不同制法下瘀血汤对CCl4诱导大鼠肝纤维化的影响

目的:探讨蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤抗肝纤维化作用是否存在异同。方法:40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、蜜丸酒煎下瘀血汤组、饮片酒煎下瘀血汤组、扶正化瘀方组。以50%CCl_4皮下注射9周制备肝纤维化模型。第7周首日开始,正常组与模型组给予0.3%羧甲基纤维素钠灌胃,其余3组分别给予蜜丸酒煎下瘀血汤(0.58 g·kg~(-1)),饮片酒煎下瘀血汤(0.43 g·kg~(-1)),扶正化瘀方(2 g·kg~(-1))灌胃,第9周结束后收集肝组织和血清样本。分别采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理学,天狼猩红染色观察纤维化程度,碱水解法测定肝组织羟脯氨酸含量情况,全自动分析法检测大鼠血清肝功能,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(COL-I)mRNA的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组化测定肝组织α-SMA蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定炎症因子与氧化指标。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝肝纤维化程度较严重,肝组织天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量,α-SMA和COL-I蛋白及mRNA表达显著增加(P0.01),大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(AST),天门冬氨酸氨基转移酶(ALT),总胆红素(TBil),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-1β,IL-17A及丙二醛(MDA)的水平显著增加(P0.01),超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平显著降低(P0.01);与模型组比较,蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤可明显减轻肝纤维化程度,肝组织天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量,α-SMA和COL-I蛋白及mRNA表达,大鼠血清AST,ALT,TBil,TNF-α,IL-1β,IL-17A,MDA的水平明显降低(P0.05,P0.01),SOD及GSH-Px水平明显增加(P0.05,P0.01)。其中蜜丸酒煎下瘀血汤组肝组织病理变化的改善显著优于饮片酒煎下瘀血汤,且肝组织在天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量、肝组织COL-I mRNA以及α-SMA mRNA和蛋白的表达降低也较饮片酒煎下瘀血汤明显(P0.05,P0.01)。血清肝功能、炎症因子及氧化相关指标2种制法下瘀血汤组间差异无统计学意义,但蜜丸酒煎下瘀血汤改善趋势更为明显。结论:蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤均具有较好的抗肝纤维化作用,其中以蜜丸酒煎下瘀血汤作用更为显著,提示制蜜丸一定程度上能够增加下瘀血汤抗肝纤维化作用。     

