恐惧感的同时还对患者的生活质量及心理健康产生影响。     

基于分子对接及网络药理学的托里消毒散精简方促糖尿病创面愈合作用机制研究

目的探索托里消毒散精简方中黄芪、当归、白芷、皂角刺4味中药促糖尿病创面愈合的药物成分及其潜在分子作用机制。方法采用UPLC-Q-TOF/MS在正、负离子模式下对方中的药物成分进行分析,分子对接技术对药物作用的靶蛋白进行预测,Uniprot、KEGG等相关数据库对靶蛋白功能及通路进行注释,利用Cytoscape软件构建药物成分-靶点-功能网络图。结果在正、负离子模式下从托里消毒散精简方醇提物中共鉴定出包含黄酮、皂苷、香豆素、甾体类及萜类成分的28个化合物。通过对分子对接的结果分析发现17个化合物可与17个靶蛋白相互作用,成分-靶点关系共计210对。其中与免疫调节相关的靶点5个,与抗菌、抗炎作用相关的靶点6个,与细胞分化相关的靶点6个,与细胞迁移相关的靶点10个,与血管新生相关的靶点6个,与上皮生长因子刺激相关的靶点2个,与血管的舒张功能相关的靶点6个,与雌激素相关的靶点2个。结论托里消毒散精简方中含有的黄酮、皂苷、香豆素、甾体类及萜类成分可通过调节NF-κB、MAPK、PI3K、ERK2等靶点进而调节NF-κB、PI3K/Akt/e NOS、MAPK等相关信号通路,从而共同产生抗菌、抗炎、免疫调节及促血管新生等生物学效应。     

白芷提取物促糖尿病溃疡新生血管成熟作用及机制研究

目的研究白芷提取物对自发2型糖尿病db/db(C57BLKS/J)小鼠皮肤溃疡新生血管成熟的影响与机制。方法选取8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组及白芷提取物组,同窝雄性db/m小鼠作为对照组。背部打孔法制备糖尿病溃疡小鼠模型。白芷提取物组以白芷提取物1.8 g/kg ig给药,对照组和模型组ig等量生理盐水,连续给药21 d。记录创伤后2、4、7、11、14、21 d小鼠创面大致情况;对创伤后11 d各组小鼠创面进行HE、免疫组化、免疫荧光染色观察创面组织形态、新生血管数量与成熟情况以及创面叉头转录因子(FOXO1)、血管生成素-2 (Ang-2)在创面组织中的定位表达;体外根据不同干预条件,将内皮细胞分为正常糖浓度缺氧组、高糖缺氧组、高渗缺氧组、高糖缺氧+白芷提取物组。并将不同干预条件下内皮细胞与周细胞共培养,观察白芷提取物干预高糖缺氧下内皮细胞对周细胞趋化作用及体外管状结构形成的影响。Western bloting法检测各组创面组织及内皮细胞中FOXO1、p-FOXO1、Ang-2蛋白水平及其上游蛋白激酶B (Akt)蛋白及磷酸化蛋白水平。结果创伤后4、7、11、14、21 d,白芷提取物组创面愈合速率、创面恢复大致情况、创面组织中血管形成数量及新生血管成熟情况明显优于模型组(P0.05);白芷提取物组中FOXO1和Ang-2蛋白表达水平明显高于模型组(P0.05),白芷提取物组中p-Akt、p-FOXO1蛋白表达均低于模型组(P0.05);体外实验中白芷提取物干预高糖缺氧下内皮细胞后,细胞中FOXO1和Ang-2蛋白表达水平明显降低(P0.05),p-Akt,p-FOXO1蛋白表达明显增加(P0.05);此外,白芷提取物能提高高糖缺氧下内皮细胞对周细胞的趋化作用,促进高糖缺氧下内皮细胞与周细胞体外管状结构形成。结论白芷提取物能促进新生血管形成与成熟,从而提高db/db小鼠创面愈合速率和质量,其作用机制可能与下调FOXO1/Ang-2通路,实现内皮细胞对周细胞募集及管状结构形成有关。