17-DMAG对缺氧肿瘤细胞的辐射敏感性影响

目的研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴（CoCl2）诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响。方法首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μmol/L的CoGl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达。结果在CoCl_2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量最强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论（均P〈0.01）;17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制。结论 17-DMAG预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF-1a蛋白表达而发挥作用。     

HPLC-MS/MS法研究PVP包衣去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒在大鼠体内的药代动力学

目的:建立HPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中去甲斑蝥素(NCTD)浓度,并考察PVP包衣去甲斑蝥素-壳聚糖纳米粒制剂(PVP coated NCTD-chitosan nanoparticles,PVP-NCTD-NP)在大鼠体内药代动力学及相对生物利用度。方法:使用电喷雾电离负离子源(ESI-),多重反应离子(MRM)模式检测药物;采用高氯酸作为蛋白沉淀剂,测定大鼠尾静脉注射PVP-NCTD-NP和原药NCTD溶液后的血药浓度;利用3P97软件计算药代动力学参数。结果:NCTD在0.102 5～10.25μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 2),最低检测限为50 ng·mL-1;经3P97软件拟合,NCTD的药代动力学过程符合二室模型,与原药相比,PVP-NCTD-NP相对生物利用度为325.5%。结论:本法灵敏、准确、选择性高,适用于NCTD药代动力学的研究;PVP-N-CTD-NP可促进药物的吸收,显著提高NCTD的生物利用度。     

槲皮素对HeLa细胞和V79细胞辐射敏感性的影响

槲皮素是自然界分布最广的生物类黄酮化合物,具有扩张冠状动脉、降血脂、抗炎等多种生理及药理活性[1].近年来发现,槲皮素可抑制多种肿瘤细胞的增殖,是颇具应用前景的抗癌药物[2].     

热休克预处理对过氧化氢诱导细胞次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因突变的保护效应

目的 研究热休克预处理对过氧化氢诱导的细胞基因突变损伤是否具有保护效应。方法将V79细胞分为热休克处理组（热处理组）、过氧化氢损伤组（损伤组）和热休克预处理后过氧化氢损伤组（保护组）。采用6-巯基鸟嘌呤（6-TG）筛选次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）基因突变细胞并形成细胞克隆，应用Giemsa染色法计数突变细胞克隆数，计算各组细胞的相对克隆形成率及基因突变率。结果（1）温度〉42℃，1h的热休克处理会诱导明显的HPRT基因突变，细胞相对克隆形成率降低，基因突变率与37℃处理1h组比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；温度≤42℃热休克处理1h，不会诱导明显的HPRT基因突变，细胞相对克隆形成率高，基因突变率与37℃处理1h组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）过氧化氢浓度≥0．5mmoL／L时，各亚组HPRT基因突变率与0mmol／L亚组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或0．01）。（3）细胞在接受热休克预处理后再行过氧化氢处理，过氧化氢浓度≤1mmoL／L的细胞没有发生明显的HPRT基因突变，与0mmoL／L亚组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；而过氧化氢浓度超过1mmoL／L时，细胞发生明显的HPRT基因突变，与0mmol／L亚组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或0．01）。（4）损伤组与保护组相应浓度的亚组（除0，4mmoL／L组）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论热休克预处理对过氧化氢诱导的HPRT基因突变损伤细胞具有明显的保护作用。     

氡暴露对大鼠淋巴细胞的免疫毒性

[目的]通过研究氡暴露对大鼠胸腺、脾脏、外周血及骨髓淋巴细胞的损伤作用,探讨氡对大鼠免疫功能的影响,为探索氡致机体免疫损伤的可能机制提供实验资料。[方法]将15只健康雄性Wistar大鼠随机分成3组,每组5只,动物整体暴露于HD-3型多功能生态氡室,累积受照剂量分别达200工作水平月（WLM）和400WLM后,腹主动脉采血,胸腺、脾脏制成单细胞悬液,分离股骨取骨髓。采用五分类血液分析仪进行骨髓、外周血细胞计数及分类。采用荧光探针检测不同剂量氡暴露组淋巴细胞内活性氧（ROS）、游离钙离子浓度、线粒体膜电位（MMP）水平的变化。采用碘化丙啶（PI）染色后,观察脾脏、胸腺淋巴细胞周期及凋亡率。[结果]200WLM氡暴露组大鼠外周血淋巴细胞数为（6．84土1．40）×10-9／L,高于对照组的（3．34±1．10）×10-9／L（P〈0．01）,2剂量组骨髓淋巴细胞计数均明显增加（P〈0．01）;200WLM组胸腺淋巴细胞ROS高于对照组（P〈0．01）,骨髓、外周血淋巴细胞MMP低于对照组（P〈0．01）,脾脏、胸腺淋巴细胞钙离子浓度明显升高（P〈0．01）;与对照组比较,胸腺细胞Go／G,期细胞比例明显降低,而s期细胞比例显著升高,脾脏细胞则相反;200WLM氡暴露组胸腺细胞凋亡率为（1．63±0．46）％,高于对照组的（0．69±0．64）％（P〈0．05）,而400WLM氡暴露组未见明显改变。[结论]氡及其子体可暴露对大鼠免疫细胞和免疫功能产生毒性作用。     

