ADPRT-MEDIATED DECREASE OF CELLULAR NAD CONTENT AND THE DETECTION OF CHEMICALLY INDUCED DNA DAMAGE DEVELOPMENT OF A NEW SHORT-TERM SCREENING TEST FOR MUTAGENS

It was found that the DNA-damaging agents N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG),methyl-methanesulphonate(MMS)and 4-nitroquinoline-N-oxide(4NQO)could stimulate ADP-ribosyl transferase(ADPRT)activity and reduce the cellular NAD content in a dose-dependent way.The reduction of NAD after DNA damage could be partially or completelyprevented by ADPRT inhibitors,3-aminobenzamide or nicotinamide,which showed noinfluence on reduction of NAD induced by metabolic blocking agents.Therefore,a simpleand specific method to detect DNA-damaging mutagens by measuring ADPRT-mediateddecrease of cellular NAD content was explored.Using β-naphthofiavone,a mixed functionoxygenase inducer,together with induced or uninduced human amnion FL cells,it was foundthat aflatoxin B_1,benzo(a)pyrene,2-acetylaminofluorene,9,10-dimethylanthracene andethylcarbamate could induce the ADPRT-mediated decrease of cellular NAD content,while4-acetylaminofluorene,anthracene,isopropyl-N-(3-chlorophenyl)-carbamate,β-propiolactone,γ-butyrolactone,cyclophosphamide and safrol could not.The results indicate that this isa cheap and specific method to detect DNA damage caused by chemical carcinogens/mutagenswith a spccificity approaching that of the unscheduled DNA synthesis assay.     

2,5—二氯硝基苯的SOS突变及其分子机制

1,5一一氯硝基苯(1,5—DCNB)是一种新合成的农用氮肥增效剂。它的遗传毒理作用及其机制不够明了。本工作在S.typhim-urium TA1535、TA100、TA98、TA1535/PSK1002和E.Coli GW1104、GW1017上研究了2.5—DCNB的致突变与SOS反应关系及其作用机制。结果如下:(1),2,5—DCNB(50～2,500ηg/ml)引起TA100的回变菌数随剂量加大而增多,最大回变值为对照的8.66倍,但不能引起TA98的回变。(2),2,5—DCNB(50～2,500ηg/ml)不能引起TA     

真核生物水稻的苯丙氨酸氨解酶基因在原核生物大肠杆菌BL21DE3中的表达

目的：研究真核生物水稻的苯丙氨氨氨解酶基因在原核生物大肠杆菌中表达及其规律，为酶替代疗法治疗苯丙酮尿症及某些肿瘤治疗奠定基础。方法：根据水稻苯丙氨酸氨解酶基因序列，在ＡＴＧ下游１３１－１１２碱基处设计引物：５’ＴＧＧＡＴＣＴＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴ３’，对质粒ｐＵＣ１９－ｒＰＡＬ－１－ｃＤＮＡ（日本国立农业生物研究所Ｅｉ－ｉｃｈｉＭｉｎａｍｉ惠赠）中的ｒＰＡＬ－１－ｃＤＮＡ进行反向测序，根据ｃＤＮＡ测序结果及质粒ｐＥＴ－２８系列中阅读框架结构选定ｐＥＴ－２８ｃ作为载体，用ＥｃｏＲＩ酶将其从多克…     

用大肠杆菌CM89菌株对三种化学物抗突变作用的研究

本文以 E.coli CM891为靶细胞,用细菌内抗突变作用模式研究了肉桂醛,鞣酸,二烯丙三硫的抗4NQO 突变性及其作用机制。含质粒 pKM101的 CM891的高抗株(抗50μg/ml 氨苄青霉素)能提高该菌株的自发突变率和4NQO 诱发的突变率以及对鞣酸的杀伤抗性。肉桂醛的抗突变性不依赖质粒 pKM101效应,但与暂时性生长延搁有关。鞣酸及二烯丙三硫的抗突变机制可能包括质粒 pKM101介导的易误修复。上述三种化学物中每二种联合应用均显示抗4NQO 突变性的协同效应及对靶细胞的毒性杀伤作用。     

