Wnt/β-catenin通路相关基因参与穴位敷贴修复缺血性脑损伤机制

目的:穴位敷贴治疗脑缺血为"靳三针"特色疗法,本实验在前期研究证实穴位敷贴对脑缺血具有神经保护作用的基础上,探讨Wnt/β-catenin通路基因参与其修复缺血性脑损伤的可能机制。方法:制备安宫牛黄贴(药物组成以郁金、黄芩、栀子、冰片、麝香等为主),实验动物分为正常组、模型组、药物组及穴位敷贴(高、中、低剂量)组,制备大脑中动脉局灶性脑缺血模型(MCAO),每组分为3个亚组(脑缺血后6 h、3 d、7 d)。采用RT-qPCR检测Wnt3、Dishevelled、Caspase-3、Survivin mRNA;Western-bolt检测β-catenin、GSK-3β蛋白表达。结果:穴位敷贴治疗后,穴位敷贴中剂量组大鼠神经行为学评分明显降低(P0.05),大鼠缺血侧脑组织Wnt3、Dishevelled、Survivin mRNA、β-catenin蛋白表达不同程度增加,Caspase-3mRNA、GSK-3β蛋白不断下降,与模型组相比具有统计学差异(P0.01或P0.05),以穴位敷贴中剂量组上述变化较为显著。结论:Wnt/β-catenin通路参与穴位敷贴防治缺血性脑损伤的可能机制为上调核心分子Wnt3、Dishevelled、β-catenin,激活靶基因Survivin,下调抑制因子GSK-3β、Caspase-3表达。     

穴位敷贴含药血清促进神经干细胞增殖作用研究

目的:探讨安宫牛黄贴含药血清对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响以及对分泌型血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用。方法:将未分化状态的C17.2细胞培养并传代,按含药血清10%给药,分为穴位敷贴高剂量组,穴位敷贴中剂量组,穴位敷贴低剂量组,药物组,以及空白组。MTT法检测NSCs增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白表达。结果:MTT数据显示,安宫牛黄贴穴位敷贴能有效促进NSCs的增殖,以穴位敷贴低剂量、中剂量组效果较为显著(P0.05)。ELISA结果显示,穴位敷贴低剂量、中剂量、高剂量均能不同程度升高神经干细胞表达分泌型VEGF蛋白,其中穴位敷贴中剂量组增高分泌型VEGF蛋白含量的效果最好(P0.05)。结论:VEGF分泌增多对体外培养的神经干细胞增殖有明显促进作用,穴位敷贴含药血清正是由于增加了神经干细胞表达分泌型VEGF蛋白,从而促进了神经干细胞的增殖。     

生脉注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞抗拒株的放射增敏作用＊

目的 探讨生脉注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞抗拒株及其裸鼠移植瘤的放射增敏作用以及对STAT3、p-STAT3蛋白表达的影响。方法 通过细胞毒性实验筛选生脉注射液的最佳浓度，克隆形成实验检测用药前后放射敏感性；建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，荷瘤鼠随机分为空白组，生脉注射液低、高剂量组，生脉注射液低、高剂量联合照射组，照射组和姜黄素联合照射对照组。计算肿瘤体积抑制率和抑瘤率。蛋白免疫印迹法检测基因表达。结果 生脉注射液给药后，CNE-2R细胞放射敏感性增加；与单纯照射组比较，高剂量联合照射组肿瘤体积抑制率及抑瘤率明显升高，其STAT3、p-STAT3表达亦显著下调。结论 生脉注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞抗拒株CNE-2R及其裸鼠移植瘤具有放射增敏作用，其增敏作用可能与抑制STAT3表达与活化相关。     

鼻咽癌斑马鱼移植瘤模型的构建及姜黄素对CNE-2细胞的抑制作用

目的:建立人鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型,探讨姜黄素在体内外对鼻咽癌的抑制作用,为阐明姜黄素抗鼻咽癌的分子机制提供依据.方法:将鼻咽癌CNE-2细胞分为对照组和细胞膜红色荧光染色剂CM-Dil(CM-Dil)组,连续5 d进行细胞计数,并观察荧光强度变化.采用显微注射法构建鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型,将斑马鱼胚胎分为对照...     

穴位敷贴对急性脑缺血大鼠神经元损伤的保护作用

目的：探讨穴位敷贴对大鼠急性脑缺血后神经元损伤的影响。方法：采用线栓法制备大鼠脑缺血模型;治疗前后分别对大鼠进行神经行为学症状评分,HE染色法观察各组大鼠脑缺血后神经元损害情况。结果：治疗后,穴位敷贴中剂量组、高剂量组及阳性药物组神经行为学评分均明显减低（P〈0.05）;与正常组比较,模型组大鼠脑组织神经细胞脱失、水肿及变形明显;各治疗组大鼠神经细胞脱失、水肿及变形现象较模型组有不同程度减轻。结论：穴位敷贴可改善急性脑缺血大鼠神经行为学症状,对神经元损伤有一定的保护作用。     

调和阴阳，以平为期 - -基于Th1/Th2免疫平衡的自血穴位注射效应机制探索

目的：在自血穴位注射疗法前期临床及基础研究的基础上,探讨其效应机制研究思路。方法：以"自血穴位注射"为检索词,检索Pubmed、CNKI、万方、维普等数据库1990-2017年文献,结合本课题组前期临床及实验研究,分析自血穴位注射疗法干预痤疮的效应机制。结果：自血穴位注射通过调节Th1/Th2免疫偏移与皮损局部微生态环境失衡发挥治疗寻常痤疮的作用,这可能是自血穴位注射治疗寻常痤疮的重要途径之一,也是其"调和阴阳,以平为期"作用的体现。结论：在今后的研究工作中,以自血穴位注射对Th1/Th2免疫偏移及皮损局部微生态失衡的影响为切入点,可为本法"调和阴阳,以平为期"的作用提供实验依据,为其临床应用提供一定的科学依据。     

生脉姜黄散对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用

目的:探讨生脉姜黄散对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放射增敏作用及对细胞周期素依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)蛋白表达的影响,并讨论其增敏作用的相关机制。方法:通过皮下注射肿瘤细胞的方法建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,荷瘤鼠随机分为空白组、照射组、生脉姜黄散组、生脉姜黄散联合照射组、顺铂联合照射组,其中生脉姜黄散组和生脉姜黄散联合照射组按照药物高、低剂量(12.87,4.29 g·kg-1)各分为2个亚组。经处理后各组隔日测量移植瘤的最大径,计算肿瘤体积抑制率和抑瘤率。免疫组化、蛋白免疫印迹法检测CDK6蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDK6 mRNA表达。结果:与空白组比较,其余各组肿瘤生长都受到一定程度的抑制,与照射组比较,生脉姜黄散(12.87 g·kg-1)联合照射组、顺铂联合照射组肿瘤生长明显受到抑制(P0.05),肿瘤体积抑制率分别为54.94%,64.9%。与照射组比较,生脉姜黄散(12.87 g·kg-1)联合照射组、顺铂联合照射组CDK6 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:生脉姜黄散对人鼻咽癌裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,其增敏作用可能与细胞周期调控因子CDK6相关。