人脂肪干细胞复合脱细胞软骨基质支架在生物反应器中构建组织工程软骨

目的:观察人脂肪干细胞复合脱细胞软骨基质支架在生物反应器中初步构建组织工程软骨的可行性。方法:实验于2005-04/2006-05在解放军总医院骨科研究所完成。脂肪组织和关节软骨均来自膝关节置换术中切除的组织,并经患者知情同意。关节软骨冻干后经粉碎机粉碎,过筛,选取25～38μm大小的软骨微粒。在样品中先加入2.5g/L胰蛋白酶,37℃消化24h,再加入1%Triton X-100震荡72h。将软骨微粒和蒸馏水按1∶3的比例混合后滴加在模板中,置入冷冻干燥机冻干后行紫外线交联。紫外线照射8h完成。最后经25kGy 60Co辐照灭菌完成支架制备。取膝关节置换术中切除的髌下脂肪垫,酶消法获得脂肪干细胞,扩增后复合于脱细胞软骨基质制成圆柱状三维支架上(细胞密度5×1010L-1),置于生物反应器中进行诱导培养,同时设静态培养组作为对照,3周后观测大体形态和组织学形态变化,同时进行组织化学(包括番红花O,阿利新蓝染色)和Ⅱ型胶原免疫组织化学分析。结果:生物反应器组诱导培养3周苏木精-伊红染色显示支架结构消失,只有中心区域残存少量支架结构;静态培养组支架结构尚存在,有少量基质分泌。番红花O染色显示生物反应器组细胞外有大量蛋白聚糖沉积,阿利新蓝染色表明有软骨特异性蛋白多糖的聚集;而静态培养组只有部分区域染色且淡于生物反应器组。Ⅰ型胶原免疫组化的结果显示,在生物反应器组细胞能够合成大量软骨细胞特异性胶原成分,而静态培养组呈弱阳性。结论:生物反应器培养明显促进了脂肪干细胞的增殖与软骨分化,是体外构建组织工程软骨的良好方法。     

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自 1975年单克隆抗体技术问世后 ,1982年第一例应用单克隆抗体治疗淋巴瘤取得了成功后 ,掀起了单克隆抗体热 ,一些基于单克隆抗体技术的公司也相继成立 ,但是由于临床治疗效果并未取得预想的结果 ,单克隆抗体的研究进入了低潮。而近 5年来由于基因工程抗体的迅速发展 ,使得抗体治疗肿瘤重现了原先的预想 ,带来了新的希望。单克隆抗体用于诊断及监测复发已成为商品和常规 ,近年来的进展表现在两个方面 ,一是检测的标志物从肿瘤细胞表面分子进展到与肿瘤发生发展相关的领域 ,如细胞生长、细胞凋亡、周期变化、血管新生、粘附分子、癌基因、抑…     

S-Tn抗原在胃癌及胃癌前病变组织中表达的研究

目的　探讨S Tn抗原在胃癌及胃癌前病变组织中的表达情况 ,评价S Tn抗原对胃癌的诊断价值。方法　采用免疫组织化学染色法对 10 9例胃癌、70例癌旁粘膜、19例慢性萎缩性胃炎(chronicatrophicgastritis,CAG)、2例慢性浅表性胃炎 (chronicsuperficialgastritis,CSG)、2 8例正常胃粘膜进行染色分析。结果　胃癌组总阳性率为 74 3% ,其中印戒细胞癌阳性率最高为 83 8% ,随着分化程度的降低 ,阳性率愈来愈低。癌旁粘膜阳性率为 84 3% ,明显高于胃癌组 (P <0 0 1)。CAG组阳性率为 73 7% ,CAG伴肠上皮化生 (intestinalmetaplasia,IM)组明显高于CAG伴不典型增生 (atypicalprolif eration ,ATP)组 (P <0 0 1)。CSG组及正常粘膜为阴性。结论　S Tn在胃癌、癌旁粘膜和萎缩性胃炎中均有较高表达 ,其中以癌旁粘膜组表达率最高。伴有IM时S Tn表达更高 ,为 91 6 %。     

生物活性材料成骨活性的体外测定★◇

目的：运用动物体内实验的方法测定生物活性材料成骨活性有较多缺点，为快速有效地评价成骨活性的生物材料，探索一种新的体外测定成骨活性的方法。 方法：实验于2004-01/2005-05在解放军总医院骨科研究所完成。取羊脱钙骨基质和复合材料(粗制羊骨蛋白+羊脱钙骨基 质+牛腱Ⅰ型胶原)两种活性材料分别做免疫组织化学染色检查是否含有骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）。并取脱钙骨基质、复合材料、rhBMP-2、3种材料与小鼠C2C12细胞共培养72 h后，用1% Triton将细胞裂解，取细胞裂解液测定碱性磷酸酶和总蛋白。利用所测定的碱性磷酸酶和总蛋白吸光度比值代表单位数量的细胞中所含碱性磷酸酶的含量。同时设立阴性对照（单纯细胞不加任何材料）。 结果：脱钙骨基质和复合材料中均含有BMP-2。用3种材料刺激C2C12细胞后，测定C2C12细胞中碱性磷酸酶含量高于阴性对照(P < 0.05)。rhBMP-2刺激C2C12细胞产生的碱性磷酸酶含量较其他材料明显增高(P < 0.001)。 结论：体外测定生物材料成骨活性在实际应用中具有操作简便、效果可靠的特点。     

