复方丹参滴丸改善心肌缺血再灌注损伤研究进展

血运重建是治疗心肌梗死最重要的措施之一.然而心肌缺血再灌注后氧自由基生成增加、钙超载、炎症反应、线粒体损伤、细胞凋亡、内皮细胞活化和损伤以及自噬等机制激活,对心肌细胞造成损伤.现代临床研究表明复方丹参滴丸在缓解心绞痛发作、改善心肌缺血、提高运动耐受时间以及改善缺血再灌注心肌有确切的疗效.     

靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定

摘要：目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞
表面标记物CD133 细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133 的特异性短
肽。应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序
列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果4 轮液相筛选后,与
CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA 鉴定的20个噬菌体单克隆中,
有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨
基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和
人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子
的高亲和力多肽的方法切实可行。     

高浓度胰岛素对阿司匹林抑制的血小板中TXB2合成影响的研究

目的：探讨高浓度胰岛素是否影响阿司匹林抑制的血小板中TXB2合成。方法将制备的两组等体积的富含血小板血浆（PRP）分别加入浓度为30μU/ml和300μU/ml的胰岛素，37℃的环境下孵育3min，再次将上述两组的PRP分成等体积，分别用浓度为0、75μmol/L、150μmol/L和300μmol/L的阿司匹林处理，于37℃的环境下继续孵育30min，加入ADP 5min后，用吲哚美辛和柠檬酸葡萄糖封闭血小板反应；用血小板聚集仪检测各组的血小板最大聚集率，酶联免疫吸附法检测血小板中TXB2的含量。结果胰岛素300μU/mL组与30μU/mL组比较，前者可明显升高经阿司匹林作用后的血小板最大聚集率（P〈0.05），且明显增加血小板中TXB2的合成（P〈0.05）。结论高浓度胰岛素可减弱阿司匹林抑制的血小板TXB2合成作用。     

降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验

目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1.KNOB△HI,同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上,用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1,pShuttle-GFP在E.coli BJ5183中同源重组,得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480,通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带,测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的...