当归多糖对移植肌卫星细胞的受体鼠造血功能恢复的影响

目的:探讨当归多糖对移植肌卫星细胞的照射小鼠造血功能恢复的影响。方法:将昆明小鼠随机分为4组:照射组、移植骨髓组、移植肌卫星组、移植肌卫星且注射当归多糖组。小鼠经8Gy的137Cs-γ照射后按组别给予不同方式治疗,观察其生存状态、体重、外周血常规变化,PCR法检测Y染色体性别决定基因(sex determining region on Y chro-mosome,Sry)的表达。结果:照射组小鼠在照射后17天内全部死亡,移植骨髓组、移植肌卫星且注射当归多糖组、移植肌卫星组小鼠在照射后1周内体重和血象值均明显下降,各组体重分别于11天、12天、20天左右开始恢复,28天基本恢复到正常水平;各组血象值于第2周开始恢复,第4周时基本恢复,移植肌卫星且注射当归多糖组常规指标均优于移植肌卫星组,第3周时各存活小鼠体内均可检测到供体小鼠Sry基因。结论:当归多糖可促进移植肌卫星细胞的照射小鼠造血功能的恢复,并加速其造血重建。     

当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响

目的:观察当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响。方法:分离小鼠肌源性干细胞并培养鉴定。制备含有不同剂量当归补血汤的大鼠载药血清及对应剂量的骨髓基质细胞条件培养基。将肌源性干细胞随机分为8组:正常大鼠血清组、当归补血汤载药血清1～3组、正常大鼠血清条件培养基组、条件培养基1～3组,免疫组化法检测CD45的表达情况。结果:培养的肌源性干细胞呈desmin染色阳性;培养3天时载药血清3组、条件培养基两组及3组阳性细胞与正常大鼠血清组之间相比CD45表达量有显著性差异;随当归补血汤载药血清浓度增大CD45表达量增多,10倍剂量载药血清作用效果最佳,条件培养基也呈同样的变化趋势,经10倍剂量载药血清干预的条件培养基作用效果显著。结论:当归补血汤载药血清及含载药血清的条件培养基可促进肌源性干细胞向造血细胞方向分化。     

当归多糖对小鼠骨骼肌卫星细胞增殖及干细胞因子受体蛋白表达的影响

目的观察在体外造血微环境中,当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖及干细胞因子受体蛋白(c-kit)表达的影响。方法原代培养MSC,5天后采用结蛋白(desmin)免疫细胞化学鉴定;细胞随机分为8组,即空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含100、200、300μg/mLAPS的DMEM/F12培养基实验组及经100、200、300μg/mLAPS干预后骨髓基质细胞条件培养基组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及对细胞进行c-kit免疫细胞化学染色。结果分离培养的MSCs呈desmin染色阳性;MTT法检测发现各条件培养基实验组MSCs增殖显著;c-kit免疫强阳性反应存在于条件培养基培养的各组MSCs中,c-kit主要表达于细胞质。结论经APS干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变MSCs的生长特性,明显促进MSCs增殖及c-kit的表达,c-kit在MSCs增殖过程中可能起某种调节作用。     

当归补血汤载药血清对骨髓基质细胞增殖及细胞因子表达的影响

目的:观察当归补血汤载药血清对小鼠骨髓基质细胞增殖及细胞因子分泌的影响。方法:分离骨髓基质细胞,接种于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,用含有不同剂量的当归补血汤载药血清作用,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及ELISA法检测造血生长因子GM-CSF和IL-3的表达情况。结果:在不同浓度的载药血清作用下,骨髓基质细胞增殖和分泌GM-CSF和IL-3显著(P<0.05),呈剂量依赖性,但浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。结论:当归补血汤载药血清能够促进骨髓基质细胞的增殖以及GM-CSF和IL-3的分泌。     

当归补血汤对移植肌卫星细胞γ射线照射小鼠早期造血重建作用的影响

目的观察当归补血汤对移植骨骼肌卫星细胞的受体小鼠早期造血功能重建的影响。方法分离培养雄性同系小鼠的肌卫星细胞并鉴定。经8Gy137Cs-γ射线照射的雌性昆明种受体鼠随机分为6组:空白对照组、移植肌卫星细胞组、当归补血汤不同剂量(1,3,5,10倍灌胃7 d)干预的移植肌卫星细胞4组。观察移植后8周内受体鼠存活率、外周血血常规、脾脏指数、脾形态学的变化,并采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果培养的肌卫星细胞呈desmin染色阳性;当归补血汤各剂量组受体鼠脾脏指数、脾结节数、白细胞数、血小板数、血红蛋白数、8周内存活数均高于空白对照组和移植肌卫星细胞组,特别是给药3组及4组(P<0.05);对移植的存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实重建雌性受体鼠造血功能的细胞来自雄性供体。结论经当归补血汤干预后,肌卫星细胞能使受体鼠早期造血功能得以重建。     

当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响

目的：观察当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌源性干细胞分化的影响。方法：分离小鼠肌源性干细胞并培养鉴定。制备含有不同剂量当归补血汤的大鼠载药血清及对应剂量的骨髓基质细胞条件培养基。将肌源性干细胞随机分为8组：正常大鼠血清组、当归补血汤载药血清1～3组、正常大鼠血清条件培养基组、条件培养基1～3组,免疫组化法检测CD45的表达情况。结果：培养的肌源性干细胞呈desmin染色阳性;培养3天时载药血清3组、条件培养基两组及3组阳性细胞与正常大鼠血清组之间相比CD45表达量有显著性差异;随当归补血汤载药血清浓度增大CD45表达量增多,10倍剂量载药血清作用效果最佳,条件培养基也呈同样的变化趋势,经10倍剂量载药血清干预的条件培养基作用效果显著。结论：当归补血汤载药血清及含载药血清的条件培养基可促进肌源性干细胞向造血细胞方向分化。     

当归补血汤干预移植肌卫星细胞受体小鼠造血功能重建的研究

目的 观察当归补血汤对移植骨骼肌卫星细胞（muscle satellite cell,MSC）受体小鼠造血功能重建的影响。方法 分离雄性同系小鼠的MSC并培养鉴定。经8Gy137Cs γ射线照射的雌性昆明种受体鼠随机分为6组：空白对照组、移植MSC组、当归补血汤不同剂量（1、3、5、10倍临床等效剂量灌胃7天）干预的移植雄性MSC 4组。观察移植后1、2、3周受体鼠脾集落形成单位（colony forming unit spleen,CFU S）数、外周血白细胞（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（PLT）的变化,3周存活率等指标,并采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果 培养的MSC呈desmin染色阳性;第2周时移植MSC各组WBC明显升高（P<005）,给药2、3、4组Hb明显回升（P<005）;第3周时与移植MSC组比较,给药3、4组WBC及Hb升高明显（P<005）,给药4组PLT恢复显著（P<005）。第2周时与空白对照组比较,给药3、4组CFU S明显增多（P<005）,对移植的存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实重建雌性受体鼠造血功能的细胞来自雄性供体。结论 当归补血汤干预有助于移植MSC的受体鼠造血功能重建。