THE EFFECTS OF TRANSCRIPTION AND TRANSLATION INHIBITION ON NONTARGETED MUTAGENESIS IN MAMMALIAN CELLS

在研究ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变时相变化的基础上，以ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）和蛋白质合成抑制剂放线菌素酮（ＣＨＭ）在ＭＮＮＧ处理后非定标性突变频率最高的６ｈ点分别阻断ＤＮＡ转录和翻译，发现ＡＭＤ能使ＭＮＮＧ诱导的ｖｅｒｏ细胞非定标性突变率下降至对照水平，而ＣＨＭ则使其明显上升。提示ＭＮＮＧ引起的ＤＮＡ损伤能够通过诱导某些基因的表达或干扰某些蛋白质的功能而导致基因组遗传不稳定。     

THE USE OF A SHUTTLE PLASMID TO STUDY NONTARGETED MUTAGENESIS AND ITS SEQUENCE SPECIFICITY

ＴＨＥＵＳＥＯＦＡＳＨＵＴＴＬＥＰＬＡＳＭＩＤＴＯＳＴＵＤＹＮＯＮＴＡＲＧＥＴＥＤＭＵＴＡＧＥＮＥＳＩＳＡＮＤＩＴＳＳＥＱＵＥＮＣＥＳＰＥＣＩＦＩＣＩＴＹＺｈａｎｇＸｉａｏｓｈａｎ（张小山）；ＹｕＹｉｎｇｎｉａｎ（余应年）ａｎｄＣｈｅｎＸｉｎｇｒｕｏ...     

哺乳类细胞非定标性突变机制的研究

非定标性突变是发生在DNA损伤剂攻击部位之外的突变，其在哺乳类细胞的形成机制是一个亟待解决的课题。本文作为系统研究的一部分，首先观察化学诱变剂甲基硝基硝胍（MNNG）引起的非洲绿猴肾vero细胞非定标性突变率的时相变化，继而在突变率最高时点分别以RNA合成抑制剂和蛋白质合成抑制剂阻断基因转录和翻译，结果发现前者能使MNNG引起的非定标突变率下降到对照水平，而后者反而使突变率大大增高。提示非定标性突变形成过程中可能发生基因表达改变，并提出引起这种改变的细胞信号传导通路假设和今后的研究方向。     

化学物对CM891菌株正向突变和回复突变的抑制作用

本文应用E.coli CM891菌株双生物学指标——正向突变和回复突变检测环境中的抗突变物。实验结果显示,肉桂醛、二烯丙三硫和鞣酸均具有有效地拮抗4NQO诱发的低剂量链霉素抗性正向突变和色氨酸缺陷回复突变的作用;肉桂醛且有抗自发正向突变和回复突变的作用。本文还讨论了化学物拮抗回复突变和拮抗低剂量链霉素抗性正向突变作用的机理。     

一个参与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的遗传不稳定的cDNA片段的分离筛选

为研究甲基硝基亚硝基胍 ( MNNG)诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的机理 ,采用 m RNA差异显示分离到的 MNNG处理后表达发生改变的表达序列标识 ( EST)相关基因进行功能筛选 .利用反义核酸阻断技术阻断其相应基因的表达 ,以筛选分离参与非定标性突变形成的 c DNA片段 .现筛选到 1 0号片段 ,其相关基因的表达被阻断后 ,MNNG诱发的 vero细胞非定标突变率下降至自发突变水平 ,提示 1 0号片段相关的基因是非定标突变发生的正相关基因 .     

反义阻断CROC-1基因表达导致细胞生长变慢

目的:建立CROC- 1 基因表达被阻断的FL-CROC- 1 ^-细胞系,研究CROC- 1 基因在细胞生长中的作用。方法: 运用反义技术将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因CROC- 1 的适当长度cDNA片断克隆到本室改建的真核细胞表达载体pMAMneo-amp^-中,经限制性内切酶图谱分析筛选出反向插入的表达CROC- 1 反义RNA的重组质粒。将此反义表达重组质粒(pMAM-antiCROC- 1 )用改良的磷酸钙法转染人羊膜FL细胞并用含G418的培养基筛选,测定G418抗性的FL-CROC- 1 ^- 细胞系的生长速度。 结果:建立的FL-CROC- 1 ^- 细胞系在地塞米松诱导下CROC- 1 基因表达被反义抑制后,其生长速度较对照FL细胞及转染了载体pMAMneo-amp^- 的FL细胞(FL-MAMneo)的明显要慢(P＜0.05)。结论: 本研究成功地建立了CROC- 1 基因表达被阻断的FL-CROC- 1 ^- 细胞系,并提示CROC- 1 基因编码的泛素缀合酶样蛋白在细胞生长中起正调控作用。