GLI3基因新发突变致多指（趾）畸形一家系

目的 对1个先天性多指（趾）畸形家系进行GLI家族锌指3基因（GLI3）突变分析,进一步丰富GLI3的突变谱。方法 收集1例临床诊断为多指（趾）畸形的患儿资料,提取患儿外周血DNA,应用全外显子测序方法检测与患儿症状相关的致病基因,并在家系其他成员中应用Sanger测序进行验证。结果 该家系中包括患儿在内的4位多指（趾）畸形患者位于7p14.1的GLI3基因存在c.2783delG（p.Arg928Profs24X）框移突变。在该家系的正常成员中未检测到该位点突变。经查询HGMD、Clinvar及dbSNP数据库均未见相关报道。该病例多指（趾）畸形诊断明确,其突变位 点为新突变。GLI3基因的c.2783delG（p.Arg928Profs24X）框移突变可能为该家系的发病原因。结论 本研究发现新发突变 GLI3［c.2783delG（p.Arg928Profs24X）］,进一步丰富了 GLI3基因的突变谱,为深入研究多指（趾）畸形的发病机制提供了新的内容。     

大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平.方法 以Trizol-步法提取新鲜骨组织总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录产生eDNA并进行扩增,以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM.T Easy载体连接成重组质粒并转化E.coli DH5a.采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果 由PGEM.T Easv.bFGF所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×102-1×107拷贝大鼠bFGF基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数成线性关系)、灵敏度高、特异性强、准确可靠.批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.03%～4.59%以及2.24%～6.46%.结论 成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法.     

一个琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病家系ALDH5A1基因突变分析

目的 对1例临床怀疑且经尿筛查诊断为琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病的患儿及家系进行ALDH5A1基因突变分析,以进一步明确诊断和辅助遗传咨询.方法 应用聚合酶链反应及DNA直接测序技术对1例琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病患儿及其父母的ALDH5A1基因进行突变位点检测,同时检测100名健康对照者的ALDH5A1基因以排除多态性变异.结果 患儿携带有ALDH5A1基因编码区序列第3外显子c.527G＞A(p.Gly176Glu)和第4外显子c.691G＞A(p.Glu231Lys)两种杂合突变,其母亲为c.527G＞A杂合突变携带者,父亲为c.691G＞A杂合突变携带者.另外患儿还存在两种已报道的核酸多态性改变:c.545C＞T杂合突变和c.538C＞T纯合突变.患儿的c.545C＞T突变来源于父亲,c.538C＞T突变分别来源于父母.100名健康对照者中未检测到c.527G＞A和c.691G＞A突变.结论 c.527G＞A(p.Gly176Glu)和c.691G＞A(p.Glu231 Lys)错义突变可能是该患儿的致病突变.     

单端孢菌素逆转肺癌耐药A549/DDP细胞耐药性及其机制研究

目的 探讨单端孢菌素对肺癌耐顺铂细胞系A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法 应用MTS法检测单端孢菌素对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测肿瘤细胞表面P-糖蛋白（P-Glycoprotein,P-pg）表达以及胞内罗丹明-123（Rhodamine-123,Rh-123）含量的变化,生化法检测细胞内SOD和GSH的水平,Western blot法和Real time PCR检测肿瘤细胞多药耐药蛋白MDR1、MRP1和Survivin表达的变化,Western blot法检测Akt磷酸化的变化,液相芯片法检测TGF-β,IL-6和IL-8的变化,应用双萤光报告基因技术检测细胞NF-κB和AP-1转录活性。结果 单端孢菌素可增加细胞对顺铂的敏感性,经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用72 h后,耐药逆转倍数（RF）为1.84和3.95倍。经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用24 h后,肿瘤细胞P-gp表达分别下降了62.6%和19.8%,细胞中Rh-123含量分别提高了183.3%和308.3%,细胞内SOD水平下降65.2%和50.1%,GSH水平下降 71.6%和46.3%,MDR1的mRNA水平下降了72.7%和52.3%,MRP1的mRNA水平下降了64.0%和22.5%,Survivin的mRNA水平下降了45.8%和14.7%,Akt磷酸化水平下降,TGF-β分泌水平下降了80.2%和51.5%,IL-6分泌水平下降了73.4%和37.2%,IL-8分泌水平下降了71.2%和43.2%,NF-κB转录活性下降42.3%和22.7%,AP-1的转录活性下降了57.4%和32.5%。结论 单端孢菌素逆转A549/DDP对顺铂的耐药性,这一作用与抑制药物外排,负调控肿瘤耐药相关蛋白的表达有关。     

足月新生儿黄疸与维生素D及NADSYN1基因多态性的相关性研究

目的 研究足月新生儿黄疸、维生素D（VD）水平及NADSYN1基因rs12785878位点单核苷酸多态性（SNP）间的关系。方法 回顾性分析216例患有黄疸的足月新生儿的临床资料,利用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）检 测血清VD水平,高分辨熔解曲线（HRM）分析NADSYN1基因rs12785878位点SNP...     