89Sr诱发K562癌细胞凋亡及其相关基因表达研究

目的 探讨^89Sr诱发K562癌细胞凋亡放射毒理效应的分子机理。方法 采用分子病理和定量病理技术研究^89Sr内照射诱导的K562癌细胞凋亡，剂量效应关系和重要相关基因bcl-和bax在其中的表达。结果 K562细胞经^89Sr内照射6和24h，提取DNA，琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的“阶梯状”区带，伴有“拖尾”，而对照组未见“阶梯状”区带，荧光双标记流式细胞仪法定量检测，^89Sr内照射6，9，12，24和48h后，K562细胞凋亡率和坏死率均较对照组有明显升高（P＜0．01），随着^89Sr内照射时间的延长，累积剂量的提高，均无显著变化（P＞0．05），免疫组织化学染色显示，对照组K562细胞中bcl-2和bax蛋白均有表达，bcl-2蛋白表达阳性细胞率82．8％，bax为44.4%,bcl-2/bax比值1.86;^89Sr内照射24h后的K562细胞中，bcl-2蛋白表达阳性细胞率31.4%,bax为38.2%,bcl-2/bax比值0.82，与对照组相比，差异显著（P＜0．05）；RT－PCR显示bcl-2 mRNA在对照组K56细胞中高表达；^89Sr内照射12h后已有明显的下调，24h后则非常显著。结论 ^89Sr内照射K562细胞后，细胞凋亡与细胞坏死并存，且^89Sr诱导K5622细胞的凋亡可能是通过bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低，bcl-2/bax比值下降而调控的。     

针刺对肥胖大鼠胆囊收缩素的影响

目的　探讨针刺对中枢和外周肥胖大鼠胆囊收缩素 (CCK)、瘦素和胰岛素 (INS)含量的影响。方法　观察针刺治疗前后肥胖大鼠体重、Lee′s指数、体脂以及中枢和外周CCK、瘦素和INS含量的变化。结果　肥胖大鼠体重、Lee′s指数、体脂以及血清瘦素和INS显著高于正常大鼠水平 ,而大脑皮质、孤束核和血清CCK以及下丘脑瘦素和INS含量均显著低于正常大鼠水平。相关分析显示 ,肥胖指标与中枢和外周的CCK水平呈负相关。针刺治疗取得良好减肥疗效的同时 ,肥胖大鼠血清瘦素和INS水平明显回降 ,而大脑皮质、孤束核和血清CCK以及下丘脑瘦素和INS水平均呈明显回升。结论　大脑皮质、孤束核和血清CCK水平异常低下以及瘦素和INS血脑转运异常可能是产生肥胖的重要因素。针刺对中枢和外周的CCK、瘦素和INS水平的良性调整作用可能是针刺减肥的重要作用机制之一。     

针刺对肥胖大鼠纹状体组织一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的:探讨针灸治疗肥胖症及其并发症的作用机理。方法:运用神经生化技术观察针刺对肥胖大鼠纹状体组织一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量的影响。结果:肥胖大鼠纹状体组织NO和NOS水平均显著低于正常大鼠;大鼠纹状体组织NO和NOS水平与体重和Lee’s指数呈负相关。在针刺治疗取得良好减肥效果的同时,肥胖大鼠纹状体组织NO和NOS水平明显回升。结论:纹状体组织NO和NOS水平异常可能是肥胖发病的因素;针刺对肥胖机体纹状体组织NO和NOS水平的良性调整作用可能是实现减肥效应的中枢作用机制。     

针刺对肥胖大鼠瘦素和胰岛素含量的影响

目的 探讨针刺对肥胖机体瘦素(leptin)和胰岛素(INS)含量及其血脑转运的作用。方法 观察针刺治疗前后肥胖大鼠体质量、体脂及中枢和外周瘦素和INS水平的变化。结果 肥胖大鼠体质量、体脂及血清瘦素和INS水平均显著高于正常大鼠,而下丘脑瘦素和INS水平均显著低于正常大鼠。针刺治疗取得良好减肥疗效的同时,肥胖大鼠血清瘦素和INS水平均有明显降低,而下丘脑瘦素和INS水平却明显升高。结论 肥胖大鼠瘦素和INS血脑转运异常可能是产生瘦素抵抗(LR)和胰岛素抵抗(IR)的重要原因。针刺时肥胖机体下丘脑和血中瘦素和INS水平的良性调节作用可能是改善LR和IR以及调节异常内分泌代谢的一个重要环节。这种作用可能是针刺减肥的关键因素之一。     

针刺对肥胖大鼠脂肪组织13一肾上腺素能受体基因表达的影响

目的：探讨针刺对肥胖大鼠机体褐色脂肪组织β-肾上腺素能受体(β—AR)基因表达水平的作用。方法：观察针刺治疗前后肥胖大鼠肥胖指标和褐色脂肪组织β—AR基因表达的变化。结果：肥胖大鼠肥胖指标显著高于正常大鼠，而褐色脂肪组织β—AR基因表达水平明显低于正常大鼠。相关指标显示，肥胖指标与褐色脂肪组织β-AR基因表达水平呈负相关。针刺可使肥胖大鼠褐色脂肪组织β-AR基因表达水平明显回升。结论：褐色脂肪组织β-AR基因表达异常低下可能是产生肥胖的重要因素。针刺促进褐色脂肪组织β—AR基因表达可能是针刺减肥的细胞分子机制之一。