HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄的活力

目的 建立一种HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄活力的方法。方法 酶与其底物7-ADCA及D-对羟基苯甘氨酸甲酯，在20℃的溶液中，搅拌转速为250r/min条件下反应10min，通过测定反应液中头孢羟氨苄的含量，从而换算出合成酶活力的数值。采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(用lmol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0)-甲醇(98:2)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：230nm。结果 头孢羟氨苄在0.24~0.39mg/mL范围内线性关系良好(r=1.0000)，回收率均在99%~101%范围内，RSD为0.40%。结论 该测定方法专属性强、准确可靠、重现性好，适用于青霉素酰化酶合成酶活力的检测。     

HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中的手性杂质

目的 建立HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中潜在的手性杂质[杂质1：L-对羟基苯甘氨酸,杂质2：L-对羟基苯甘氨酸甲酯,杂质3：D-对羟基苯甘氨酸]的含量和限度。方法 采用Crownpak CR（-）手性色谱柱（150 mm×4.0 mm,5 μm）;流动相：高氯酸溶液（pH 1.7）-甲醇（90：10）;检测波长为226 nm;流速：0.7 mL·min^-1;柱温：25℃。结果 杂质1、杂质2和杂质3均在其定量限浓度~2.400 μg·mL^-1内线性良好（r分别为1.000 0,0.999 9,0.999 9）,平均回收率分别为99.97%,100.30%和103.18%,RSD分别为0.30%,0.64%和0.62%（n=9）。结论 该方法专属性强,准确、方便,可以作为D-对羟基苯甘氨酸甲酯中手性杂质1、杂质2和杂质3的液相分析方法。