黄连NRAMP3基因的克隆与生物信息学分析＊

目的 克隆黄连（Coptis chinensis Franch.）中自然抗性相关巨噬细胞蛋白（Natural Resistance-Associated Macrophage Protein，NRAMP）的编码基因，并进行生物信息学分析。方法 从黄连基因组中比对NRAMP3基因，并根据比对的基因序列设计特异性引物，经PCR扩增得到的黄连NRAMP3编码序列，进行克隆、测序和生物信息学分析，并利用qPCR技术对黄连NRAMP3基因进行时空表达分析。结果 得到黄连NRAMP3基因cDNA序列，全长1617 bp，编码538个氨基酸，通过与GenBank上的其他蛋白序列比对，将其命名为CcNRAMP3；序列分析显示，黄连NRAMP3基因编码的氨基酸序列包含一个典型的NRAMP结构域（PF01566），有12个跨膜结构域，亚细胞定位于液泡膜上，具有疏水性强的特点。二级结构中肽链构象主要包括α-螺旋与无规则卷曲两部分；三级结构模型具有葡萄球菌锰转运突变体（MntH）的晶体结构。利用系统进化关系分析推测它可能具有转运重金属元素Cd功能。对黄连NRAMP3基因的组织表达分析表明，CcNRAMP3基因在黄连叶片中表达量最高。在遭受镉胁迫时，在须根中表达量先升高后降低，该基因很可能主要在根部对镉进行响应并发挥作用。结论 本研究首次通过克隆得到黄连NRAMP3基因，并运用生物信息学方法对其理化性质、结构特征等进行了分析预测，这些结果将为黄连NRAMP3基因的功能研究以及其对镉转运的调控机制提供理论依据和基因资源。     

丹参酮生物合成相关SmERF108转录因子的鉴定及其靶基因分析＊

目的 鉴定与丹参酮合成相关转录因子AP2/ERF家族中SmERF108转录因子，并分析转录因子SmERF108的靶基因。方法 利用生物信息学在线分析平台如NCBI、PFAM等分析SmERF108的序列特征；MEGA-X软件用于构建SmERF108与不同功能转录因子的系统进化树；拟南芥原生质体转化法鉴定SmERF108蛋白的亚细胞定位；通过实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）对SmERF108基因在丹参不同器官和组织差异表达进行检测；利用酵母体系对SmERF108的转录激活活性进行探究并用酵母单杂技术确定其靶基因。结果 SmERF108具有典型的AP2/ERF保守结构域，属于ERF-B3亚组，系统进化树和保守基序分析显示SmERF108与丹参中SmERF128、青蒿中AaERF2亲缘关系较近且保守基序分布一致；亚细胞定位显示SmERF108蛋白定位于细胞核；SmERF108基因在周皮中表达最高，且呈现周皮（R1）>韧皮部（R2）>木质部（R3）的规律；酵母自激活验证SmERF108具有转录激活活性，同时酵母单杂交确认其能与关键酶基因SmCPS1启动子结合。结论 鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF108，生物信息学分析及差异表达分析预测与丹参酮合成相关，分子互作初步证实靶基因为SmCPS1二萜环化酶。     

PBL联合CBL教学法在针灸科住院医师规范化培训中的应用

目的探索基于问题的教学模式(PBL)联合基于案例的教学模式(CBL)教学法在针灸科住院医师规范化培训(规培)中的教学效果。方法 144名规培学员随机分为试验组和对照组,每组72名。试验组采用PBL联合CBL教学法,对照组采用基于讲授式的教学模式(LBL)教学法。规培结束后,对两组规培学员进行出科成绩考核及问卷调查两种方式评价教学效果。结果试验组考核成绩优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。问卷调查结果显示,试验组满意率为75.0%,对照组满意率为41.7%,差异有统计学意义(P0.05);试验组对带教老师质量评价反馈的分数高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);试验组在激发学习兴趣、提高自学能力、提高沟通和协作能力、培养临床思维、提高临床实践能力、提高分析和解决问题的能力方面均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PBL联合CBL教学法在针灸科规培中取得良好效果,是胜任于提高中医类规培学员在针灸科规培的临床综合能力的教学模式探索。     

