结直肠癌患者骨髓中survivin基因的检测及临床意义

目的探讨生存素（survivin）在结直肠癌（CRC）患者骨髓中的表达及其临床意义。方法术前收集68例CRC患者骨髓,应用巢式反转录酶-聚合酶链锁反应（RT—PCR）检测survivinmRNA的表达,并分析其与临床病理特征及2年无进展生存期（PFS）的关系。结果骨髓survivinmRNA阳性率为29．4Vo。survivin阳性与患者临床分期及淋巴结转移相关,其2年PFS（平均18．3月）劣于survivin阴性者（平均21．6月）。结论骨髓survivinmRNA检测对于判断CRC微转移具有重要意义,可望成为CRC潜在预后标志物。     

人肿瘤抗原基因Delta-like4(DLL4)可溶性表达、纯化及鉴定

目的研究克隆肿瘤抗原人DLL4基因,与原核表达载体可溶性融合表达、分离纯化及其鉴定,并计划将其应用于DLL4特异性肺癌肿瘤疫苗研究过程中的抗血清滴度检测.方法采用PCR方法扩增DLL4多核苷酸序列,克隆入pMD-18T载体.测序正确后,将其亚克隆入pGEX-KG原核表达载体,获得pGEX-KG-hDLL4载体.以该载体转化E.coli菌株BL21(DE3),IPTG诱导其表达,裂解大肠杆菌,以GSTrap亲和层析柱纯化目的蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定目的蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了hDLL4基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了目的基因hDLL4.成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hDLL4.结论融合蛋白GST-hDLL4在25℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L条件下诱导表达,以GSTrap亲和层析柱纯化,获得纯化融合蛋白.采用SDS-PAGE,Western Blot的方法可检测到目的可溶性融合蛋白GST-hDLL4的表达.     

蛋氨酸酶联合顺铂协同抑制人肺腺癌细胞GLC生长作用

目的：纯化重组蛋氨酸酶并探讨其联合化疗药物顺铂对人肺腺癌GLC细胞生长的协同抑制效应．方法对原核表达体系pGEX-4T-1-Met/Dh5a菌液破碎后上清过纯化柱（GST）纯化后,采用MTT比色法测定重组蛋氨酸酶与顺铂联合应用对GLC细胞增殖的抑制作用,采用金正均法计算q值判断两药合用是否具有协同作用．结果重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.22 mg/mL,纯度达95%,活性为0.568 IU/mg．给药72 h后单用顺铂对GLC细胞抑制率为24.80%,单用蛋氨酸酶抑制率为27.49%,两药合用抑制率为66.80%．=1.47＞1.15,表现出明显协同作用．结论蛋氨酸酶及顺铂均有抑制GLC增殖作用,并且两者联合使用存在协同作用．     

多西他赛联合奥沙利铂及氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的临床研究

目的：观察多西他赛联合奥沙利铂及氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的近期疗效和毒副反应。方法：18例晚期胃癌患者采用多西他赛联合奥沙利铂及氟尿嘧啶方案化疗,多西他赛75mg／m^2（第1、8天）;奥沙利铂130mg／m^2（第1天）;氟尿嘧啶500mg／m^2（第1至5天）,21天为I周期,治疗2周期后评价疗效。结果：18例患者中完全缓解1例,部分缓解9例,总有效率55．6％;毒副反应主要为骨髓抑制、腹泻和脱发。结论：多西他赛联合奥沙利铂及氟尿嘧啶方案治疗晚期胃癌缓解率高,毒副反应可以耐受。     

响应面分析法优化细菌内毒素的灭活方法

目的运用响应面分析法的原理和方法对医疗实践中常用的内毒素的灭活方法进行优化,提出一种简便、可靠、快速的内毒素灭活方法。方法对细菌内毒素用双氧水灭活法、多酶清洗液灭活法和干热灭活法进行基于响应面的优化设计,在对双氧水浓度、多酶清洗液的稀释比和干热温度进行单因素实验的基础上,以显色基质鲎试剂测定的残留的内毒素活性为响应指标,设计三因素三水平的响应面分析实验,以此确定最佳的灭活方法,并对理论优化的结果进行实验验证。结果室温下双氧水浓度为10%(V/V)作用时间20 min,多酶清洗液稀释比为1:100作用30 min,然后在150℃的干热烘箱中作用30 min后,显色基质鲎试剂测定内毒素的结果为阴性。结论经过响应面分析法优化的细菌内毒素灭活方法,能够快速高效的灭活结构复杂来源多样的细菌内毒素。     

