人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.     

趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。     

病毒感染性疾病中血小板减少机制的研究进展

血小板的生物学功能是参与凝血和维持血管系统完整性。血小板减少症见于多种血液系统疾病、放化疗损伤及药物相关性血小板减少,也可作为多种疾病的伴发症状,如肿瘤和感染等。病毒感染性疾病可导致血小板减少,其可能的机制主要有血小板生成减少和消耗增加,且不同病毒导致血小板减少的机制也不尽相同。本文对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、汉滩病毒、登革热病毒及人类免疫缺陷病毒(HIV)等病毒感染性疾病中血小板减少机制研究进展进行综述,特别是新近发现的注射新冠疫苗后发生血栓性血小板减少可能的机制,可为病毒感染性疾病中血小板减少的预防与治疗提供新的思路。     

CD155在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨CD155（poliovirus receptor,PVR）在结肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系。方法 应用组织微阵列技术和免疫组化Envision二步法,检测72例结肠癌组织及72例结肠正常组织中CD155的表达情况。结果 CD155在正常对照组无阳性表达,结肠癌组阳性表达率为41.18%,两组阳性表达率比较有显著性差异（P〈0.005）;不同分化程度、不同Dukes分期之间CD155的阳性表达率差异无显著性（P〉0.995,P〉0.750）,CD155阳性表达强度与分化程度及Dukes分期无相关关系（P=0.665,P=0.768）。结论 CD155在结肠癌发生的早期就已出现,并存在于结肠癌的整个发展进程,可以利用CD155与NK细胞激活性受体（CD226/CD96）的结合,进一步激活NK细胞对结肠癌的活化杀伤性作用,从而为结肠癌的免疫治疗提供新的思路。     

主动PBL方法在八年制《医学免疫学》教学中的应用与思考

八年制医学生的培养目标是培养临床医学博士。医学免疫学是与临床联系较为紧密的基础课之一,在教学中如何加强学生处理临床问题的逻辑思维能力和提高探讨临床表象之下深层次科学问题的科研思维水平,一直是免疫学教学的主要关注之一。PBL(Problem based learning,PBL)教学方法由美国的神经病学教授Barrows于1969年首创,是以问题为导向的教学方法,是以学生为中心的教育方式,而     

人黑色素瘤抗原MAGE-A10的基因克隆及原核表达

目的:扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A10(melanoma antigen A10)cDNA,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达. 方法:从人黑色素瘤细胞系LiBr中提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A10 cDNA,插入载体pMD18-T中. 测序正确后,克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达载体pGEX-4T-3-MAGE-A10,转化大肠杆菌BL21株进行表达. 经IPTG诱导表达,谷胱甘肽亲和层析获得重组目的蛋白. 结果:成功获得MAGE-A10编码基因并构建原核表达载体,测序结果与GenBank收录序列相一致. 可以获得部分可溶性的原核重组蛋白,经亲和层析和分析,证实融合蛋白占总量的58.9%. SDS-PAGE分析其相对分子质量(Mr)为67 000,Western blot证实为目的蛋白. 结论:成功获得MAGE-A10 cDNA,构建得原核表达载体并获得高效表达. 本研究为制备MAGE-A10 mAb及研究MAGE-A10可能参与肿瘤发生发展的机制奠定了基础.     

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM.以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1 ×10-7,且亚类均为IgG1(κ).抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC.FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7.HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600.在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景.     

细胞因子诱导的imDCs鉴定及免疫学功能研究

目的:分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)的免疫学功能,诱导同种异体复合组织移植局部免疫耐受性。方法:采用细胞因子诱导培养黏附法,取大鼠骨髓前体细胞,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4细胞因子诱导下培养7 d,收集贴壁细胞光学显微镜观察imDCs的形态学特征,用质量分数2%锥虫蓝染色检测活性细胞率;应用流式细胞仪分析imDCs表面标志分子;MTT比色法测定imDCs与同种异体T淋巴细胞混合培养后T淋巴细胞的增殖能力。结果:制备诱导培养的imDCs具有形态不规则、表面粗糙层叠状皱褶、胞质突起短而多、树枝样分叉明显等典型形态特征;活性细胞率高达93%;表面较特异标志分子OX62为(61.08±4.86)%,OX62阳性细胞表达CD80、CD86、组织相容性复合体-Ⅱ表达率分别为(3.56±0.73)%、(5.38±1.09)%、(6.45±0.74)%,均为较低表达;imDCs对同种异体T淋巴细胞基本无刺激增殖能力。结论:用细胞因子诱导培养黏附法取骨髓前体细胞,可较快分选出活性和纯度较高、数量足够的imDCs,为同种异体复合组织移植诱导免疫耐受防止排斥反应的研究奠定良好的基础。     

肾综合征出血热患者体内可溶型和膜型 TNF-α,FasL,TRAIL表达水平的研究

目的观察HFRS患者体内可溶型和膜型凋亡诱导配体的水平,探讨凋亡诱导配体与HFRS免疫病理损伤的关系.方法应用夹心ELISA方法检测了HFRS患者血浆中TNF-α、sFasL和sTRAIL的水平,同时利用流式细胞术检测了膜型凋亡诱导配体在HFRS患者PBMC上的表达.结果膜型凋亡诱导配体在健康对照的PBMC上几乎不表达,HFRS患者PBMC上TNF表达率为(0.90±0.05)%;FasL 的表达率为(19.83±6.40)%;TRAIL的表达率为 (15.79±4.73)%.HFRS患者急性期血浆中的TNF(77.69±21.11)pg/mL、 sFasL(40.69±6.75) pg/mL 和 sTRAIL(19.04±5.54) pg/mL水平分别是健康对照的4.8倍(16.26±14.09) pg/mL、6.0倍(6.76±1.01) pg/mL和1.8倍(10.72±1.41) pg/mL.结论 HFRS患者体内高表达的凋亡诱导配体可能与HTNV感染所致的免疫病理损伤有关.     

HFRS患者血浆中TNF、sIL-2R、IL-6、IL-4和IFN-γ水平的变化及其意义

目的 :探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者血浆中的TNF、sIL 2R、IL 6、IL 4和IFN γ水平的变化及其与血清中丙氨酸转氨酶ALT活性水平的相关性。方法 :利用双mAb夹心ELISA法检测HFRS患者血浆中细胞因子的水平 ,应用美国RA 10 0 0全自动生化仪检测患者血清中ALT的水平。结果 :HFRS患者血浆中TNF、IL 6、IL 4、IFN γ和sIL 2R水平分别为 (95 .82± 12 .0 4 )、(36 2 .4 6± 14 1.2 6 )、(17.76± 3.5 2 )、(116 .18± 19.80 )ng/L及 (89882 0± 12 72 0 0 )U/L ,健康对照组依次为 (17.89± 1.6 8)、(4 3.81± 18.0 8)、(4 .86± 1.14 )、(7.5 7± 2 .4 1)ng/L及(6 6 730± 2 96 90 )U/L、(P <0 .0 1) ;患者血清中ALT的水平也显著升高 ,为正常对照的 4 .4倍。通过相关性分析 ,发现TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平与患者血清中ALT的水平高度相关 (P <0 .0 1)。结论 :HFRS患者体内TNF、sIL 2R、IL 6和IFN γ水平显著升高 ,且与患者体内ALT水平的升高高度相关 ,提示HTNV感染所致肝脏的损伤可能与上述细胞因子水平的升高有关