玻璃体切割术治疗急性视网膜坏死并发视网膜脱离的疗效分析

目的探讨玻璃体切割术治疗急性视网膜坏死性视网膜脱离的效果。方法对急性视坏死性视网膜脱离18例18眼中13眼行玻璃体切割、眼内视网膜光凝加硅油填充术，5眼行玻璃体切除、眼内光凝加C3F8填充术。结果15例患者的视网膜成功复位，炎症均控制良好。3例视网膜脱离复发，再次手术复位成功，视力光感；随访9个月至3年，15例视力分别为：0．3者2例，0．2者4例，0．1者5例，0．02～0．08者2例，指彬30cm者2例。结论视网膜脱离是急性视网膜坏死的严重并发症，通过玻璃体视网膜联合手术，可有效地提高视网膜脱离的复位率，挽救患者的视功能。     

肠道病毒71型山东临沂分离株全基因组序列分析

目的 自1例死亡患儿的标本中分离EV71,并分析其全基因组序列特点,研究其基因序列的改变是否与其神经毒力有关.方法 咽拭子标本采自山东临沂市人民医院1例死亡患儿,在人横纹肌瘤细胞(RD)上分离EV71,分段扩增获得EV71的全序列,用BLAST、Bioedit和MEGA 4进行序列分析.结果 获得1株EV71分离株SDLY107,基因组全长7405 bp,全基因组核苷酸序列与2008年的阜阳株Fuyang.Anhui.P.R.C/17.08/2同源性最高,为98.6%,与原型株BrCr/70的同源性为80.0%,与神经毒型株MS/87的同源性为86.5%.系统进化分析表明,SDLY107与中国大陆的北京株、河南株、广西株、深圳株、兰州株、阜阳株、重庆株、浙江株的亲缘关系较近,按照传统的VP1基因分型方法,可归为C4亚型,是近年来我国大陆流行的主要基因亚型.氨基酸序列分析发现,SDLY107与其他毒株相比,有2个特有的突变(E947D,K1873R).结论 SDLY107分离株属于C4亚型,氨基酸突变E947D和K1873R可能与EV71的致病性有关.

Abstract：

Objective To isolate enterovirus 71 from a death children,and analyze whether the neurovirulence was related to the variation of nucleotide and amino acid. Methods Enterovirus 71 was isolated from throat swabs which were colleted from Shandong Linyi People's Hospital. The full length genome was sequenced by amplification with RT-PCR and sequencing of 9 overlapped gene fragments covering full length of the genomes. The nucleotide and amino acid sequenced was aligned by BLAST, Bioedit and MEGA 4. Results A strain of enterovirus 71 was isolated and named as SDLY107. The full length was 7405 bp. The results of homology analysis of overall nucleotide sequence showed that strain Fuyang. Anhui. P. R. C/17.08/2 had highest homology (98.6%)with strain SDLY107, and the homology was 80.0% between strain SDLY107 with prototype strain BrCr/70,and 86. 5% between strain SDLY107 with nerve strain MS/87. Phylogenetic analysis showed that the phylogeny was close between SDLY107 with some isolated strains from Chinese Mainland, such as Beijing, Henan, Guangxi, Sbenzhen, Lanzhou, Fuyang, Chongqing and Zhejiang strains, which was clustered for C4 subtype. The results of amino acid sequence analysis showed that there were 2 mutations, E947D and K1873R, for strain SDLY107. Conclusion SDLY107 belonged to C4 subtype, amino acid mutations E947D and K1873R of which may be relevant to the pathogenicity of EV71.     

副黏病毒F蛋白融合活性位点中病毒特异性氨基酸基因突变分析

目的 了解副黏病毒融合蛋白(F)融合活性位点中的病毒特异性氨基酸在细胞融合中的作用.方法 以新城疫病毒(NDV)和人副流感病毒(hPIV)为例,在已确定的F蛋白融合活性位点中对病毒特异性氨基酸进行定点突变,然后将突变体F基因与同源或异源的血凝素.神经氨酸酶(HN)基因共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达.Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率.结果 在NDV F的突变体中,N150D-L152D的融合功能达到野毒株的46.31%;而N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E的融合活性却几乎消失,分别只有野毒株的1.25%、3.14%和2.23%;N296D-N297D的融合功能是野毒株的97.68%.在hPIV F的突变体中,D143A-E145A的融合功能达到野毒株的32.63%;E223Q-K224A几乎不能形成合胞体,其融合活性只有野毒株的1.91%;K263A-R265A、D268A-D270A和R475A-R476A的融合功能分别是野毒株的14.63%、19.52%和28.95%.FACS结果表明,NDV F的N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E突变体及hPIVF的E223Q-K224A突变体F蛋白在细胞表面几乎没有表达;其余所有突变体F蛋白的表达效率与野毒株相比,基本不变.结论 对于NDV F来说,N257、N258、Q259、G271、N272、Q279、Q281对NDV F的特异性细胞融合功能起重要作用;N150和L152也起一定的作用,但是N296和N297却没有作用.对于hPIV F来说,E223和K224对hPIV F的特异性细胞融合功能起非常重要的作用;D143、E145、K263、R265、D268、D270、R475、R476的作用也很重要.     

