DNA damage response in resting and proliferating peripheral blood lymphocytes treated by camptothecin or X-ray

DNA damage response (DDR) in different cell cycle status of human peripheral blood lymphocytes (PBLs) and the role of H2AX in DDR were investigated. The PBLs were stimulated into cell cycle with phytohemagglutinin (PHA). The apoptotic ratio and the phosphorylation H2AX (S139) were flow cytometrically measured in resting and proliferating PBLs after treatment with camptothecin (CPT) or X-ray. The expressions of γH2AX, Bcl-2, caspase-3 and caspase-9 were detected by Western blotting. DDR in 293T cells was detected after H2AX was silenced by RNAi method. Our results showed that DNA double strand breaks (DSBs) were both induced in quiescent and proliferating PBLs after CPT or X-ray treatment. The phosphorylation of H2AX and apoptosis were more sensitive in proliferating PBLs compared with quiescent lymphocytes (P<0.05). The expression levels of anti-apoptotic proteins Bcl-2 were reduced and cleaved caspase-3 and caspase-9 were increased. No significant changes were observed in CPT-induced apoptosis in 293T cells between H2AX knocking down group and controls. It was concluded that proliferating PBLs were more vulnerable to DNA damage compared to non-stimulated lymphocytes and had higher apoptosis rates. γH2AX may only serve as a marker of DNA damage but exert no effect on apoptosis regulation.     

制首乌辅料黑豆的质量控制研究

目的:建立制首乌辅料黑豆原料及其在炮制品中的质量控制方法。方法:通过比较黑豆、豆制何首乌和清蒸何首乌HPLC色谱图差异,确定制何首乌辅料黑豆的质量控制指标,在此基础上,建立豆制何首乌中黑豆的检测方法和黑豆原料的质量控制方法。结果:通过HPLC色谱图比较,检测到豆制何首乌中的微量大豆苷元。建立了制何首乌中黑豆的TLC色谱检测方法。采用HPLC,建立了黑豆原料中大豆苷元含量测定方法,测定了12批不同产地黑豆,以广东产黑豆大豆苷元含量最高。结论:本方法可作为制首乌辅料黑豆原料及其在炮制品中的质量控制方法。     

不同炮制条件对何首乌水溶性糖含量和分子量的影响及其药效相关性研究

目的研究比较炮制条件对何首乌水溶性多糖含量和分子量的影响,并探讨其与药效的相关性。方法制首乌样品制备分别采用传统笼屉蒸法和流通蒸汽锅蒸法,并设定不同的蒸制时间。采用蒽酮-硫酸法测定样品中水溶性糖的含量;样品总糖溶液用不同分子量超滤膜过滤,并测定滤液中的糖含量,比较不同分子量多糖含量变化。建立大鼠血虚动物模型,比较样品粗多糖的药效差异。结果生何首乌及不同炮制品水溶性糖含量及其分子量分布不同。除炮制72h的制何首乌外,生首乌粗多糖和其他各制首乌样品粗多糖对模型大鼠红系指标均有一定改善作用。结论多糖为何首乌药效物质,炮制可导致何首乌多糖分子量的改变,其药效与分子量有关。     

Sirt1和P55PIK在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究Sirt1和P55PIK在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理参数的关系,并初步探讨Sirt1和P55PIK在胃癌组织中表达相关性.方法 采用免疫组织化学方法检测45例胃癌组织及癌旁正常组织中Sirt1和P55PIK表达水平,同时提取15例胃癌及癌旁正常组织蛋白行Western blot检测Sirt1和P55PIK表达水平.结果 Sirt1和P55PIK在胃癌组织中的表达阳性率分别为55.56%和64.44%,明显高于癌旁组织中的24.44%和35.56%(P<0.05).Sirt1和P55PIK表达与患者性别、年龄、肿瘤直径及浸润深度无明显相关性,但与胃癌TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05).Western blot检测显示15例患者Sirt1和P55PIK在胃癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织.Spearman相关性分析显示,Sirt1与P55PIK在胃癌组织中表达呈正相关(r=0.363,P=0.015).结论 Sirt1和P55PIK表达与胃癌淋巴结转移和肿瘤分期密切相关,表明在胃癌的发病过程中可能有Sirt1和P55PIK的参与,联合检测可作为判断胃癌预后和筛选高危转移患者的指标,并可作为有效的治疗靶点.     

新老复方夏天无片药效作用的比较

采用耳壳肿胀试验、热板法、冰浴加肾上腺素所致大鼠血瘀模型，比较了新老复方夏天无片在抗炎、镇痛及活血化瘀三个方面的功效，结果发现新制剂的复方夏天无片在镇痛作用和活血化瘀方面优于老制剂，而在抗炎效应方面差别不明显。     

冠心生脉颗粒毒理实验研究

冠心生脉颗粒，每克颗粒含生药1．5g(供急毒试验用)，批号000406。每克颗粒含生药1．0g(供长毒试验用)，批号000216。由珠海联邦制药有限公司中山分厂提供，加蒸馏水配成所需浓度溶液备用。     

高良姜饮片HPLC指纹图谱及高良姜素含量测定研究

目的:采用高效液相色谱法建立高良姜饮片的HPLC指纹图谱,同时测定样品中高良姜素的含量,为其质量控制提供新方法。方法:以Phenom enex C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶剂系统,线性梯度洗脱,检测波长为280 nm(高良姜素含量测定为235 nm);采用指纹图谱相似度软件进行数据分析。结果:确定了高良姜饮片9个共有峰,建立了14批药材的共有图谱,并比较了样品中高良姜素的含量。结论:指纹图谱信息结合有效成分含量测定,可较为全面评价高良姜饮片的质量。     

不同产地红景天中有效成分的定量分析

目的建立红景天中红景天苷、酪醇的含量测定方法。方法用Kromasil C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(17:83)作为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为275nm。结果红景天苷在0.414～6.624μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);酪醇在0.0928～1.4848μg范围内呈良好的线性关系(r=1),平均回收率分别为98.3%和99.6%,RSD分别为1.1%和1.9%。结论本方法为红景天药材质量标准的提高和红景天药材原料的选用提供了相关实验依据。     

不同产地红景天中有效成分的定量分析

目的建立红景天中红景天苷、酪醇的含量测定方法。方法用Kromasil C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(17:83)作为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为275nm。结果红景天苷在0.414～6.624μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);酪醇在0.0928～1.4848μg范围内呈良好的线性关系(r=1),平均回收率分别为98.3%和99.6%,RSD分别为1.1%和1.9%。结论本方法为红景天药材质量标准的提高和红景天药材原料的选用提供了相关实验依据。