栀子苷对大鼠肝损伤及血清、肝脏、粪便中胆汁酸的影响

目的 探讨不同剂量栀子苷对大鼠肝脏的毒性,以及对其血清、肝组织及粪便中胆汁酸的影响。方法 60只SD大鼠,雌雄各半,按体质量随机分成空白组及栀子苷（50,100,200,400 mg·kg^-1）组,共5组,每组12只,每天灌胃给药1次,连续7 d,于第8天收集大鼠血清、肝组织和盲肠内容物。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）,门冬氨酸氨基转移酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）活性,白蛋白（ALB）,总胆红素（TBIL）,总胆汁酸（TBA）,肌酐（Crea）,尿素（Urea）含量,肝脏组织切片分别作苏木素-伊红（HE）染色,免疫组化检测细胞角蛋白7（CK7）,细胞角蛋白19（CK19）蛋白表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝组织CK7,CK19蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1）,胆固醇27α-羟化酶（CYP27A1）,胆固醇12α-羟化酶（CYP8B1） mRNA表达情况,采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS）测定血清、肝脏及盲肠内容物中18种胆汁酸含量。结果 与空白组比较,各剂量栀子苷组TBIL水平显著升高（P<0.01）;400 mg·kg^-1栀子苷组ALT,AST活性和TBA含量明显升高（P<0.05,P<0.01）;HE染色表明,与空白组比较,栀子苷200,400 mg·kg^-1组肝组织的汇管区有胆管反应,胆管周围有炎症细胞的浸润,尤以栀子苷400 mg·kg^-1毒性明显。栀子苷400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CK7,CK19表达较空白组明显增加（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中甘氨熊脱氧胆酸（GUDCA）,甘氨猪去氧胆酸（GHDCA）含量明显下降（P<0.05,P<0.01）,牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）,猪去氧胆酸（HDCA）,胆酸（CA）,鹅去氧胆酸（CDCA）含量显著升高（P<0.01）,甘氨胆酸（GCA）,甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）,甘氨脱氧胆酸（GDCA）,甘氨石胆酸（GLCA）,牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）,GUDCA,GHDCA,熊去氧胆酸（UDCA）,牛磺石胆酸（TLCA）的含量占比降低,TCDCA,HDCA,CA,CDCA,脱氧胆酸（DCA）的占比增加;血清中GHDCA,石胆酸（LCA）含量显著下降（P<0.01）,牛磺猪去氧胆酸（THDCA）,牛磺胆酸（TCA）,GCA,TCDCA,UDCA,CA,CDCA,DCA含量明显增加（P<0.05,P<0.01）,CA/DCA显著升高（P<0.01）,且CA与CDCA含量占比分别上升19.60%和4.63%;与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组盲肠内容物中所有的胆汁酸含量均下降,其中GCA,UDCA,HDCA,GCDCA,GDCA,TLCA,GLCA,CDCA,DCA,LCA含量明显下降（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CYP7A1,CYP27A1 mRNA表达明显增加（P<0.05,P<0.01）。结论 400 mg·kg^-1栀子苷灌胃,可导致大鼠明显的肝损伤,其肝脏、血清与粪便中胆汁酸发生显著改变,且同一种胆汁酸在肝脏、血清与粪便中的变化不尽相同。然而,由栀子苷所导致的肝损伤与体内胆汁酸变化间的因果关系尚不清楚,仍有待后续进一步研究给予阐明。     

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱测定五味子和醋五味子中8种木脂素成分含量

目的：建立一种快速稳定的液质联用方法分析醋制对五味子中8种主要木脂素类成分含量的影响,为完善五味子及醋五味子饮片的质量标准提供实验依据。方法：采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱,以乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速 0.4 mL·min^-1,质谱采用加热电喷雾离子源（H-ESI）,利用其高分辨的特点采用一级正离子Full mass扫描方式,对不同批次五味子、醋五味子及自制醋五味子中8种主要木脂素类成分进行含量测定。结果：在优化的色谱质谱条件下,每个样品的分析时间仅为4 min。通过Xcalibur数据处理软件加权处理,五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲和五味子丙素在0.062 5~2.00 μg·mL^-1,五味子酯乙、五味子酚、五味子甲素和五味子乙素在0.015 6~0.500 μg·mL^-1线性关系良好（r≥0.991 3）;精密度、重复性及稳定性良好（RSD≤3%）;加样回收率在98.74%~102.34%,RSD均小于3%;所测成分含量在五味子和醋五味子之间无显著差异;自制醋五味子与市面上醋五味子之间木脂素类成分含量也无明显差异;自制醋五味子中木脂素成分含量炮制前后同一成分含量均有一定变化,但变化均不一致,有升有降,但多批次平均含量之间无统计学差异。结论：建立的定量方法分析时间短、灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于五味子及醋五味子中8种木脂素类成分的快速测定,并为其质量评价提供新的科学依据和参考。     