用指示基因法定量分析副粘病毒包膜糖蛋白所致的细胞融合

目的建立一种定量分析副粘病毒包膜糖蛋白融合细胞功能的方法。方法　将Vtf\|7重组痘苗病毒感染BHK21细胞后，分别转染待测基因DNA和Pg1nt7β-galDNA，16h后将两个细胞群混合，37℃15h后用NP-40裂解细胞，取上清进行显色反应，在SOFTMAX软件支持下用ELISA自动测定仪在570nm测吸光度A值。结果　指示基因法与细胞计数法有密切相关关系，r=0.9890(P＜0.01)；与面积判断法的符合率达100%。最佳主要反应条件包括16mmol/L底物浓度；显色反应20～25min；1μgDNA转染量；每种细胞群接种1×10     

风疹病毒分子流行病学研究

目的 阐述风疹病毒(RV)的遗传变异规律及分子流行病学特点。方法 利用RT-PCR扩增RVE1基因，然后测序，并用DNA STAR软件包绘制系统发生树，以分析RV的分子流行病学特点。结果 测得RV JR23株E1基因的序列，与GenBank中包括3株中国株在内的不同时间、地点分离的30株病毒株一起绘制了系统发生树，比较了各株可产生HI抗体和中和抗体区的氨基酸变异情况。(1)总体上RV的核酸、氨基酸序列高度保守。中国的4株分离株遗传性质差别相对较大，其中379株和BRD株构成了不同于其他29株的基因Ⅱ型，就其遗传来源及生物学性状需进一步研究。(2)JR23株与英、美、日20世纪60年代流行株序列相近，其遗传来源可能为20世纪60年代世界流行株的中国衍生株，但具体的初始流行时间未知。结论 RV的流行有地域的差异，其分子流行病学特点与时间有关。因为人是RV的惟一宿主，所以人员的流动性，影响了RV的流行特点。     

艾滋病痴呆综合征患者HIV-1B gp120基因的克隆及真核表达

目的 克隆艾滋病痴呆综合征(ADC)患者体内不同部位的HIV-1B gp120基因,并在人神经胶质瘤细胞U87中表达.方法 分别以一例ADC患者尸检标本的外周(淋巴结)和中枢(脉络丛、大脑枕叶白质)来源的基因组DNA为模板,PCR扩增HIV-1 gp120基因,序列测定后,将目的基因插入表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达载体gp120/pcDNA3.1(+),将所构建的重组表达载体用脂质体法转染人神经胶质瘤U87细胞,间接免疫荧光法测定HIV-IB gp120的表达情况.结果 克隆了ADC患者体内外周淋巴结、脉络丛、大脑枕叶白质3个部位的HIV-1B gp120基因,所构建的表达质粒gp120/pcDNA3.1(+)转染U87细胞后可表达目的蛋白.结论 ADC患者不同部位来源的HIV-1B gp120基因均可在U87细胞中表达,为进一步研究HIV-1B gp120包膜蛋白的神经毒性及其作用机制提供条件.     

两种微量ELISA法检测风疹病毒抗体的比较

建立两种微量ELISA 法测定风疹病毒抗体,与HI 试验有良好的相关关系,二者总符合率88.9%,阳性符合率95.2%,与HI 相比,ELISA 法简便、快速、敏感。     

不同风疹病毒株的结构多肽肽图分析

对风疹病毒GOS-_(10)、RA27/3、JR_(11)、JR_(23)的结构多肽肽图分析表明,GOS-_(10)、RA27/3两株的多肽有相同的肽图,而JR_(11)、JR_(23)株与前两株的肽图有差异,JR_(11)、JR_(23)株之间也略有不同。由此可见,济南地区存在着不同风疹病毒株的流行。