“T”抗原在人类大肠癌,癌前病变及正常大肠中的表现

“T”抗原(Thomson-FriedenreichAn-tigen)被认为是癌相关抗原,包括大肠癌。过去的研究大多数是应用花生凝集素来检测“T”抗原,但从某些研究(肺及乳腺癌)表明应用抗“T”抗体与花生凝集素所得的结果并不相同。为了澄清“T”抗原是否出现于大肠癌及其特点,我们比较了花生凝集素,多克隆抗“T”抗体以及单克隆抗“T”抗体在人类大肠各类组织中的表现。结果表明花生凝集素对大肠癌有较高的敏感性     

应用热休克蛋白/肽复合物疫苗防治肿瘤

肿瘤手术切除后能否根治 ,最关键的是防止复发和转移 ,目前所用的化疗或放疗往往不仅杀死了肿瘤细胞 ,也摧毁了机体的免疫功能 ,最终难以根治。如何调动机体的免疫功能来杀伤肿瘤细胞是人们长期以来的设想 ,这方面的研究持续了百年的历史 ,仅在近 10余年来 ,随着免疫学和分子生物学等基础医学的突破性进展 ,开始展现了调动机体特异性免疫功能杀伤肿瘤细胞 (肿瘤疫苗 )的可喜的苗头。机体能识别和杀灭非我的外来微生物 ,而不能消灭自身的肿瘤 ,这一现象归结为肿瘤细胞逃逸了机体的免疫监视。因此 ,长期以来人们从事于两个方面的研究 ,一是肿…     

Lewis~Y相关抗原在人类大肠恶性及非恶性肿瘤中的表现

Lewis~y抗元是结合于Ⅱ型血型寡醣琏的含四的醣结构—Fucl→2Gall→4(Fucl→3)GlcNAC。本实验用四种单克隆抗体,分别识别不同结构的lewsi~y抗元,以ABC免疫组织化学方法观察其在人类恶性及非恶性肿瘤及正常大肠组织中的表现。这四种抗元都表现为大肠癌发生抗元。AH-6,识别结合于短琏Lewis~y抗元,大量出现于大肠癌及腺癌型息肉,但也出现于正常大肠组织。而KH-1,CC-1,CC-2三种结合于长琏Lewis~y抗元的单克隆抗体则能较好的区别癌与正常组织。仅KH-1的特异性较低(63％),而且不出现于低分化性癌。这三种抗体也结合于腺瘤型息肉,其出现率低于癌,而明显高于化生型息肉。且其出现率与腺瘤的三种瘤前病变一肿瘤大小、组织学类型及不典型增生程度分别有平行关系。而化生型息肉的改变类似于正常组织。我们认为识别结合于长琏Lewis~y的单克隆抗体可能对发现大肠癌有帮助,其在在腺瘤型息肉中的表现可能有助于判断其恶性变的倾向。     

胰腺癌相关的新碳水化合物抗原

为早期诊断胰腺癌,碳水化合物类抗原正日益引起重视。一些研究表明血型抗原及其有关的醣脂类抗原在大肠癌、移行细胞癌及鳞状上皮细胞癌均有改变。最近,以消化道肿瘤细胞为抗原产生的单克降抗体.可分别识别Lewis~X,Lewis~Y抗元,涎酸化Lewis~X抗原     

Lewis有关抗原在人类癌恶性及非恶性大肠组织的表现

Lewis~Y抗原是结合于Ⅱ型血型寡醣链的含四醣结构—Fucl→2Gall→4(Fucl→3)GleNAC。本实验用四种单克隆抗体,分别识别不同结构的Lewis~Y抗原,以ABC免疫组织化学方法观察其在人类恶性及非恶性肿癌及正常大肠组织中的表现。这四种抗原都表现为大肠癌发生抗原。AH-6,识别结合于短链Lewis~Y抗原,大量出现于大肠癌及腺瘤型息肉,但也出现于正常大肠组织。而KH-1,CC-1,CC-2三种结合于长链Lewis~Y抗原     

自体软骨细胞团块植入修复兔陈旧性关节软骨缺损的实验研究

目的 观察自体软骨细胞团块植入对兔关节软骨缺损的修复作用. 方法 24只成年新西兰大白兔48侧膝关节,随机分为三组(n=16)并制备双膝关节股骨滑车软骨缺损模型.空白对照组无特殊处理,骨膜移植组将骨膜覆盖缺损并缝合于缺损两侧的股骨髁上,实验组将自体软骨细胞团块植入缺损中.术后3、6个月分别取材(n=8),进行大体和组织学观察,修复组织行Wakitani评分并进行比较. 结果实验组共成功取材11个缺损关节,9个为透明软骨修复,2个因植入细胞生长状态差未修复;骨膜移植组修复组织为纤维软骨或纤维组织,修复组织薄,基质异染弱;空白对照组仅有少量纤维组织填充缺损底部.修复组织Wakitani评分:实验组3.82分,骨膜移植组6.71分,空白对照组9.23分,差异有统计学意义(F=5.96,P=0.00). 结论自体软骨细胞团块植入能较好修复关节软骨缺损,修复的质量与植入细胞的质量有关.