吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白的表达变化

目的研究吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白p-cofilin的表达变化。方法 42只♂SD大鼠,随机分为吗啡依赖1周组(M1组)、2周组(M2组)和4周组(M4组),各依赖组均设对照,每组7只。吗啡依赖组采用剂量递增法腹腔注射吗啡,每日3次,连续7 d,日剂量按5,10,15,20,30,40,50 mg.kg-1逐日递增,对照组给与等体积的生理盐水。M2和M4组大鼠继续分别给予50 mg.kg-1盐酸吗啡,每天1次,连续注射1或3周。在最后一次给药后5 h断头处死大鼠,迅速分离前额叶皮质、海马、纹状体和丘脑。Western blot检测吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白的表达变化。结果与对照组相比,M2和M4组大鼠前额叶皮质内F-actin/G-actin比值分别上调53%(P<0.05)和102%(P<0.01);M2和M4组大鼠前额叶皮质内p-cofilin表达量分别上调93%(P<0.01)和88%(P<0.01)。M4组大鼠海马中F-actin/G-actin比值上调94%;M2和M4组大鼠海马中p-cofilin蛋白表达量分别上调45%(P<0.05)和30%(P<0.05)。M2和M4组大鼠纹状体内p-cofilin的蛋白表达量分别下调25%(P<0.05)和30%(P<0.05)。结论长期吗啡处理可诱导大鼠形成依赖,伴随着依赖相关脑区肌动蛋白重构,并呈现脑区特异性和时间依赖性。     

酒精依赖和戒断时大鼠伏隔核、杏仁核区内神经甾体水平的变化

目的:采用♂大鼠酒精依赖模型,观察酒精依赖及戒断对大鼠伏隔核、杏仁核中不同神经甾体水平的影响。方法:通过大鼠自由饮含6%的乙醇溶液,连续42d使大鼠形成酒精依赖,并撤除酒精使其自然戒断。断头取脑分离取出伏隔核、杏仁核脑区。使用液液萃取和固相萃取两步法提取脑组织中的孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)、别孕烯醇酮(AP)、脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮硫酸酯(PREGS),以高效液相色谱-质谱联用法测定神经甾体含量。结果:与对照组相比,酒精依赖大鼠伏隔核DHEA,PREG,AP,DHEAS,PREGS的水平显著降低(P<0.05),杏仁核AP,PREGS的水平显著降低(P<0.05);酒精戒断6h大鼠伏隔核DHEA,DHEAS,PREGS的水平显著降低(P<0.05),杏仁核PREGS的水平显著降低(P<0.05);酒精戒断24h大鼠杏仁核DHEA的水平显著上升(P<0.05),伏隔核、杏仁核DHEAS、PREGS的水平显著下降(P<0.01)。结论:酒精依赖形成和戒断对伏隔核、杏仁核中的神经甾体水平有不同的影响,具有区域特异性。     

RNAi靶向抑制HBV复制和HBeAg表达

目的观察靶向HBVC基因区的RNA干扰对HBV复制的抑制作用。方法选择HBV基因组C区的Nt2021-2049作为靶序列,合成相应的正、反义寡核苷酸,退火后形成双链,克隆入shRNA表达质粒,将得到的质粒与HBV质粒共转染HepG2细胞,观察HepG2细胞中HBV的受抑制情况。结果病毒复制及HBeAg的表达明显受到抑制。结论所选靶区通过RNA干扰可有效抑制HBV复制。     

