甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡中的作用.方法:采用XTT法检测甲异靛对Jurkat细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术以及DNA片段分析检测甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的情况.应用Western Blot检测CASPASE家族成员及AKT信号通路相关蛋白在甲异靛作用前后的表达或磷酸化情况.通过电转染方法使Jurkat细胞高表达外源性活化AKT,并进一步分析其对甲异靛诱导细胞凋亡作用的影响.结果:甲异靛抑制Jurkat细胞增殖,随着药物浓度增加抑制作用增强,IC50为10.2 μmol/L;5～20 μmol/L甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡且凋亡效应具有浓度依赖性;甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴随CASPASE 2,3,8,9的活化,50 μmol/L CASPASE抑制剂z-VAD-fmk 可阻断甲异靛诱导的Jurkat细胞凋亡 .甲异靛降低Jurkat细胞AKT信号通路中AKT,RAF,PDK1,以及ERK1/2 的磷酸化水平;15 μmol/L LY294002)(PI3K-AKT抑制剂)可显著提高甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的作用.甲异靛同样诱导高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞凋亡,但LY294002不能增强甲异靛对高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞的凋亡诱导效应. 结论:甲异靛显著抑制Jurkat细胞增殖,通过活化CASPASE途径诱导Jurkat细胞的凋亡. 甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴AKT磷酸化水平的降低,AKT活性的降低并非甲异靛诱导凋亡的惟一因素,但参与甲异靛与PI3K-AKT抑制剂协同诱导Jurkat细胞的凋亡的过程.     

姜黄素诱导A549细胞凋亡过程中活性氧水平和caspase-3活性的变化

目的 探讨姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的发生机制.方法 采用MTT法检测姜黄素对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察姜黄素对A549细胞凋亡的影响; DCFH-DA为细胞内活性氧(ROS)探针,激光共聚焦扫描显微镜检测姜黄素对A549细胞ROS水平的影响,分光光度法测定姜黄素对A549细胞内caspase-3活性的影响.结果 不同浓度的姜黄素作用12、24、36、48 h后均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其发生凋亡作用;激光共聚焦扫描显微镜下观察姜黄素作用后细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强.结论 姜黄素对人肺腺癌A549细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,对细胞ROS和caspase-3活性的影响在其诱导A549细胞凋亡中发挥作用.     

姜黄素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肝癌细胞（QGY）细胞增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法测定姜黄素在不同浓度，不同时间对QGY的抑制作用，流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY的抑制作用。流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY细胞的生长，其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系，72h的中效浓度（IC50）为49.50μmol/L，流式细胞仪分析证实姜黄素能使QGY细胞聚积在S期，电镜观察发现姜黄素可导致细胞变性。坏死，诱导细胞凋亡。结论 姜黄素可干扰QGY细胞的周期分布，具有细胞毒作用。抗增殖，诱导细胞凋亡的作用。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480作用的体外实验研究

目的 研究姜黄素促进人结肠癌细胞系SW480凋亡的作用.方法 人结肠癌细胞系SW480与不同浓度的姜黄素共孵育48 h,MTT法检测细胞存活率,并用相差显微镜观察细胞形态学改变.用流式细胞术(检测细胞凋亡相关指标Annexin V/PI)和Ho-echst3258染色检测细胞凋亡.结果 姜黄素能够不同程度地抑制人结肠癌细胞系SW480的生长.姜黄素对SW480细胞的IC50(半数抑制浓度)为65 mg/mL.Hoechst3258荧光染色与流式细胞术分析SW480细胞的结果一致.结论 姜黄素可促进SW480细胞凋亡,为姜黄素治疗结肠癌提供依据.     

