慢病毒介导TGF-β1基因诱导大鼠骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化

[目的]探讨慢病毒介导转化生长因子β1(tansforming growth factor bata 1,TGF-β1)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导成软骨细胞分化的作用。[方法]密度梯度离心法分离培养BMSCs,探索病毒感染最佳条件,取第3代细胞,分为实验组和对照组,通过慢病毒载体将外源性TGF-β1基因转染入细胞,观察绿色荧光表达情况,Real-time PCR法和western blot法检测TGF-β1基因的mRNA和蛋白表达情况,7、14 d时行Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、甲苯胺蓝染色和Real-time PCR检测Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的表达。[结果]TGF-β1基因转染BMSCs后能够稳定表达。转染7、14 d时,实验组免疫细胞化学染色、甲苯胺蓝染色均为阳性。转染7、14 d时,实验组II型胶原mRNA均显著高于对照组(P<0.01)。转染7 d时,实验组聚集蛋白聚糖mRNA变化不明显,而14 d时显著高于对照组(P<0.01)。[结论]慢病毒介导的TGF-β1基因可成功转染大鼠BMSCs,并诱导其向软骨细胞分化。在此过程中软骨特异性标志Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达具有时间差异性。     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。     

绞股蓝总皂苷对HDL-CE诱导的HepG2细胞SR-B Ⅰ受体表达的影响

目的研究绞股蓝总皂苷(GPS)对HepG2细胞B型Ⅰ类清道夫受体(SR-BⅠ)表达的影响,分析绞股蓝总皂苷抗动脉粥样硬化的机制。方法体外培养人HepG2肝癌细胞,用不同浓度的GPS和HDL-CE与细胞共孵育24 h。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇含量的变化,运用Real-time PCR、Western免疫印迹法分别检测绞股蓝总皂苷对细胞膜受体SR-BⅠmR-NA和蛋白的表达。结果 0～120 mg·L-1浓度的GPS对HepG2源性荷脂细胞增殖无影响,HDL-CE单独处理及HDL-CE和不同浓度GPS共孵育细胞处理后HepG2细胞中脂滴堆积增加,总胆固醇和胆固醇酯的含量明显增加,但后者SR-BⅠmRNA和SR-BⅠ蛋白的表达量却下调,并具有一定的量效关系。结论绞股蓝总皂苷对肝细胞具有保护作用,在高脂环境中,绞股蓝总皂苷能抑制肝细胞无限制的摄入脂质。     

肝肾阴虚型甲亢和脾肾阳虚型甲减患者血清蛋白质组的比较分析

[目的]通过对肝肾阴虚型甲亢和脾肾阳虚型甲减患者血清蛋白质组的分析,阐述肝肾阴虚和脾肾阳虚的物质基础。[方法]将正常人、甲亢和甲减患者血清用亲和层析法除去其中的高丰度蛋白质,再用双向电泳技术分析不同组样品蛋白质组的变化,所获的差异蛋白质用质谱进行鉴定。[结果]与正常人相比,肝肾阴虚型甲亢患者血清中RBP和TTR的表达量降低,而IGF-2、FDA-C、NF-κB及PTP表达量升高;脾肾阳虚型甲减患者TTR表达量升高,NHE-1、ZAG、UCH、IGF-2和MHC–II蛋白则表达量下降。肝肾阴虚型甲亢和脾肾阳虚型甲减相比,ProapoA-Ⅰ和TTR表达量降低,而NDU、SCDH/SCR、PK、Cyt P450蛋白、IGF-2和IRF-5表达增加。[结论]肝肾阴虚型甲亢患者机体代谢活跃,而脾肾阳虚型甲减患者则机体代谢减低,合成代谢的速度分解代谢的速度。肝肾阴虚型甲亢血清IGF-2表达升高,脾肾阳虚型甲减则正好相反,说明血清IGF-2具有成为中医辨证肝肾阴虚和脾肾阳虚血清标志物的可能性。     

