枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱及10种指标成分含量测定研究

目的建立枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱分析方法和复方中10种指标成分(辛弗林、槲皮素、桂皮酸、厚朴酚、柚皮苷、腺苷、香豆素、橙皮苷、和厚朴酚、新橙皮苷)含量测定方法,开展相关评价分析。方法采用HPLC法建立枳实薤白桂枝汤指纹图谱,开展相似度评价研究;测定复方中10个指标成分,分析复方中药材不同配伍对其量的变化影响;采用聚类分析等化学计量学方法,对获取相关数据进行分析,评价枳实薤白桂枝汤的质量控制相关指标的影响和价值。结果 10批样品的相似度在0.376～0.990,部分批次相似度大于0.9(5批),说明10批样品相似度差异较大。10批样品中S1～S3、S5、S6、S8、S10为一组,S4、S9为一组,S7单独为一组。共标定了30个特征峰,经主成分分析,主成分1～6是影响药材样品质量评价的主要因子;30个特征峰中对样品分组起关键作用的成分为21(新橙皮苷)、26、29(和厚朴酚)、3、23、17、30(厚朴酚)、5、24(香豆素)、28和7。含量测定结果显示,除槲皮素外,其余9种成分在测定的质量浓度范围内线性关系、精密度、稳定性和重复性良好;不同配伍会对药材中相关成分产生增加或抑制溶出的作用。结论所建立的HPLC方法可用于同时测定枳实薤白桂枝汤中10种化学成分的含量,该方法高效、准确、重复性好,可用于枳实薤白桂枝汤的质量控制和评价。     

配伍对半夏-厚朴药对中相关化学成分溶出的影响研究

目的:研究不同配伍比例对半夏-厚朴药对中厚朴活性成分溶出的影响。方法:建立半夏-厚朴药对指纹图谱,确定34个共有峰及属于厚朴药材的6个活性成分峰和7个未知成分峰;计算厚朴6个活性成分和7个未知成分的变化情况,分析不同配伍比例对13个指标成分的影响。结果:厚朴单煎液与半夏-厚朴药对合煎液中厚朴化学成分的溶出存在差异:在0∶1～1∶0配伍比例范围内,半夏的加入可使厚朴中绿原酸、厚朴酚及成分15、17、27的累计溶出量增加,可使紫丁香苷、木兰花碱、金丝桃苷、和厚朴酚及成分1、3、12、22的累计溶出量减少;在1∶6～4∶3配伍比例范围内,半夏的用量对木兰花碱的溶出影响属误差范围;半夏的加入可使金丝桃苷在1∶6～6∶1、成分1在2∶5～5∶1、成分12在2∶5～6∶1的配伍比例范围内变化百分率减少且具有显著性;半夏的加入可使绿原酸在2∶5～3.5∶3.5、厚朴酚在1∶6～5∶2、成分27在2∶5～6∶1的配伍比例范围内变化百分率增加且具有显著性。结论:半夏的用量对半夏-厚朴药对中厚朴相关成分的溶出有较大影响。     

养肝化瘀颗粒抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨养肝化瘀颗粒抗肝癌作用及其机制。方法建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组,模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,10 mg·kg~(-1),ip)组,养肝化瘀颗粒高、中、低(6,3,1.5 g·kg~(-1),ig)剂量组,连续给药10 d。观察各组小鼠的肿瘤生长情况及血清甲胎蛋白(AFP)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)水平;HE染色观察瘤组织的病理改变;Western Blot法检测β-连环蛋白(β-catenin)、活化型半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase3)蛋白表达,并进一步通过氯化锂(Li Cl)激动Wnt/β-catenin信号通路,研究其抑癌作用机制。结果养肝化瘀颗粒高、中、低剂量和阳性药5-FU作用后,抑瘤率分别为41.29%、50.03%、48.15%、52.83%;与模型组比较,各给药组血清肿瘤标志物AFP均有所下降(P0.01,P0.05),TSGF也有所下降,其中养肝化瘀颗粒中剂量组与5-FU组最为明显(P0.01);瘤组织出现不同程度的坏死,与模型组比较,养肝化瘀颗粒中剂量组最为明显。养肝化瘀颗粒可以下调HepG2细胞、瘤组织中β-catenin蛋白表达水平,上调Cleaved-Caspase3蛋白表达水平。进一步通过LiCl激动Wnt/β-catenin信号通路,与空白对照组比较,LiCl组β-catenin蛋白表达显著上调(P0.05),Cleaved-Caspase3蛋白表达则下调(P0.05);与LiCl组比较,LiCl+养肝化瘀颗粒含药血清(10%、20%浓度)组β-catenin蛋白表达显著下调(P0.01),Cleaved-Caspase3蛋白表达则显著上调(P0.01)。结论养肝化瘀颗粒显著抑制小鼠H22皮下移植瘤的生长,可能是通过抑制β-catenin蛋白表达,下调Wnt/β-catenin信号通路,进而诱导肝癌细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。     

TIR/BB环拟似物AS⁃1对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的：研究TIR/BB环拟似物AS?1对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法：雄性C57BL/6小鼠随机分成4组：假手术组(sham)、肾缺血再灌注组(RIR)、AS?1+肾缺血再灌注组(AS?1+RIR)、溶剂+肾缺血再灌注组(溶剂+RIR)。采用夹闭双侧肾动、静脉45 min，再灌注24 h的方法构建肾缺血再灌注损伤模型。AS?1+RIR组与溶剂+RIR组在术前30 min按剂量50 mg/kg 分别腹腔注射AS?1和溶剂，再灌注24 h后检测肾功能参数、血清炎症因子、凋亡指标及磷酸化NF?κB p65(p? p65)表达水平。结果：与假手术组比较，缺血再灌注组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、TNF?α、IL?6、p?p65、Cleaved caspase3及 Bax的表达水平均明显提高(P ＜ 0.01)，肾间质CD68+ 和MPO炎症细胞浸润增多，Bcl?2的表达量明显降低(P ＜ 0.01)，Bcl?2/Bax 的比值也降低。给予AS?1处理后可以使Scr、BUN、TNF?α、IL?6、p?p65、Cleaved caspase3、及Bax的水平明显降低(P＜0.01)， CD68+ 和MPO炎症细胞浸润减少；Bcl?2的表达量升高(P ＜ 0.01)，Bcl?2/Bax的比值也升高。结论：TIR/BB环拟似物AS?1对小鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与其抑制NF?κB信号通路的活化，产生抗炎作用和抗凋亡作用有关。