睾酮类避孕药对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:研究睾酮类避孕药丙酸睾丸酮对大鼠生精细胞凋亡的影响及其机制.方法:30只35日龄雄性SD大鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只.实验组每天肌内注射内酸睾丸酮40 mg/kg,对照组注射生理盐水.于大鼠出生第50天取血,并处死大鼠切取双侧睾丸.应用原位末端标记检测、流式细胞测定(FCM)、电镜及放射免疫等技术,对大鼠睾丸生精细胞的凋亡进行定性、定位和定量研究.结果:与对照组相比,实验组大鼠睾丸生精细胞凋亡数量增多,主要为初级精母细胞;实验组、对照组大鼠生殖细胞凋亡率分别为(11.3±0.9)%和(3.6±2.3)%,1C峰细胞的百分比分别为(21.8±7.1)%和(33.8±7.5)%,2C峰细胞的百分比分别为(52.6±8.2)%和(37.1±12.5)%,差别均有统计学意义(P＜0.01).实验组和对照组大鼠血清中睾酮水平分别为(3486.8±333.3)ns/L和(846.9±167.5)ng/L,卵泡刺激素水平分别为(2.5±0.8)IU/L和(5.2±1.7)IU/L.差别均有统计学意义(P＜0.01).结论:外源性丙酸睾丸酮可能通过反馈性抑制垂体性腺轴而诱导生精细胞凋亡,发挥其避孕的作用.     

吗啡依赖大鼠脑组织细胞色素P450侧链裂解酶表达水平的变化

目的 评价吗啡依赖大鼠脑组织细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)表达水平的变化.方法 雄性SD大鼠24只,月龄4～8月,体重180～200 g,随机分为3组(n=8):生理盐水对照组(NS组)、吗啡依赖组(MD组)和吗啡戒断组(MW组).MD组和MW组采用剂量递增法腹腔注射吗啡制备大鼠吗啡依赖模型,连续注射7 d,2次/d,剂量分别为5、10、15、20、30、40、50 mg/kg,NS组腹腔注射等容量生理盐水.NS组和MD组于末次给药1 h后断头处死大鼠,MW组于末次给药1 h时注射纳洛酮2 mg/kg,30 min后断头处死取脑,采用Western blot法检测大鼠额叶皮质、海马、纹状体、丘脑P450scc的表达水平.结果 P450scc在额叶皮质、海马、纹状体、丘脑均有表达;与NS组比较,MD组和MW组额叶皮质、纹状体和海马的P450scc表达水平降低(P<0.05).结论 脑组织P450scc表达下调可能与大鼠吗啡依赖的形成有关,而与吗啡戒断无关.     

气相色谱-质谱联用测定大鼠血清中的神经甾体

目的建立气相色谱-质谱测定大鼠血清中神经甾体的方法.方法本实验采用固相萃取方法对非结合型神经甾体和结合型神经甾体进行分离及纯化.经溶剂解后的结合型甾体和非结合型甾体分别与七氟丁酸酐进行衍生化,选择性离子检测模式进行气相色谱-质谱分析.结果经初步研究雄性大鼠血清中非结合型神经甾体PREG、PROG和DHEA的含量分别为5.75×10-9、1.28×10-8、2.36×10-9 mol/L.结合型神经甾体PREGS和DHEAS的含量分别为4.8×10-9、8.78×10-8 mol/L.每一种甾体都有好的线性关系和准确度.结论本方法适合同时测定血清中结合型和非结合型神经甾体,为实验及临床研究与特异性神经甾体有关的精神疾病提供有效方法.     

兔抗大鼠神经甾体合成关键酶P450scc抗体的制备、特性鉴定及应用

目的: 制备兔抗大鼠神经甾体合成关键酶P450侧链裂解酶 (rP450sidechaincleavage, rP450scc)合成肽片段的抗体, 并检测rP450scc在大鼠脑组织及神经细胞中的表达。方法: 利用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成对称的 8分支 16肽rP450scc多重抗原肽片段 (rP450scc- 16), 并以其免疫雄性新西兰兔制备抗rP450scc -16抗体。采用ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色法鉴定抗rP450scc- 16抗体的特性。结果: 于末次免疫后 5d, 动脉放血分离血清, 用ELISA法检测抗rP450scc -16抗体的效价为 1∶6 400。Westernblot检测显示, 抗rP450scc- 16抗血清与大鼠的脑、睾丸及肾上腺组织蛋白于相对分子质量为 50 000处出现一条特异性的条带。用抗rP450scc -16抗体进行免疫细胞化学染色显示, 在正常大鼠的下丘脑、皮质、海马等区及培养的胶质细胞胞质中均可见棕色颗粒。结论: 制备出高特异性的兔抗rP450scc- 16抗体, 该抗体可检测rP450scc在正常大鼠脑组织中的表达和分布。     

