基于网络药理学探讨柴胡加龙骨牡蛎汤治疗帕金森病伴发抑郁的作用机制

目的:基于网络药理学研究方法,探究柴胡加龙骨牡蛎汤(Chaihu-jia-Longgu-Mul-decoction,CLMD)治疗帕金森病伴发抑郁(Parkinson’s disease with depression,PDD)的可能作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、PubChem数据库、Swiss平台筛选CLMD的生物活性成分,并预测其靶点;应用Genecards数据库分别收集"帕金森病(Parkinson’s disease,PD)""抑郁(Depression)"的疾病靶点;利用在线韦恩图绘制平台Venny 2.1对PDD与CLMD的靶点进行映射,运用STRING平台及Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选获得核心靶点;通过DAVID平台对核心靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集和基因本体(GO)富集分析,探究可能的生物过程与信号通路;应用Cytoscape软件进一步筛选CLMD治疗PDD的关键成分,并构建"药物-成分-靶点-通路"网络。结果:预测得到CLMD治疗PDD的关键成分4个:槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、山柰酚;核心靶点33个:AKT1、MAPK3、TP53、ALB、IL-6、VEGFA等。GO和KEGG富集分析结果显示,CLMD治疗PDD主要涉及凋亡、细胞增殖、转录、蛋白磷酸化等生物过程,可能通过酶结合、蛋白结合、转录因子结合等分子功能在蛋白质复合体、细胞质、细胞核、线粒体等多部位发挥作用,其作用机制可能与FOXO、PI3K-Akt、HIF-1、MAPK、VEGF、m TOR等信号通路有关,涉及AKT、m TOR、PTEN、MAPK等多个核心靶点。结论:CLMD治疗PDD具有"多成分-多靶点-多途径"的特点与优势,本研究为进一步研究CLMD治疗PDD的物质基础与分子机制提供了理论依据。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对帕金森病伴发抑郁模型大鼠的神经保护作用及对AMPK/mTOR信号通路的影响

目的 观察柴胡加龙骨牡蛎汤（CLMT）对帕金森病伴发抑郁（PDD）模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用，并基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK/mTOR）信号通路探讨其作用机制。方法 80只雄性SD大鼠，随机选取10只作为正常组，其余采用长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮联合慢性不可预见性温和应激（CUM）建立PDD大鼠模型，将造模成功的PDD大鼠随机分为模型组、西药组（多巴丝肼0.032 g·kg^-1+盐酸氟西汀0.002 g·kg^-1）、CLMT低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1），每组10只，正常组和模型组予以等体积生理盐水灌胃，连续4周。旷场实验、爬杆实验评估各组大鼠行为学变化；高效液相色谱法（HPCL）测定脑脊液中多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量；苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠黑质DA能神经元病理改变；免疫组化法（IHC）检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性表达；免疫荧光法（IF）检测黑质α-突触核蛋白（α-synuclein）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测纹状体微管相关蛋白1轻链3（LC3）、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠旷场实验水平运动总距离及中央区域活动时间均明显减少（P<0.05，P<0.01），爬杆时间明显缩短（P<0.01），评分升高（P<0.01），脑脊液中DA、5-HT含量减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组水平运动总距离明显增加及中央区域活动时间均增加（P<0.05，P<0.01），爬杆时间延长（P<0.05），评分下降（P<0.05，P<0.01），DA及5-HT含量增加（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，模型组大鼠黑质DA能神经元数量明显减少，胞体缩小且排列疏松，α-synuclein荧光表达显著增强（P<0.01），TH阳性表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组黑质DA能神经元数量增加，胞体增大，α-synuclein荧光表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），TH表达显著增加（P<0.01）。与正常组比较，模型组纹状体LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达明显降低（P<0.05，P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达均明显增加（P<0.05，P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.01）。结论 CLMT可抑制鱼藤酮神经毒性，发挥神经保护作用，提高DA水平，从而改善帕金森病大鼠抑郁状态，其机制可能与调控AMPK/mTOR信号通路，激活自噬，促进异常聚集的α-synuclein降解有关。     

