鼠切牙根端牙源性上皮细胞的体外培养及生物学特征

目的:体外分离培养鼠切牙根端上皮细胞并观察其体外生物学特征。方法:体视显微解剖获取大鼠下颌切牙根端组织,组织块贴壁法培养分离牙源性上皮细胞,形态学结合免疫细胞化学观察其体外生物学特征。结果:牙源性上皮细胞自切牙唇侧颈环处迁出,呈圆形或方形的典型上皮细胞形态,Brdu标记显示其较强的体外增殖活力,上皮干细胞标记分子P63强阳性表达;随着传代,细胞趋向终末分化,碱性磷酸酶染色阳性。结论:鼠切牙唇侧颈环处可能存在牙源性上皮干细胞或前体细胞,为进一步研究牙源性上皮分化和牙组织工程提供细胞来源。     

兔骨髓基质干细胞自体嚼肌内移植异位成骨实验研究

目的：观察骨髓基质干细胞成骨向分化诱导后植入嚼肌内异位成骨的过程。方法：从兔髂骨分离骨髓基质干细胞，经体外诱导分化，与磷酸三钙／羟基磷灰石（tricalcium phosphate／hydroxyapatite，TCP／HA）支架复合，植入兔自体嚼肌内，形态学、免疫细胞化学、组织学观察其成骨特征。结果：体外培养的兔骨髓基质干细胞性状稳定，经矿化诱导培养的骨髓基质干细胞表现为成骨细胞分化，表达Ⅰ型胶原蛋白，与支架材料复合植入自体嚼肌内可见成熟骨组织形成。结论：利用骨髓基质干细胞为种子细胞植入嚼肌内开展功能性组织工程化颌骨移植方法可行。     

牙本质非胶原蛋白诱导颅神经嵴干细胞向成牙本质细胞表型分化

目的探讨颅神经嵴干细胞(CNCSC)用于牙再生研究的可行性,观察牙本质基质非胶原蛋白(DMNCP)对CNCSC的成牙本质样细胞表型分化的影响。方法小鼠神经管组织块无血清条件培养法获取颅神经嵴干细胞,以DMNCP体外诱导CNCSC的分化,形态学、免疫细胞化学、茜素红特染等方法,分别从Ⅰ型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙结节形成情况,鉴定CNCSC的成牙本质样细胞表型。结果诱导后的CNCSC呈现I型胶原、DSPP阳性表达,ALP活性增高,钙结节形成,具有成牙本质细胞表型特征。结论DMNCP具有诱导CNCSC向成牙本质细胞表型分化的作用,利用CNCSC开展牙再生研究是可行的。     

颞下颌关节紊乱病动物模型的建立及其评价

目的探讨经颧弓后上牵引下颌，建立颞下颌关节紊乱病（TMD）动物模型的可能性。方法21只新西兰大白兔（实验组15只，对照组6只），单侧经颧弓后上牵引下颌，观察关节盘、关节间隙及关节软骨的组织病理学改变。结果实验组术后2周4只动物关节盘移位或变形；4周时5只动物关节均发生粘连，关节软骨发生不同程度表层破裂、缺损或排列紊乱；6周时4只动物关节盘严重变形，5只动物关节发生严重粘连，骨小梁排列紊乱。对照组均正常。结论经颧弓后上牵引下颌是研究TMD病理机制一种较可靠的动物模型。     

肿瘤相关巨噬细胞调控基质金属蛋白酶促口腔鳞癌细胞侵袭转移的实验研究

目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）对口腔鳞癌细胞基质金属蛋白酶（matrix metall-proteinases,MMPs）表达以及其对口腔鳞癌细胞侵袭转移的影响。方法：用佛波脂（phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）刺激人单核／巨噬细胞株 THP-1促其形成 TAMs,收集其上清液作为 TAMs 条件培养基培养口腔鳞癌细胞,应用实时定量 RT-PCR、Western blot 方法检测 TAMs 条件培养基作用前后口腔鳞癌细胞 MMPs 表达的差异,应用 Transwell 侵袭实验检测口腔鳞癌细胞侵袭转移能力的差异。结果：THP-1细胞在 PMA 和 M-CSF 作用后贴壁生长,分化成 TAMs。口腔癌细胞在 TAMs 条件培养基作用48 h 后,MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA 的表达水平显著增高,相同条件下蛋白质的表达水平也明显增高。TAMs 条件培养基作用24 h 后的口腔鳞癌细胞侵袭转移能力显著增强。结论：TAMs 可以上调口腔鳞癌中 MMPs 的表达并促进其侵袭转移。     