FOXG1基因新发突变致先天性Rett综合征变异型一例报告

目的 对FOXG1基因突变所致先天性Rett综合征变异型患儿临床表现进行汇总归纳， 为该疾病的诊断治疗提供参考。方法 总结1例临床诊断为先天性Rett综合征变异型患儿的病例资料， 提取患儿及其父母外周血 DNA， 采用靶向基因高通量测序技术检测与患儿症状相关的致病基因， 应用sanger测序进行验证， 同时行染色体微阵列检测除外染色体微缺失、 微重复等情况。结果 该患儿位于14q12的FOXG1基因有c.506dupG， p.G169Gfs ＊286杂合突变， 其父母均为野生型， 经查询HGMD、 Clinvar及dbSNP数据库， 未见相关报道。该病例明确诊断先天性Rett综合征变异型， 其突变位点为新突变。结论 对于符合先天性Rett综合征变异型表现的病例， 建议行FOXG1基因突变检查， 并对部分可预知的功能障碍进行预防性治疗。     

低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2.1表达的影响

目的 研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2.1表达的影响.方法 雌性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为低碘组和对照组,均饲以含碘量为13.66μg/kg的低碘饲料,分别饮用去离子水和200μg/L碘酸钾溶液,3个月后用化学发光免疫分析方法测定大鼠血清甲状腺激素(Tr3、Tr4、FT3、FT4),再将两组大鼠与健康雄鼠进行交配,在孕16 d、新生及20日龄时,取胎鼠或仔鼠脑组织,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测脑组织nkx2.1 mRNA表达.结果 大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平,低碘组[(0.89±0.20)、(0.32±0.16)nmol/L、(3.33±0.61)、(3.28±0.80)pmol/L]明显低于对照组[(1.04±0.06)、(39.42±14.68)nmol/L、(4.83±0.33)、(26.99±4.48)pmol/L;t值分别为2.71、6.52、5.70、12.89,P<0.05或<0.01].对照组孕16 d、新生及20日龄大鼠脑组织nkx2.1 mRNA表达分别为(5.60±0.30)×10-3、(1.20±0.29)×10-3、(0.18±0.06)× 10-3,低碘组同日龄大鼠nkx2.1 mRNA表达分别为(3.00±0.55)×10-3、(1.90±0.21)×10-3、(0.69±0.15)×10-3.对照组、低碘组各日龄胎、仔鼠之间nkx2.1 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为2102.07、162.40,P均<0.01),对照组、低碘组新生仔鼠nkx2.1 mRNA的表达比孕16 d胎鼠低(P均<0.01),20日龄仔鼠nkx2.1mRNA表达比孕16 d和新生降低(P均<0.01);低碘组与同日龄对照组比较.对照组孕16 d胎鼠nkx2.1 mRNA表达明显高于低碘组胎鼠(t=16.073,P<0.01),而新生及20日低碘组明显高于对照组(t值分别为7.537、12.227,P均<0.01).结论 低碘导致的脑发育迟滞与nkx2.1在腩组织中的差异表达密切相关.     

X染色体微重复一例

患儿女,7岁4个月,确诊癫痫3年余,表现为无热抽搐、全身强直发作。体格检查:身高110 cm,体重15.3 kg(均相当于第3百分位),头围49.5 cm。体型消瘦,神志清楚,外观无明显畸形,四肢肌力及肌张力正常。家系调查:患儿有一弟,5月龄,表型正常。母亲无不良孕产史。父母体健,系非近亲结婚,否认抽搐、智力低下以及遗传代谢病家族史。患儿目前每天抽搐多次,均表现为意识模糊、双眼凝视、口唇发绀、全身强直发作。除首次抽搐时伴有38℃发热外,其余均不伴发热。     

婴儿型GM1神经节苷脂贮积症2例临床及遗传学特点北大核心CSCD

目的对2例婴儿型GM1神经节苷脂贮积症患儿临床及遗传学特点进行总结。方法收集2019年5月至6月天津市儿童医院康复科收治的2例婴儿型GM1神经节苷脂贮积症患儿临床资料,分析其临床及遗传学特点。结果2例患儿主要表现为婴儿期发病;精神运动发育落后,并有倒退;粗笨面容;对声音敏感;牙龈增厚;牙齿萌出异常;肌张力低下或肌张力障碍;骨发育不良;皮肤异常。例1肝脾大,角膜混浊,多发关节挛缩;例2眼底樱桃红斑,癫痫发作。生化检查均提示碱性磷酸酶显著增高,谷草转氨酶升高,谷丙转氨酶正常。头颅磁共振成像均示白质髓鞘化不良,例1还有丘脑对称性信号改变。全外显子二代测序发现,例1GLB1基因存在3p22.3(33137821-33138587)×1缺失突变,该片段缺失既往文献未见报道。结论婴儿型GM1神经节苷脂贮积症临床谱广泛。2例患儿均有皮肤异常,相对罕见。例1多发关节挛缩,尚未见文献报道,可能为新发表型。例1GLB1基因3p22.3(33137821-33138587)×1片段缺失为新突变,扩大了本病基因谱。