大定风珠对帕金森病模型小鼠脑黑质小胶质细胞活化及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨大定风珠对帕金森病神经损伤的影响及可能作用机制。方法 84只C57BL雄性小鼠随机分为正常组、模型组、多巴丝肼组及大定风珠低、中、高剂量组，每组14只。除正常组外，其余各组小鼠每天腹腔注射鱼藤酮2.5 mg/kg连续28天复制帕金森病小鼠模型。造模同时大定风珠低、中、高剂量组分别给予大定风珠混悬液5、10、20g/（kg·d）灌胃，多巴丝肼组给予多巴丝肼混悬液0.034 g/（kg·d）灌胃，正常组和模型组小鼠给予生理盐水0.08 ml灌胃，均每日1次，共28天。灌胃结束后对各组小鼠进行旷场实验（包括水平运动总距离、中央区域运动总距离、静止时间）、爬杆实验（包括转身时间及爬杆总时间）评价小鼠行为学改变；高效液相色谱法检测小鼠纹状体多巴胺（DA）、5羟色胺（5-TH）水平；HE染色法观察小鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经细胞病理改变；免疫组化法检测黑质致密部、纹状体酪氨酸羟化酶（TH）表达；免疫荧光法检测黑质致密部α-突触核蛋白（α-synuclein）、离子钙结合衔接分子1 (Iba-1)表达；蛋白免疫印迹法检测纹状体Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子88 (MyD88...     

赵英强教授以疏肝健脾法治疗冠心病经验

冠心病是中老年人群的高发病，病死率高，预后不良，且当前尚无根治的药物，属于中医学“胸痹、胸痛、真心痛”等范畴，中医药治疗冠心病进展较多，疗效显著。赵英强教授精研古代医家“五行理论”的治病经验，认为胸痹的发病与心肝脾三脏功能失调相关，肝气郁结为发病之始，脾失运化为发病的关键，据此提出了“疏肝健脾”的治疗方法，临床上以疏肝解郁、泻肝养肝、健脾化痰、温阳豁痰、调和心脾、活血化瘀法治疗胸痹，效果颇佳。     

黄芩素抑制小胶质细胞活化及保护SH-SY5Y神经细胞的机制

目的 探讨黄芩素（BAI）对脂多糖（LPS）激活的BV-2细胞条件培养基下SH-SY5Y细胞损伤的干预作用及机制。方法 用LPS 1 mg?L^-1激活BV-2细胞建立LPS组条件培养基，同时设置空白组、BAI低、中、高浓度组（4、8、16 μmol?L^-1），使用各组条件培养基培养SH-SY5Y细胞。通过细胞增殖与活性检测（CCK-8）试剂盒测定干预后各组BV-2细胞的细胞活力，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组BV-2细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量；采用免疫组化（IHC）观察SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白（α-syn）、酪氨酸羟化酶（TH）蛋白表达情况，免疫荧光（IF）法观察SH-SY5Y细胞中核转录因子-κB p65蛋白（NF-κB p65，以下简称p65）核转移情况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SH-SY5Y细胞Toll样受体4（TLR4）、p65、磷酸化（p）-p65、髓样分化因子88（MyD88）蛋白表达情况。结果 与空白组比较，LPS组中BV-2细胞活力显著降低（P<0.01），细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著升高（P<0.01）；与LPS组比较，BAI低、中、高浓度组细胞活力显著升高（P<0.01），细胞上清液中TNF-α均显著降低（P<0.01），BAI高浓度（16 μmol?L^-1）组细胞上清液中IL-6含量明显降低（P<0.05），BAI中、高浓度组细胞上清液中IL-1β含量显著降低（P<0.01）。条件培养基处理SH-SY5Y细胞的结果显示，与空白组比较，LPS组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达向核内聚集，TH蛋白表达显著下降（P<0.01），α-syn、TLR4、MyD88、p-p65蛋白表达均明显升高（P<0.05，P<0.01）；与LPS组比较，BAI低、中、高浓度组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达逐渐分散至细胞质中，TH蛋白表达均显著升高（P<0.01），α-syn蛋白表达均显著降低（P<0.01），BAI高浓度组TLR4、MyD88、p-p65蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），BAI中浓度组p-p65和MyD88蛋白表达均明显降低（P<0.05），BAI低浓度组MyD88蛋白表达明显降低（P<0.05）。各组p65蛋白表达差异无统计学意义。结论 BAI能够抑制BV-2细胞激活，从而抑制LPS造成的炎症反应，进而进一步抑制炎症对SH-SY5Y细胞的损伤，其作用机制可能在于调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，减轻炎症反应，发挥神经保护作用。