儿童幽门螺杆菌感染情况及其与缺铁性贫血的相关性

目的 了解大理白族自治州人民医院门诊528例上腹痛儿童幽门螺杆菌(H.pylori)感染情况并研究感染与缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)的相关性;为儿童H.pylori感染和IDA的诊断和治疗提供一定的循证医学证据.方法 (1)选取2019年1月至2020年12月在大理白族自治州人民医...     

人血管内皮生长因子A(VEGFA)的原核载体构建、蛋白表达及鉴定

目的 克隆人VEGFA基因,与原核载体融合表达、纯化及其鉴定,并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中.方法 采用PCR方法扩增人VEGFA序列,将其克隆入pGEX-KG原核载体,获得pGEX-KG-hVEGFA重组质粒.将该质粒转化入E.coli菌株BL21 (DE3),经IPTG诱导其表达,以GSTrap亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定融合蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了hVEGFA基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒载体经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了hVEGFA基因片段.成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hVEGFA.结论 融合蛋白在IPTG终浓度为0.5 mmol/L、25℃条件下诱导表达,并获得纯化融合蛋白.采用Western Blot的方法可检测到目的融合蛋白GST-hVEGFA的表达.     

两种不同神经电生理检查法对桡管综合征的鉴别诊断

［摘要］目的　比较常规神经电生理检查方法和改良法对桡管综合征（radial tunnel syndrome,RTS）的诊断作用．方法　选取经康复医学科门诊或骨科门诊初步诊断为肱骨外上髁炎（lateral epicondylitis,LE）或网球肘（tennis elbow,TE）的患者87人,进行常规病史询问,体格检查,桡浅神经感觉神经电位（sensory nerve action potential, SNAP）检查和常规桡神经混合肌肉动作电位（compound muscle action potential, CMAP）检查,常规针极肌电图检查（electromoygraphy,EMG）;同时所有患者接受改良的桡神经CMAP检测,即在3个不同体位下（前臂中立位,前臂旋前位和前臂旋后位）检测桡神经CMAP值,比较3个CMAP潜伏期值之差,如果差异值≥0.3ms,可确诊为RTS．采用χ2 检验比较2种检测方法对桡管综合症的阳性检出率．结果　87例患者中有13例确诊为RTS,其中常规肌电图检测明确的后骨间神经神经源性损害有3例,桡浅神经损害有1例;而其余9例患者为常规肌电图检测结果阴性而由改良桡神经检测方法发现桡神经CMAP远端潜伏期之差值异常,确诊为RTS．改良法阳性结果检出率高于传统法,两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）．结论　对RTS的鉴别诊断中,改良神经电生理检测方法可以获得更高的阳性率．     

腹腔镜胆囊切除术围手术期抗菌药物的使用分析

目的：调查我院普外科腹腔镜胆囊切除术围手术期抗菌药物的使用情况,评价其用药的合理性。方法：随机抽取2011-2013年出院病例639例,对抗菌药物的种类、用药时间、用药比例及药物联用等进行调查与分析。结果：639例中使用抗菌药物的病例有432例。其中,2011年266例,使用率94.5%;2012年173例,使用率75.72%;2013年200例,使用率21.50%。使用抗菌药物的品种有13种,头霉素类最多,头孢菌素类、抗厌氧菌类及酶抑制剂类次之。围手术期用药存在用药疗程过长,个别联合用药欠妥的现象。结论：抗菌药物专项整治后腹腔镜胆囊切除术围手术期抗菌药物使用率降低明显。抗菌药物的选用逐步合理化,但24小时内停药率偏低,医院要继续加强围手术期抗菌药物的应用管理,提高合理用药水平,有效控制细菌耐药,并持续改进。