吗啡依赖大鼠脑组织神经甾体合成酶基因表达的变化

目的研究吗啡依赖大鼠额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(P450c17)、3β-羟基甾醇脱氢酶(3β-HSD)基因表达的变化,探讨神经甾体在吗啡依赖中的作用。方法21只雄性SD大鼠,随机分为3组:生理盐水对照组(C组)、吗啡依赖组(D 组)和吗啡戒断组(W组),D、W组采用剂量递增法腹腔注射吗啡制备吗啡依赖模型,连续注射7 d,每日2次,剂量分别为5、10、15、20、30、40、50 mg·kg-1,C组给予相应体积的生理盐水。C、D组在末次给药1 h后断头处死大鼠,迅速分离出额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织。W组在末次给药1h 后注射纳洛酮(2 mg·kg-1),观察大鼠戒断症状,30 min后取不同脑区组织。RT-PCR方法检测大鼠不同脑区三种神经甾体合成酶mRNA的表达。结果与C组相比,D组脑组织P450scc mRNA在纹状体表达降低,3β-HSD mRNA在额叶皮质、纹状体和杏仁核表达降低,W组3β-HSD mRNA在额叶皮质、杏仁核表达降低(P<0.05)。与D组相比,W组P450scc、3β-HSD mRNA在纹状体表达升高(P<0.05)。结论内源性神经甾体可能与大鼠吗啡依赖的形成有关。     

褐毛甘西鼠尾注射液对兔血小板功能的影响

目的:观察云南产褐毛甘西鼠尾对血小板聚集率的影响。方法:采用Born氏比浊法,观察褐毛甘西鼠尾及丹参体内、体外对抗ADP、PAF、AA诱导的兔血小板聚集的作用;体内实验分为7组,即生理盐水组、两种丹参各以5、10、20g/kg剂量组,每组6只。结果:(1)与对照组相比,褐毛甘西鼠尾、丹参体外显著抑制ADP、AA诱导的血小板聚集,抑制效应呈浓度-效应关系,IC50分别为褐毛甘西鼠尾55.4g.l-1(ADP)、14.3g.l-1(PAF)、丹参49.6g.l-1(ADP)、14.1g.l-1(PAF),两种丹参也显著抑制PAF诱导的血小板聚集,其最大抑制率为褐毛甘西鼠尾24.8%、丹参22.4%;体内实验结果显示,两种丹参在高剂量时可显著抑制ADP、PAF和AA诱导的血小板聚集(P<0.05,0.01);且均具有剂量依赖性。40min达到最大抑制作用,抑制率分别为褐毛甘西鼠尾65.8%(ADP)、47.6%(PAF)和51.3%(AA),丹参62.3%(ADP)、43.5%(PAF)和50.2%(AA),褐毛甘西鼠尾和丹参无显著差异。结论:以上结果表明,褐毛甘西鼠尾和丹参具有明显的抗血小板聚集作用,为进一步开发和利用滇产丹参提供了依据。     

吗啡成瘾和应激诱导复发的大鼠脑内神经甾体水平的变化

目的 观察大鼠吗啡成瘾及应激诱导成瘾复发是否与脑组织神经甾体水平的变化有关。方法 给大鼠注射吗啡（5 mg·kg^-1·d^-1，ip, 18：00～20：00）并在条件性位置偏爱(CPP)箱中训练，每日1次，连续10 d，最后1次给药后24 h测试大鼠是否产生CPP。再经过7 d的自然消退期后，给予足底电击(0.5 mA, 0.5 s, 间隔40 s, 15 min)诱发大鼠CPP复发，电击后2 h 进行CPP测试。测试后立即取样，取样时间18：00～20：00，气相色谱-质谱联用技术测定大鼠脑组织神经甾体。结果 给予吗啡并训练10 d，大鼠形成明显的CPP，同时脑组织内神经甾体孕烯诺龙和别孕烯诺龙水平显著升高。经过7 d的自然消退后再给予足底电击可诱发大鼠CPP复发，脑组织神经甾体脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮水平显著升高。结论 大鼠吗啡成瘾及应激诱导成瘾复发过程可能与脑组织内源性神经甾体水平有关。