自媒体时代临床微生物检验教学的实践与体会

新的致病或耐药微生物的不断出现,给传统的临床微生物教学内容带来挑战,而自媒体时代,信息获取多元化,给临床微生物教学模式带来新机遇。本文对自媒体时代的临床微生物检验"三生"教学从教学理念、教学内容及培养学生综合素质等多方面进行了探索和实践,以培养临床型高素质临床微生检验人员,更好地协助临床感染性疾病的诊治。     

粪便中分离肺炎克雷伯菌的血清型与毒力基因检测

目的了解粪便标本分离肺炎克雷伯菌（KPN）的血清型与毒力基因分布,为临床治疗提供依据。方法收集2013年11月—2014年6月某院健康体检者及住院非腹泻患者粪便标本分离KPN,检测其黏液表型、 6种荚膜血清型（K1、K2、K3、K5、K54和K57)及6种毒力基因（rmpA、fimH、Aero、mrkA、wabG和ironB）,分析不同黏液表型、不同人群来源菌株荚膜血清型与毒力基因分布情况。结果收集粪便标本510份,其中健康体检者92份,住院非腹泻患者418份,分离KPN 107株（健康体检者19株,住院非腹泻患者88株）,粪便标本KPN总分离率为20.98%,其中高黏液表型菌24株,非高黏液表型菌83株。分离的KPN中6种血清型和6种毒力基因均有检出,以K1、K2、K57、K54血清型为主(48.60%);毒力基因mrkA和wabG检出率最高（分别为90.65%、83.18%）,rmpA+fimH+Aero +mrkA +wabG基因同时检出最常见（30.84%）,主要分布于K1、K2、K57、K54血清型中。rmpA和Aero毒力基因主要在K1、K2、K57、K54血清型中检出。健康体检者KPN血清型以K1型为主（26.32%）,未检测到K3和K57型;住院非腹泻患者6种血清型均有检出,以K1、K2、K57、K54为主。高黏液表型菌同时携带4种毒力基因以上者占83.33%（20/24）,高于非高黏液表型菌的32.53%（27/83）（χ2=19.51,P＜0.01）。高黏液表型菌中K1、K2、K57、K54血清型总检出率为91.67%（22/24）,高于非高黏液表型菌的36.14%（30/83）; rmpA、Aero毒力基因的检出率均为95.83%,均高于非高黏液表型菌组（分别为31.32%、30.12%）（均P＜0.05）。结论粪便中分离的KPN均检测到强毒力荚膜血清型和多种毒力基因,尤其在高黏液表型菌和住院患者分离菌中,应引起临床重视。     

彩色多普勒超声在锁骨下动脉窃血综合征中的诊断价值

目的：探讨彩色多普勒超声在锁骨下动脉（subclavianartery,SA）窃血综合征（subclavianstealsyndrome,SSS）中的诊断价值。方法：应用彩色多普勒超声观测SA起始段、颅外段椎动脉、上肢动脉声像图特征及血流状况。结果：18例SSS中17例由动脉粥样硬化引起,1例由多发性大动脉炎引起;完全性窃血ll例,不完全性窃血7例,1例患侧合并椎动脉重度狭窄,窃血程度降级。结论：SSS主要由动脉粥样硬化和多发性大动脉炎所致,sA狭窄与窃血程度相关,但非绝对关系,不能单纯依靠椎动脉血流方向与频谱改变判断sA或无名动脉的狭窄程度与窃血。     

神经型布鲁菌病临床特点和实验室诊断分析

目的总结神经型布鲁菌病（NB）的临床及实验室诊断过程,为提高临床和实验室对该病的认识和早期诊疗提供经验。 方法回顾性分析2015年1月至2017年1月于首都医科大学宣武医院确诊的12例神经型布鲁菌病患者的临床表现、流行病学资料及脑脊液（CSF）培养等病原学检查、影像学表现和其他实验室检查结果,并与非神经型布鲁菌病患者比较平均发病年龄,CSF白细胞数、蛋白含量、氯化物、葡萄糖水平等。 结果12例神经型布鲁菌病患者中男性9例,女性3例,平均年龄为（43 ± 14）岁;10例患者来自流行地区,9例有明确的流行病学接触史,其中3例既往诊断布鲁菌病;12例患者均出现不同程度发热,6例有头痛伴脑膜刺激征表现;3例患者表现为复视、视力下降;伴有听力减退伴步态不稳,肢体麻木无力,精神状态改变者各4例。血清布鲁杆菌凝集试验阳性（100%）较CSF凝集阳性率（58.3%）和CSF培养阳性率（46.1%）对临床诊断神经型布鲁菌病价值较大,差异具有统计学意义（χ² = 52.68、P = 0.005,χ² = 73.79、P = 0.005）;12例NB患者CSF白细胞数（单核为主）和蛋白均不同程度升高,葡萄糖、氯化物正常或减低,与非NB感染者相比,CSF葡萄糖检测具有重要价值（P均< 0.05）。给予多西环素或米诺环素+利福平+头孢曲松治疗后12例患者均预后良好。 结论神经型布鲁菌病临床表现多样,易误诊或漏诊,非疫区医务人员应重视CSF血瓶培养及布鲁杆菌凝集,加强多学科协作交流以及早确诊及早治疗。     