人参皂苷F2对过氧化氢诱导细胞损伤的保护作用

目的研究人参皂苷F2对人胚肾293(HEK-293)细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以0.4 mmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导HEK-293细胞氧化应激,1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2预处理,MTS法检测细胞活力;DCFH-DA荧光探针考察细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测丙二醛(malondialchehyche, MDA)水平和抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性;蛋白质印迹法(Western blot)和qRT-PCR检测核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)/抑制蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)信号的蛋白和mRNA表达量。结果 1.25、5和20μmol/L人参皂苷F2处理正常HEK-293细胞后对细胞无毒性或促增殖作用;人参皂苷F2预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,各组间差异均有统计学意义(P0.05);氧化损伤组的DCF荧光较对照组相比显著增强(P0.05),人参皂苷F2预处理后细胞ROS相对量呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05);人参皂苷F2预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P0.05),SOD和GSH-Px活性显著高于损伤组(P0.05),5和20μmol/L人参皂苷F2能显著提高CAT活性(P0.05);人参皂苷F2处理后,Nrf2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P0.05),Keap1的mRNA和蛋白表达量显著低于损伤组(P0.05)。结论人参皂苷F2具有细胞保护作用,可降低HEK-293细胞ROS和MDA水平,提高抗氧化酶活性,其作用机制可能是通过调节Nrf2/Keap1信号通路以抵抗过氧化氢导致的细胞氧化应激损伤。     

宣白承气汤联合西医常规治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期系统评价

目的系统评价宣白承气汤联合西医常规治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的临床疗效及安全性。方法计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知识资源总库(CNKI)、中国学术期刊数据库(万方数据)、中文科技期刊数据库(维普网)、Pub Med,纳入宣白承气汤及其加减联合西医常规治疗与单纯西医常规治疗比较治疗AECOPD的随机对照试验,采用Cochrane系统评价手册进行文献质量评价和数据提取,采用RevMan5.3对临床疗效指标进行Meta分析。结果纳入文献12篇,Meta分析结果显示:试验组总有效率高于对照组,差异有统计学意义[OR=4.83,95%CI(3.09,7.54),P0.000 01];试验组较对照组可显著降低中性粒细胞百分比、C反应蛋白等炎性指标和动脉血二氧化碳分压,显著提高第一秒用力呼气容积占预计值的百分比、用力肺活量占预计值的百分比、第1秒用力呼气容积/用力肺活量等肺功能指标和动脉血p H值、动脉血氧分压,差异均有统计学意义。纳入文献均未报道严重不良反应。结论宣白承气汤联合西医常规加减治疗AECOPD疗效显著,但由于纳入文献量和样本量较少,研究质量较低,其临床疗效与安全性仍需高质量的多中心、大样本、随机对照试验进一步验证。     

黏膜性类天疱疮一例

患者男，87岁，因面颈部反复红斑、水疱、结痂伴瘙痒2年，加重2个月，于2019年3月就诊。患者2年前出现面部、颈前区散在红斑、水疱，自行破溃，遗留疼痛性糜烂面及结痂。就诊于外院，面部皮疹组织病理提示，真皮浅层较多淋巴浆细胞及组织细胞浸润，局部纤维细胞增生；免疫组化示CD68阳性……     

表面肌电生物反馈疗法结合吞咽训练治疗脑卒中患者吞咽障碍的疗效

目的:观察表面肌电生物反馈治疗结合吞咽训练治疗脑卒中患者吞咽障碍的效果。方法:选择2018年2月至2019年12月在广州市第一人民医院康复医学科和神经科接受治疗的65例脑卒中后吞咽障碍患者,根据患者意愿分为吞咽训练组33例和肌电生物反馈组32例。吞咽训练组采用吞咽训练,肌电生物反馈组在吞咽训练的基础上采用表面肌电生物反馈疗法。在患者接受治疗前后均采用标准吞咽功能评估法(SSA)及视频吞咽造影功能障碍量表(VDS)对患者的吞咽功能进行测定,并比较两组疗效。结果:与治疗前比较,治疗后两组SSA及VDS评分均降低(P<0.05),肌电生物反馈组降低更明显(P<0.05)。肌电生物反馈组有效率高于吞咽训练组(87.5%比60.6%,P<0.05)。结论:表面肌电生物反馈疗法结合吞咽训练能有效改善脑卒中患者吞咽障碍,且效果明显优于单纯吞咽训练。