基质金属蛋白酶-13的测定在骨关节炎中作用的研究进展

骨关节炎是在复杂的生物学和力学因素共同作用下,软骨细胞、细胞外基质、软骨下骨三者合成与降解失衡的一种慢性、进行性疾病,其病因和病理机制目前尚未完全明确,但基质金属蛋白酶-13（MMP-13）对Ⅱ型胶原所组成三螺旋结构的降解和破坏被认为是0A发生发展的关键环节,MMP-13抑制剂的研究将会为OA的治疗提供新的思路和方法。     

Ⅸ型胶原基因与骨肌系统疾病相关性的研究现状

Ⅸ型胶原作为关节软骨的一个重要组成部分,对骨与软骨稳态起着重要的调控作用。该基因变异或缺失会引起这个稳态失衡从而导致相应骨关节结构发育异常,导致多发性骨骺发育不全。解剖结构的变异随之而来的是相应功能单位的生物学性能改变,结合由基因异常引起的微环境改变,在反复应力的作用下会出现骨关节炎、椎间盘退行性变等一系列骨关节退行性变,此外,Ⅸ型胶原的缺乏还影响关节软骨、椎间盘组织损伤的修复。然而,与Ⅸ型胶原基因相关的骨肌系统疾病不仅限于此,还有许多疾病报道较少,证据相对不足,有待进一步深入研究。明确该基因与这些疾病的关系不仅可以提供有效的诊断方法,更能为后续的治疗开辟新的道路。     

姜黄素对非酒精性脂肪肝细胞胆固醇代谢的影响

[目的]探讨姜黄素对体外诱导的非酒精性脂肪肝模型细胞胆固醇代谢的影响及其机制。[方法]采用油酸诱导法建立非酒精性脂肪肝细胞模型,并用姜黄素进行处理,油红O染色观察细胞内脂质累积情况,酶法检测细胞内甘油三酯、游离胆固醇和总胆固醇含量,定量PCR检测SR-BΙmRNA和HMGCR mRNA的表达。[结果]30μg·mL^-1油酸可成功建立非酒精性脂肪肝细胞模型,姜黄素干预后,脂肪肝细胞中甘油三酯和游离胆固醇减少,细胞内脂质积累减少,而总胆固醇无显著变化。姜黄素还能降低HMGCR mRNA表达,而增加SR-BⅠmRNA表达。[结论]姜黄素能够降低脂肪肝细胞游离胆固醇,其机制与其抑制内源性胆固醇的生物合成,促进外源胆固醇进入肝细胞进行代谢有关。     

右归饮含药血清对TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响

[目的]观察不同浓度右归饮含药血清对转化生长因子β1(tansforming growth factor,TGF-β1)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向软骨细胞分化的影响。[方法]密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,取第3代,分为正常对照组、诱导对照组、右归饮高剂量组、右归饮中剂量组、右归饮低剂量组。正常对照组加入大鼠空白血清,诱导对照组加入诱导液(10 g·L-1 TGF-β1、10-7mol·L-1地塞米松、50mg·L-1维生素C)及大鼠空白血清,右归饮各组加入诱导液及相应的含药血清。14d后,进行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,采用Real time PCR检测Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖m RNA的表达。[结果]甲苯胺蓝染色及免疫细胞化学染色显示,正常对照组未见阳性细胞,诱导对照组及右归饮各组细胞均呈阳性。与诱导对照组比较,右归饮各组平均累积光密度值均增高(P0.01),右归饮低剂量组高于高、中剂量组(P0.01)。Real time PCR检测结果显示,与正常对照组相比,诱导对照组及右归饮各组Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖m RNA的表达均增高(P0.01);与诱导对照组比较,右归饮各组Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖m RNA的表达均增高(P0.01),其中右归饮低剂量组显著高于高、中剂量组(P0.01)。[结论]右归饮含药血清能在一定程度上促进TGF-β1诱导的BMSCs成软骨细胞分化,低剂量组效果较显著。     

血友病性关节炎与骨质疏松症的关系研究

目的:探讨血友病性关节炎与骨质疏松症的关系.方法:回顾性分析2019年12月至2020年12月收治的40例男性血友病性关节炎患者(血友病性关节炎组)和60例门诊健康体检男性(健康体检组)的病例资料.比较2组受试者的血清骨代谢指标及血液生化指标,前者包括25-羟基维生素D、甲状旁腺激素、总Ⅰ型胶原氨基端前肽(total ...