内质网应激信号在姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的观察姜黄素对Jurkat细胞的作用,研究内质网应激信号在姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡中的作用。方法在体外培养体系中,通过甲基噻唑蓝(MTT)比色法分析姜黄素对Jurkat细胞存活和增殖的作用,流式细胞学分析姜黄素对Jurkat细胞凋亡的作用,Western印迹检测Jurkat细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3和内质网应激凋亡信号葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白和Caspase4的表达。结果姜黄素抑制Jurkat细胞存活,促进Jurkat细胞凋亡。增加姜黄素浓度,Jurkat细胞凋亡率与活化Caspase 3表达递增。20.0μmol/L姜黄素作用时,Jurkat细胞的葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白和Caspase4同步增加。结论姜黄素激活内质网应激,通过C/EBP同源蛋白介导的内质网应激相关凋亡途径促进Jurkat细胞凋亡。     

MALDI-TOF MS直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的研究

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性厌氧血培养瓶中细菌的可行性和准确性,评价不同前处理方法用于质谱快速鉴定的临床应用价值。方法收集2017年8月至2018年8月临床非重复阳性厌氧血培养瓶,经革兰染色镜检确认均有菌生长。利用分离胶促凝管法和0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)法处理阳性厌氧血培养瓶并用MALDI-TOF MS直接鉴定,与转种后菌落鉴定结果相比较,分析鉴定准确率和一致性。结果共收集阳性厌氧血培养瓶240瓶,包括单菌阳性234瓶,混合菌6瓶,平均报阳时间为(16.87±13.12)h;218瓶(90.83%)可用MALDI-TOF MS直接鉴定,4瓶(1.67%)混合菌生长仅鉴定其中一种菌或无可靠鉴定结果。SDS法和分离胶法对革兰阴性菌的鉴定准确率(94.81%、94.16%)显著高于革兰阳性菌(87.50%、81.25%),差异有统计学意义(χ2=3.96、9.53,P0.05);SDS法和分离胶法直接鉴定与菌落鉴定结果的一致率分别为92.31%、89.74%。SDS法前处理鉴定的准确率和鉴定分值≥2.0的比例(94.17%、69.23%)均高于分离胶法(90.83%、65.81%);SDS法厌氧菌的鉴定分值≥2.0的比例(83.33%)明显高于分离胶法(58.33%)。结论 MALDI-TOF MS可应用于临床常见厌氧血培养阳性菌的鉴定,SDS法前处理对厌氧菌的快速鉴定有较高的准确率。     

不同年龄段妇女阴道微生态状况分析

目的分析不同年龄段女性阴道微生态构成及微生态失调的病原分布,为阴道感染性疾病的病原学诊断和治疗提供实验室依据。 方法回顾性分析本院2013年7月至2014年2月妇科门诊就诊的4 714例患者,按年龄分为6组（组距10岁）,取患者阴道分泌物进行革兰染色、Nugent评分、功能评价等阴道微生态检测,分析各年龄段阴道微生态状况与病原间的相关性。 结果4 714例患者中微生态正常者842例（17.86%）;阴道微生态失调者3 872例（82.14%）中菌群抑制474例（10.06%）,优势菌群异常138例（2.93%）,菌群正常但阴道pH值、乳酸杆菌功能异常者1 294例（27.45%）;单纯性阴道感染者1 654例（35.09%）,包括细菌性阴道病（BV）564例（11.96%）、BV中间型214例（4.54%）,阴道假丝酵母菌病（VVC）658例（13.96%）,滴虫性阴道炎（TV）12例（0.25%）,单纯性需氧性阴道炎（AV）206例（4.37%）;混合性阴道炎（MCVI）298例（6.32%）中主要为BV/BV中间型+ VVC 156例（3.30%）,其次是AV + VVC 74例（1.57%）。阴道微生态失调者年龄集中于21～30岁组（36.57%）,31～40岁组（29.87%）和41～50岁组（16.63%）三组;混合性阴道炎、BV/BV中间型和VVC主要集中于21～30岁组（2.46%、4.62%和6.41%）和31～40岁组（1.87%、4.67%和5.01%）。随年龄增加及阴道微生态失调,阴道pH、Nugent评分和乳酸杆菌密集度变化显著（χ² = 8.45、28.53、4.55,P = 0.02、0.005、0.04）。 结论育龄女性阴道感染发病率高,阴道pH和乳酸杆菌密集度与患者年龄及感染状况相关,应重视各年龄段女性阴道微生态检测。     