姜黄素对人脑胶质瘤SHG-44细胞抑制及凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素（erueumin）对人脑胶质瘤SHG-44细胞体外抑制及凋亡调控作用。方法20-80μmol／L姜黄素分别处理SHG-44细胞48h后，MTT法测定姜黄素对SHG-44细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；荧光分光光度法检测easpase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制SHG-44细胞的增殖；诱导SHG-44细胞凋亡；caspase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的SHG-44细胞凋亡。结论姜黄素可明显抑制并诱导SHG-44细胞凋亡。     

姜黄素对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将SKOV3随机分为空白组、顺铂组、姜黄素组、联合组。除空白组外,顺铂组加入终浓度为2.5μmol/mL的顺铂、姜黄素组加入终浓度为10μmol/mL的姜黄素、联合组加入顺铂2.5μmol/mL和姜黄素10μmol/mL,均作用24 h。采用RT-PCR检测各组细胞中表皮生长因子受体(EGFR),用流式细胞术分析细胞周期、凋亡率。结果与空白组相比,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞中EGFR表达明显下降,P均<0.01,顺铂组、姜黄素组、联合组细胞凋亡率、G0/G1期细胞增高,G2/M期细胞降低(P均<0.05);联合组EGFR相对表达量低于、细胞凋亡率和G0/G1期细胞高于顺铂组和姜黄素组(P均<0.05),顺铂组与姜黄素组EGFR表达、细胞凋亡率及G0/G1期细胞相近(P均>0.05)。结论姜黄素能有效促进卵巢癌细胞凋亡,其机制与下调细胞中EGFR表达有关;与单独用药比较,姜黄素联合顺铂的抑瘤作用明显增强。     

姜黄素抑制k562细胞生长并诱导凋亡机制的研究

目的探讨姜黄素抑制人类红白血病细胞（k562细胞）生长并诱导凋亡的机制及其对细胞凋亡相关基因BCL-XL和BAK表达的影响。方法把不同浓度姜黄素加入k562细胞,流式细胞仪检测其凋亡及其细胞周期的变化,RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK mRNA的表达,免疫组化方法检测BCL—XL和BAK蛋白的表达。结果姜黄素可以对k562细胞有较明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖,流式细胞术结果显示姜黄素浓度在100μmol／L时作用24、48h后,凋亡率高于对照组（P〈0．05）;随着姜黄素浓度增加,作用于k562细胞后可以使其倍增时间明显延长,G1期细胞增多,S期细胞减少;RT-PCR结果显示姜黄素能下调k562细胞BCL-XL表达,上调BAK mRNA的表达（P〈0．05）,免疫组化法发现姜黄素可以降低BCL-XL表达,升高BAK的表达（P〈0．05）。结论姜黄素对k562细胞的生长有较明显的抑制作用,且呈一定时间与剂量关系,并促进k562细胞凋亡,可能和下调BCL—XL的表达和上调BAK的表达相关。     

髓样分化因子88对姜黄素诱导肝星状细胞凋亡的影响

目的观察髓样分化因子88在姜黄素促进肝星状细胞(HSC)凋亡中的作用。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSCT6,并分为空白对照组、Control siRNA组、MyD88 siRNA干扰组、姜黄素组、姜黄素+Control siRNA组、姜黄素+MyD88 siRNA干扰组,siRNA处理组给予siRNA干扰48 h后,姜黄素组加入姜黄素作用24 h,各组均在收集细胞前12 h给予LPS诱导,收集各组细胞,Western blotting法检测MyD88蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MyD88 siRNA干扰、姜黄素均可降低MyD88蛋白的表达(P0.05),同时给予MyD88 siRNA干扰和姜黄素作用时与单独给予姜黄素比较,MyD88蛋白下降更明显(P0.05)。MyD88siRNA干扰后HSCs凋亡率无明显增加(P0.05),给予姜黄素处理HSCs凋亡率增加(P0.05),且姜黄素+MyD88 siRNA干扰组的凋亡率升高更明显。结论降低MyD88表达可加强姜黄素促进HSCs凋亡的作用。     

姜黄素诱导SSMC7721细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞株(SSMC7721)细胞的诱导分机制,为肝癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对SSMC7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜观察SSMC7721亚细胞结构改变。结果姜黄素对SSMC7721细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,电子显微镜下可见经姜黄素作用后的细胞高度空化,线粒体肿胀,核染色质趋边,可见凋亡小体。结论姜黄素能够抑制SSMC7721细胞增殖,阻止SSMC7721细胞G1期向S期转化进程,诱导SSMC7721细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

