鱼腥草叶片总蛋白的提取及双向电泳体系的建立

[目的]比较鱼腥草叶片蛋白质提取方法,建立适用于鱼腥草蛋白质组双向电泳分析方法.[方法]以鱼腥草叶片为材料,分别采用凯基试剂盒、三氯乙酸/丙酮沉淀法、尿素/硫脲提取法及酚法4种方法提取鱼腥草叶片总蛋白,使用Bradford 法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)分析,所得2-DE凝胶图片采用PDQuest软件进行分析.[结果]4种方法的提取率分别为2.90、2.55、3.90、3.80 mg/g,分别检测到186、153、356、315个蛋白点,酚法提取蛋白质的2-DE图谱效果较好,结果的重复性较好.[结论]不同方法提取鱼腥草叶片总蛋白的2-DE结果存在差异,以酚法提取的2-DE效果较好,适用于鱼腥草叶片蛋白质组分析.     

小檗碱对LPS、IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-10的影响

目的 观察小檗碱（Berberine,Ber）对脂多糖（LPS）以及白介素-4（IL-4）诱导的RAW264.7细胞株分泌炎症因子中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、抑炎因子白介素（IL-10）的影响,初步探讨Ber对巨噬细胞极化的影响。方法 噻唑蓝（MTT）法测定小檗碱对RAW264.7细胞增殖的影响,选取半数抑制浓度（IC50）以下的小檗碱浓度作为干预剂量;酶联免疫法（ELISA）检测小檗碱对LPS以及IL-4不同诱导状态下RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-10的影响。结果 小檗碱对RAW264.7细胞的IC50在400～800 μmol·L-1之间。LPS作用下RAW264.7细胞促炎因子TNF-α分泌量明显升高,Ber（剂量分别为5,10,20 μmol·L-1）有显著的抑制作用,并有剂量依赖关系（均P＜0.01）;而LPS刺激下细胞IL-10分泌量也明显升高（P＜0.05）,而Ber仅在20 μmol·L-1剂量下表现抑制作用。在IL-4作用下,RAW264.7细胞抗炎因子IL-10分泌量明显升高,Ber（剂量分别为5,10,20 μmol·L-1）有显著的抑制作用,并呈现剂量依赖关系（均P＜0.01）;IL-4作用下TNF-α分泌量明显降低（P＜0.05）,Ber对TNF-α分泌量的影响无剂量依赖性。结论 Ber对LPS刺激下促炎因子TNF-α的分泌具有抑制作用,对IL-4诱导下IL-10分泌量的升高也有抑制作用,提示Ber在巨噬细胞极化过程中有调节作用。     

姚魁武教授运用养阴定悸汤治疗室性早搏经验撷英

室性早搏导致的心悸在临床很为常见,姚魁武教授按照中医理论将其按照"心悸"予以论治。姚魁武教授认为室性早搏所致的心悸与心阳失守、心血失充、心神不藏相关。其病位在心,而不止于心。治疗以"燮理阴阳,安神定悸"为治疗大法,重视宗气、阳气与神志对于心脉的调摄作用。选药处方以大力滋阴补血,兼以温复心阳、安神定悸为务,并根据多年临床经验,以炙甘草汤与桂枝甘草龙骨牡蛎汤合方化裁为养阴定悸汤,并依据证情变化予以进退。     

抗瘤增效方浓缩工艺研究

目的:研究抗瘤增效方中指标性成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱在浓缩过程中的热稳定性,制定浓缩工艺参数,并以特征图谱法进行验证。方法:建立高效液相色谱(HPLC)法检测抗瘤增效方中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱的含量。在60～90℃范围内,考察常压和减压浓缩状态下抗瘤增效方的热稳定性规律,以确定提取液的浓缩工艺参数,并建立HPLC特征图谱对浓缩工艺进行进一步验证。结果:在60～90℃范围内,常压或减压浓缩8 h过程中,毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱的转移率保持稳定。结合生产实践,初步确定抗瘤增效方的浓缩工艺为70℃减压浓缩。所建立的HPLC特征图谱含有10个共有峰(包含毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱),特征图谱相似度0.93,峰面积变化率20%。结论:抗瘤增效方浓缩过程中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和盐酸小檗碱均无明显的热敏性,70℃减压浓缩的工艺条件合理、可行。