致多部位感染肺炎克雷伯菌的毒力分析

目的分析导致多部位感染的肺炎克雷伯菌的荚膜血清型和毒力基因分布,为临床抗感染治疗和院感防控提供帮助。方法收集宣武医院2017年1月至2018年12月临床血培养分离的肺炎克雷伯菌同时合并其他部位分离相同菌株患者菌株,回顾性分析其临床资料;黏液丝试验检测毒力表型,PCR扩增荚膜血清型和毒力相关基因,质谱技术分析菌株同源性。结果共收集肺炎克雷伯菌106株(来自34位患者),菌株主要分布于ICU72%普外科10%和神经内科6%;标本来源于血液34%、痰28%、尿液16%、导管6%、伤口3%、脓3%、引流液3%、胆汁2%、分泌物2%、子宫颈2%、保护性导管刷1%和腹腔积液1%;患者年龄28～91岁,平均年龄(66±5)岁,男性占70.7%,女性占29.3%。具有高黏液表型中黏液丝试验阳性者占22%(24/106),黏液丝试验阴性占78%(83/106)。毒力血清型包括K1(15%)、K2(42%)、K5(4%)、K54(11%)、K57(9%)和未分型(19%),携带rmpA(83%)、aero(79%)、mrkA (94%)、fimH(80%)和WabG(98%)等毒力因子,同时携带多种毒力基因者占47%。质谱同源性分为A型(59%)和B型(41%),A型包括A1型(40%)、A2型(19%),65%的患者为同一型别。结论该院致多部位感染的肺炎克雷伯菌分离到高毒力菌株,由同一克隆的肺炎克雷伯菌引起多部位感染菌株间的同源性较小。     

1例产气荚膜梭菌引起血流感染的临床和病原学分析

正产气荚膜梭菌为革兰阳性厌氧粗大杆菌,广泛存在于土壤、人和动物的肠道及粪便中,是胃肠道正常菌群。有研究报道显示,产气荚膜梭菌引起的血流感染罕见(约占血流感染的0.017%)[1-3],多发生在免疫力低下或控制不良的糖尿病、潜在的恶性肿瘤(白血病)及与癌症相关的放化疗和患者,常导致较高的病     

分离胶法与十二烷基硫酸钠法在血培养阳性瓶基质辅助激光解析电离飞行时间质谱病原菌直接鉴定中的应用

目的评估分离胶促凝管法和十二烷基硫酸钠（SDS）法两种阳性血培养瓶前处理方法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）快速鉴定病原菌的临床应用。 方法收集2016年11月至2017年5月首都医科大学宣武医院微生物室阳性血培养需氧瓶120例和厌氧瓶80例（经革兰染色镜检确认为单一菌）,利用分离胶促凝管和0.5%SDS前处理后与转种纯培养菌落MALDI-TOF MS鉴定比较,评价两种方法的鉴定准确率。 结果分离胶法和SDS法质谱鉴定与培养鉴定的符合率为86.0%和87.0%;分离胶法鉴定需氧瓶和厌氧瓶中病原菌的准确率为86.7%和85.0%,SDS法为85.0%和90.0%,两者鉴定需氧瓶中病原菌的鉴定率差异无统计学意义,SDS法鉴定厌氧瓶中细菌的准确率显著高于分离胶法（χ²= 11.13、P <0.05）;分离胶法和SDS法对革兰阴性杆菌的鉴定准确率（94.3%和94.3%）显著高于革兰阳性球菌（80.6%和83.3%）和真菌（50.0%和63.6%）,差异均有统计学意义（χ²= 24.7、40.3、15.1,P均<0.01）;分离胶法和SDS法鉴定革兰阴性菌和阳性菌的准确率差异无统计学意义,而SDS法鉴定真菌和厌氧菌的准确率显著高于分离胶法（χ²= 11.05、P <0.01,χ²= 14.05、P <0.05）;分离胶法和SDS法鉴定分值>2.0分者分别占37.5%和45.0%（χ²= 20.48、P <0.05）,1.6～2.0分者分别占33.0%和25.0%（χ²= 11.14、P <0.05）,差异均具有统计学意义;而<1.6分者分别占15.5%和17.0%,差异无统计学意义（χ²= 5.9、P >0.05）。 结论分离胶法和SDS法均可快速直接鉴定阳性血培养瓶中常见病原菌,显著缩短鉴定时间,在真菌和厌氧菌鉴定时以SDS法前处理MS鉴定效果较好。