pVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒的构建及表达

目的构建含人白介素4(human IL-4,hIL-4)基因与人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)B细胞表位基因的真核表达质粒,并研究其在COS-7细胞内的表达。方法RT-PCR扩增人IL-4基因后,通过基因重组技术将其与α-synuclein蛋白B细胞表位基因融合,在两者之间引入柔性短肽(GSGGGSG)。将融合产物克隆到真核表达载体PVAX1上,利用电泳和测序鉴定融合质粒的大小、方向和序列。采用脂质体转染法,将融合质粒转入COS-7细胞中,用Western blotting技术检测其表达。结果电泳和测序结果与预期一致,并命名为PVAX1-IL-4/SYN-B;质粒转染COS-7细胞株成功,并且能在细胞内高效表达。结论成功构建PVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒,并在哺乳动物COS-7细胞中高效表达,为研究融合质粒在帕金森病动物模型中的免疫效果奠定了基础。     

定眩汤治疗椎动脉型颈椎病52例

采用川芎、泽泻、首乌、葛根等药物为主组成的定眩汤治疗椎动脉型颈椎病。从痰、瘀、虚着手，采用补肾固本、益气活血、化痰通络的治疗方法，临床治疗52例，痊愈40例，收到了较好的疗效。     

ha-syn蛋白核酸疫苗pVAX1-hαSH1-140的构建及其表达

目的构建含人α-突触核蛋白（human α-synuclein，hα-syn）编码基因的真核重组载体，并在COS-7细胞中表达，为帕金森病的核酸疫苗开发奠定基础。方法通过PCR方法扩增hα—syn基因的CDS全长片段，含酶切位点KpnⅠ、XbaⅠ和Kozak序列。扩增产物和真核表达载体pVAX1经双酶切、纯化、连接，转化感受态细胞E．coli TOP10，筛选含目的基因的重组载体pVAX1-hαS1-140，并在COS-7细胞中表达，用RT—PCR法和Western blot法检测其表达产物。结果经单、双酶切证实插入的基因片段大小一致，基因测序证实其序列和方向完全正确。用RT—PCR法和Western blot法检测表明，重组质粒pVAX1-hαS1-140在COS-7细胞中能表达目的蛋白，而且具有生物活性。结论成功构建了核酸疫苗pVAX1-hαS1-140，并在COS-7细胞中表达，为帕金森病的核酸疫苗治疗研究奠定了良好的基础。     

优化hα-syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价

目的评价pVAX1-IL-4/SYN-B核酸疫苗对C57BL/6J小鼠免疫反应的效果和安全性。方法采用C57BL/6J小鼠模型,应用ELISA法、免疫组织化学、RT-PCR技术,比较PBS对照组、空质粒组、优化核酸疫苗组、全长核酸疫苗组小鼠动物行为学及免疫学指标的差异。结果①优化核酸疫苗组小鼠血清中α-syn抗体明显增加;②优化核酸疫苗组中IL-4较高,IFN-γ较低,其他3组无明显差异;③免疫组织化学法显示疫苗产生的抗体可与帕金森模型小鼠脑切片中α-syn阳性包涵体发生特异性结合反应,而对照组和空质粒组无反应;④RT-PCR显示优化核酸疫苗组COX-2表达量明显少于全长核酸疫苗组(P<0.05),与对照组、空质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论优化核酸疫苗可在小鼠体内产生高效价α-syn抗体,主要引起体液免疫反应;比全长核酸疫苗更有效、更安全,为优化核酸疫苗的进一步筛选奠定了基础。     

优化人alpha-syn基因疫苗免疫MPTP慢性PD小鼠的神经保护作用

目的：探讨优化高分泌型人α-突触核蛋白（human alpha—synuclein,ha—syn）基因疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠的治疗效果和神经免疫保护作用．方法：建立慢性PD小鼠模型,采用神经毒素MPTP25mg／（kg·d）,2次／wk,累计共10次．建模后随机分为3组：优化基因疫苗组、疫苗组、PBS对照组;每次治疗前,每只动物分别在双侧后肢胫骨前肌部位注射5g／L布比卡因50μL,注射72h后,3组动物分别于同部位同深度注射优化基因疫苗、基因疫苗或PBS各50μL,1次／3wk,共3次．末次免疫后2wk观察行为学改变后,处死取脑．运用免疫荧光、免疫组化等方法观察酪氨酸羟化酶阳性细胞数,以及α-syn表达变化．结果：优化基因疫苗组、疫苗组小鼠爬杆能力与PBS对照组比较都得到明显改善,有统计学差异（P〈0．05）;但优化基因疫苗组与疫苗组行为学评分间差异无统计学意义．优化基因疫苗组酪氨酸羟化酶阳性细胞数与其它两组相比增多约20％-68％（P〈0．05）,α-syn表达减少约15％～45％（P〈0．05）．结论：优化基因疫苗具有较强改善帕金森小鼠行为学的作用,能增强疫苗的免疫原性,促进受损黑质细胞修复,对帕金森病小鼠有更好的免疫治疗作用．     

Amplatzer伞封堵术治疗先天性巨大房缺及多孔型房缺2例

例1，女，31岁，农民，因反复胸闷、气促10个月伴胸痛加重1个月而入院。入院查体：生长发育正常，心界无明显扩大，心率70次／min，心律齐，胸骨左缘2～3肋间可闻及Ⅳ／6级收缩期杂音，S2固定分裂；X线胸片示符合先心病表现，心电图示右心室肥厚，经胸超声(TTE)提示Ⅱ孔型房间隔缺损(ASD)，回声连续性中断约36～38mm，右房、右室增大。     

帕金森病发病机制研究进展

帕金森病（Parkinson disease，PD）是一种以中脑黑质致密部多巴胺（dopamine．DA）能神经元进行性退变为主要病理特征的神经系统变性疾病。其病因和发病机理目前尚不清楚，主要病理变化是在黑质致密部等处DA神经元严重缺失，残留神经元胞浆内出现嗜酸性包涵体．称Lewy小体。PD是一个集生理退化、环境因素与病理损害等造成的错综复杂、交互影响的一个改变过程。近年来国内外对PD发病机制从多种角度、不同环节、相互作用进行了多方位研究和探讨。     

帕金森病的中西医发病与免疫机制探讨

<正>气可体现遗传基因变异与多态性、炎症免疫等多种含义,同时在老龄、氧化应激等致病因素作用下,在正不胜邪、气虚则邪胜的情况下,致使致病因子即突触核蛋白(α-syn)病理产物聚集,导致帕金森病的发病表现出不同的个体差异与易感性,符合中医"正气存内,邪不可干"和"邪之所凑,其气必虚"理论精髓。外部环境毒理因素与内部免疫功能失调所致内风、痰热、瘀血,说明阴阳失其平衡、脏腑气血失调会影响到疾病的发生发展,正气的盛衰决定着某些致病因子的易感性及倾向性。同时,针灸与中药有效调节免疫机制等说明,中医所遵循的整体观念、辨证论治、君臣佐使的配伍原则本身就囊括了中医免疫治疗思想之精髓。     

肠系膜上静脉血栓形成7例报告

肠系膜上静脉血栓形成(MVT)是一种少见的腹部血管闭塞性疾病，早期症状、体征不典型，误诊率高，并发症多，病死率高。20年来我院先后诊治MVT病人7例，现报告如下。