多克隆抗胸腺细胞球蛋白对白血病细胞增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨多克隆兔抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)对白血病细胞的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法:体外培养Jurkat、Raji、HL-60、NB4、K562、U937细胞株以及15例患者原代白血病细胞。用50、100、150、200、250μg/mL终浓度的ATG在不同时间分别作用于以上细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:ATG对Jurkat、Raji、HL-60细胞有明显的增殖抑制以及诱导凋亡作用,且高浓度ATG抑制作用更强。ATG对NB4、K562、U937细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均不明显。15例初发白血病患者中7例的原代细胞经ATG作用后明显凋亡,凋亡率均>30%。结论:ATG具有广谱抗白血病作用,尤其是对淋巴细胞白血病作用较强,为其在异基因造血干细胞移植中的应用提供了实验依据。     

三氧化二砷对非霍奇金淋巴瘤细胞的增殖抑制及凋亡作用

目的:探讨三氧化二砷(ATO)对非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞株Raji和Jurkat增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:运用CCK-8法、Annexin V FITC/PI双染流式检测法、蛋白免疫印迹法分别检测ATO对Raji和Jurkat的增殖、凋亡以及凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、caspase-8和caspase-9表达的变化。结果:ATO能明显抑制Raji细胞和Jurkat细胞生长增殖,且呈时间依赖性和浓度依赖性; ATO可诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡,且呈现一定的时间依赖性; ATO可引起Raji细胞cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、cleaved-caspase-9表达增加(均P 0. 05),而对caspase-8的影响无明显差别; ATO可引起Jurkat细胞cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9表达增加(均P 0. 05)。结论:ATO明显抑制Raji细胞和Jurkat细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,Raji细胞凋亡效果较弱,主要由线粒体途径介导,而Jurkat细胞凋亡明显,由线粒体途径和死亡受体途径共同介导。     

姜黄素对胰腺癌细胞株生长的抑制作用及可能机制

目的研究姜黄素对胰腺癌细胞增殖的体外抑制作用．探讨其抗癌作用的分子生物学机制。方法MTT法、Annexln V-FITC／PI双染法、细胞周期分析法、透射电镜等方法检测姜黄素对Pan02细胞生长和凋亡的影响．RT—PCR检测姜黄素对Pan02细胞Bax，Bcl-2，COX2，Bak．Survfvin mRNA的表达。结果(1)姜黄素抑制Pan02细胞生长呈量效关系；(2)姜黄素处理组细胞周期发生改变．G2／M期细胞比例增多、S期细胞比例减少；(3)姜黄素处理组细胞发生凋亡．表现为凋亡细胞比例增多，形态上出现明显细胞凋亡：(4)姜黄素处理组Pan02细胞Bcl-2和Bak mRNA表达水平显著下降．COX-2．Bax mRNA表达水平显著升高，Survivin mRNA的表达水平没有变化。结论姜黄素能够抑制Pan02细胞增殖，它可改变细胞周期、诱导细胞凋亡．Bcl-2家族而不是IAP家族(至少不是Survivin)参与了Pan02细胞的凋亡过程。     

姜黄素对人肺腺癌NCI-H1975细胞放射的增敏作用

目的：研究姜黄素对人肺腺癌 NCI-H1975细胞放射增敏的作用。方法选取人肺腺癌NCI-H1975细胞作为研究对象,将细胞分为对照组、单独姜黄素处理组、单独放射处理组、姜黄素联合放射处理组。采用 CCK-8实验检测细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞周期的改变;细胞核Hochest33258染色技术和 Annexin Ⅴ-FITC/PI双染技术检测细胞凋亡的情况。结果 CCK-8实验结果发现姜黄素与 X射线联合处理能显著抑制肺腺癌细胞增殖,且具有浓度依赖性。流式细胞仪检测发现姜黄素与X射线联合作用可以将细胞大部分阻滞在S期。细胞核染色及Annexin Ⅴ-FITC/PI双染技术结果发现姜黄素联合 X射线可以增强姜黄素诱导的细胞凋亡作用。结论姜黄素联合 X射线对人肺腺癌 NCI-H1975细胞有很好的增殖抑制效果,其机制可能与细胞的 S期阻滞有关,并且可以诱导细胞凋亡。     

姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及凋亡的影响

目的进一步探讨姜黄素的抗肿瘤作用机制。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用不同时间肝癌Hepl细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测Hepl细胞凋亡率以及各周期时相变化。结果姜黄素作用后Hepl细胞增殖抑制率明显升高,呈时间剂量效应关系;15μmol／L作用后,C0＋G1期细胞显著增多,而G2＋M期细胞显著减少,细胞凋亡率增高（P均〈0．05）。结论姜黄素可有效抑制Hepl细胞的生长和增殖,且具有明显的量效关系;其机制可能为干扰细胞周期进程,促进细胞凋亡。     

姜黄素对人肺癌细胞凋亡相关蛋白Survivin表达的影响

目的研究姜黄素对人肺癌细胞诱导凋亡的作用机制。方法用10、20μM两种浓度姜黄素分别作用于SPC-A1细胞12h和24h,用末端标记法检测细胞凋亡率,原位杂交检测姜黄素作用24h后SPC-A1细胞凋亡相关蛋白Survivin表达。结果20μM姜黄素作用24h组凋亡率达43.7％,明显高于其他组;20μM姜黄素作用24h组凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达明显降低。结论姜黄素可诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达降低有关。     

生存素在姜黄素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡中的表达及其意义

目的生存素是近年发现的作用最强的细胞凋亡抑制因子,通过研究姜黄素诱导胃癌细胞凋亡过程前后的生存素表达情况,探讨其用作机制.方法不同浓度的姜黄素作用于SGC-7901细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析姜黄素作用前后胃癌细胞中Survivin的表达.结果姜黄素能显著抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长并呈量效和时效关系.流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加.Western blot结果提示经姜黄素作用后,Survivin表达率下降.结论姜黄素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡,其发生与Survivin有关.     

阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用的研究

目的：研究阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用,及其相关的凋亡蛋白和细胞周期的变化,为临床治疗淋巴细胞白血病提供新的研究思路。方法：应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡并用流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法检测阿奇霉素对Jurkat细胞的增殖抑制作用,利用West-ern-blotting检测凋亡途径相关蛋白的表达。结果：用阿奇霉素处理Jurkat细胞48h后300mg/L剂量组早期凋亡率显著增高达到（88.0&#177;3.3）%,而25mg/L剂量组为（11.5&#177;2.7）%,与对照组（10.6%&#177;1.8）%无明显差异。MTT法检测结果IC50值为88.4mg/L,200mg/L抑制率达到89.27%。细胞周期显示150mg/L时G1期细胞增加,G2期和S期细胞下降。Western-blotting结果表明Bcl-2蛋白高表达,处理前后无明显变化,而Bax蛋白表达随药物浓度提高而上升,活化的Caspase3在100mg/L表达最高。结论：阿奇霉素可以有效的诱导Jurkat细胞凋亡并呈明显的浓度依赖性,其凋亡途径可能是通过Bax蛋白表达上升诱导下游效应分子Caspase3活化实现。细胞增殖抑制试验表明200mg/L以上时细胞增殖明显受抑制,细胞周期分析提示细胞增殖阻滞在了G1期。     

脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法.方法:对比观察脂质体-姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel-7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2的影响.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制作用.原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素诱导Bel-7402细胞凋亡的作用.免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素对Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖有显著抑制作用,P＜0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P＜0.05).10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素处理组Bel-7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel-7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).脂质体-姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义.结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用.脂质体-姜黄素对Bax、Bcl-2的表达无显著影响.     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的发生中起重要作用，我们应用体外HSC培养技术，初步研究了姜黄素对HSC增殖与凋亡的影响，探讨姜黄素用于肝纤维化治疗的可能性。     

西达苯胺联合传统化疗药物促进急性T淋巴细胞系的凋亡

目的:探讨西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶对急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM增殖及凋亡的影响。方法:CCK8法检测西达苯胺、伊达比星、左旋门冬酰胺酶单药或两药联合对Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:西达苯胺、伊达比星、左旋门冬酰胺酶单药作用于细胞,细胞的增殖抑制呈现药物浓度及作用时间依赖性。流式细胞术检测发现,西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶作用于细胞相较于任何一种单药诱导细胞凋亡更加明显(均P 0. 05),具有明显的协同效应(CI 0. 7),且联合用药组细胞凋亡蛋白表达水平较单药组显著升高。结论:西达苯胺联合伊达比星或左旋门冬酰胺酶具有协同抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat、MOLT4、CCRF-CEM增殖,促进细胞凋亡的作用。