下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的干预作用

目的:探讨下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用及潜在机制。方法:40只C57/BL6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、下瘀血汤全方组(3.03 g/kg)、下瘀血汤组分组(乙酸乙酯部位萃取液,0.65 g/kg)及吡格列酮组(10 mg/kg),每组8只。对照组小鼠给予蛋氨酸-胆碱充分(MCS)饲料,其他组小鼠给予MCD饲料诱导NASH模型,连续6周。造模第4周起,各药物组灌胃给予相应药液,连续3周。末次给药后,收集肝组织,分离血清。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝组织三酰甘油(TG)含量。HE染色和油红O染色分别观察肝组织形态学变化及脂滴沉积。PCR检测肝组织脂质代谢[二酰甘油酰基转移酶(Dgat)1、Dgat2、脂滴包被蛋白2(PLIN2)、诱导细胞凋亡的DFF45样效应因子C(CIDEC)、白细胞分化抗原簇36(CD36)、脂肪酸转运蛋白3(FATP3)、脂酰辅酶A氧化酶(ACO)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)]、炎症[F4/80、CD11b、CD11c、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)]、血管新生[血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、血管性血友病因子(vWF)、血小板/内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、CD34、内皮糖蛋白(ENG/CD105)、E-选择素(E-sele)、血管细胞黏附分子(VCAM)]相关因子的mRNA表达水平。结果:(1)与对照组相比,模型组小鼠血清ALT、AST水平及肝脏TG含量显著增加(P0.05,P0.01);HE染色发现,模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变,大量脂肪空泡,肝细胞气球样变以及炎症细胞浸润,且NAS积分4分;油红O染色发现,模型组小鼠肝细胞内有大量红色脂滴沉积。与模型组相比,下瘀血汤组分组小鼠血清ALT水平显著下降(P0.05),下瘀血汤全方组及组分组小鼠血清AST水平及肝组织TG含量均显著降低(P0.05,P0.01),两组肝组织脂肪变、炎症浸润以及脂滴沉积明显改善,且NAS积分和油红O染色阳性表达面积占比均显著降低(P0.01)。组分组ALT和AST水平、全方组AST水平较吡格列酮组明显降低(P0.05,P0.01)。(2)与对照组相比,模型组小鼠肝组织脂质代谢相关基因Dgat1、PLIN2、CIDEC、CD36、FATP3的mRNA表达水平明显升高(P0.01),而ACO与LCAD的mRNA表达水平显著降低(P0.05,P0.01);炎症相关基因F4/80、CD11b、CD11c、TNF-α及TGF-β的mRNA表达,以及血管新生相关基因VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM的mRNA表达均显著上调(P0.05,P0.01)。与模型组相比,脂质代谢方面,下瘀血汤全方组与组分组Dgat1、Dgat2、PLIN2、CIDEC、CD36及FATP3的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01),LCAD的mRNA表达显著上调(P0.01);下瘀血汤全方组ACO mRNA表达亦明显升高(P0.01);炎症方面,下瘀血汤全方组及组分组F4/80、CD11b、CD11c及TNF-α的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01),组分组TGF-β mRNA表达亦明显下调(P0.01);血管新生方面,下瘀血汤全方组及组分组VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM、CD105的mRNA表达均显著降低(P0.05,P0.01)。结论:下瘀血汤及其乙酸乙酯部位组分可有效治疗MCD诱导的小鼠NASH,其作用机制可能与改善肝脏脂质代谢、炎症反应及血管新生有关。     

旋覆花汤对高脂高果糖高胆固醇饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的影响

目的 探讨旋覆花汤对高脂高果糖高胆固醇饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用。方法 32只雄性C57/BL6J小鼠随机分为正常组、模型组、旋覆花汤组和奥贝胆酸组，每组8只。高脂高果糖高胆固醇饮食造模第24周开始，各组给予相应药物干预，旋覆花汤组给药剂量为14.19 g/kg灌胃，奥贝胆酸组给药剂量为10 mg/kg灌胃，灌胃体积均为20 mL/kg,每天给药1次，连续6周。HE染色、油红O染色、天狼星红染色及Masson染色观察肝组织病理学变化、脂质沉积及胶原沉积；试剂盒检测血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C和葡萄糖水平，肝组织TG及羟脯氨酸(Hyp)含量；实时荧光定量聚合酶链式反应检测肝组织脂质代谢相关、炎症相关以及纤维化相关基因的表达；免疫组化染色观察肝组织F4/80和α-SMA阳性表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与正常组相比，模型组小鼠体质量、肝湿重、血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C和葡萄糖水平均显著增高(P值均<0.01);HE染色显示，模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变，大量脂肪空泡，肝细...