经颧弓后上牵引下颌后关节盘后区适应性改建的实验研究

目的:观察经颧弓后上牵引兔下颌后颞下颌关节盘后区是否发生适应性改建及其意义.方法:在兔下颌角和颧弓处打孔后放置牵引装置,向后上方牵引下颌,于术后2、4、6 周分别处死动物,采用组织学及免疫组化方法观察负荷下关节盘后区组织的改变.结果:术后2 周兔牵引侧关节盘移位或变形,盘后区胶原密度增加;随着负荷时间的延长,关节后区成纤维细胞密度明显下降,关节盘后区结缔组织变得致密,组织内出现少量软骨样细胞出现,而对照组标本未见明显组织学改变.与对照组相比,术后2 周移位的关节盘功能区软骨基质、蛋白聚糖及Ⅱ型胶原呈弱表达,阿辛蓝染色变淡;移位至负重区的关节盘后区软骨基质、蛋白聚糖表达比对照组有所增加.随着关节负荷时间的延长,移位至负重区的关节盘后区软骨基质、蛋白聚糖及Ⅱ型胶原逐渐增强.结论:经颧弓后上牵引下颌后,关节盘后区组织内软骨基质合成增加,并有少量软骨细胞出现,发生改建以适应关节功能.     

P63蛋白在人胚涎腺发育中的表达及意义

目的探讨P63蛋白在涎腺上皮干细胞发育中的作用及干细胞存在的可能位置。方法收集不同发育阶段的合法流产人胚24例、正常涎腺组织标本10例,对切片行常规HE染色和免疫组织化学SP法染色。结果组织切片见涎腺发育从早期上皮芽增生分支形成树枝状上皮条索,然后形成管腔,最终分支末端细胞增生膨大分化为导管、肌上皮和腺泡细胞。P63的表达从胚胎早期上皮芽中的广泛阳性表达到阳性细胞逐渐减少,呈现区域化散在分布特征,正常成人涎腺中阳性表达细胞仅少量存在于闰管、分泌管、排泄管管壁基底侧。结论P63在维系涎腺上皮性干细胞的生存和分化状态中可能具有重要作用,正常成人涎腺上皮性干细胞仅少量存在于导管管壁基底侧。     

低浓度尼古丁对大鼠硬腭软组织缺损愈合的影响

背景：最新系列研究发现低浓度尼古丁具有促进血管生成,加速皮肤伤口愈合的作用,但低浓度尼古丁能否在颌面部软组织创伤修复中尤其是口腔黏膜创伤修复中发挥作用目前还不清楚。 目的：观察低浓度尼古丁对大鼠硬腭黏膜缺损修复的影响。 方法：Wistar大鼠65只,于硬腭第一磨牙近中至第三磨牙远中的黏膜作一直径为3 mm的圆形切创缺损。造模后局部给药,大鼠随机分成低浓度尼古丁＋凝胶组、凝胶组、空白对照组,每组动物分别在3,7,10,14 d处死,苏木精-伊红染色观察组织愈合过程,并通过大体标本结合图像测量分析比较各组间伤口愈合差异。 结果与结论：修复后3 d各组间愈合情况差异无显著性意义;修复后7,10 d组低浓度尼古丁＋凝胶组愈合快于凝胶组和空白对照组（P 〈0.05）;修复后14 d各组创面已基本愈合,各组间差异无显著性意义。提示低浓度尼古丁可能具有促进大鼠硬腭膜缺损修复的作用。