蝙蝠娥被孢霉多糖抗肿瘤和免疫功能研究

从蝙蝠娥被孢霉液体发酵的菌丝体中,采用热水提取,65%乙醇沉淀,DEAE-52和G-100分子筛分离、纯化得到了一个组分均一的天然多糖—蝙蝠娥被孢霉多糖(CPSM,Cordyceps Polysaccharides of Mortierella hepiali),其由甘露糖、葡萄糖和半乳糖3种单糖组成。体内实验表明,该多糖对小鼠移植瘤有明显抑制生长作用,但是在体外实验中对人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株Hep-G2、急性粒细胞白血病细胞株HL-60均没有表现出细胞毒作用。推测该CPSM是通过调节小鼠免疫系统的功能达到抑制移植瘤生长作用的。对移植瘤小鼠进行了T、B淋巴细胞增殖和NK细胞活性的实验表明灌胃给与多糖的小鼠组T、B淋巴细胞的增殖明显快于正常组,NK细胞活性大于正常组。而CPSM在体外对于小鼠腹腔巨噬细胞同样具有活化功能,增强巨噬细胞NO的分泌。     

蝙蝠蛾被孢霉多糖的分离纯化及理化性质

目的提取蝙蝠蛾被孢霉多糖,并对其理化性质进行研究。方法利用水提醇沉法得到粗多糖CPSM,采用硫酸-蒽酮法测定粗多糖含量,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,薄层色谱法检查是否含有单糖。CPSM经纤维素DE-52柱分离得CPSM-1和盐洗脱多糖。两种多糖分别经Sephadex系列凝胶柱分离纯化得到CPSM-1a和CPSM-2,采用光谱法和色谱法测定其单糖组成、分子质量等。结果粗多糖CPSM糖含量为61.4%,蛋白含量为1.8%,不含还原糖。CPSM-1a主要含有甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其摩尔比约为5∶2∶3;CPSM-2主要含有甘露糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖和木糖,其摩尔比约为5∶1∶2∶1∶1。CPSM-1a和CPSM-2重均分子质量分别为8.8×103和7.6×103。结论 CPSM-1a为一水溶性中性多糖,CPSM-2为一水溶性酸性多糖。     

达托霉素发酵培养基的响应面法优化

采用Plackett-Bumaan设计、最陡爬坡试验与响应面设计相结合的方法优化达托霉素发酵培养基组成,利用Design Expert 7.0软件设计试验并分析数据.结果表明,培养基中的糊精、酵母粉、酪蛋白水解物是影响达托霉素产量的主要因素.优化后的培养基组成/g·L~(-1)为:糊精10.6,酵母粉1.6,酪蛋白水解物1.3,硫酸钾8,L-门冬氨酸1.5;pH 6.5.在此条件下,达托霉素产量为37.16 me,/L.进一步优化前体癸酸的添加量,最终达托霉素产量达46.54 mg/L.     

硫酸氨基葡萄糖的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法测定硫酸氨基葡萄糖.采用C8色谱柱,以0.05％磷酸(用30％氢氧化钾溶液调至pH 3.0)-乙腈(60∶40)为流动相,检测波长195 nm.氨基葡萄糖在0.01～1.87 mg/ml浓度范围内线性关系良好.同收率为100.4％,RSD为1.81％.