玳玳果黄酮降脂提取物体内组织分布规律及特征研究

目的：建立UPLC-MS/MS分析方法同时测定玳玳果黄酮降脂提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷在大鼠10种脏器组织中含量，分布规律及特征。方法：采用UPLC-MS/MS技术建立提取物效应组分新橙皮苷及柚皮苷在大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠、脂质、肌肉组织中的定量分析方法；大鼠给药后分别于0.33，0.67，1，4，8 h的5个时间点，分别摘取以上10种脏器组织，测定脏器组织及血液中效应组分的质量浓度，采用DAS（V 2.0）药动学软件对各样本的药物浓度-时间数据进行房室拟合，并计算不同组织效应组分的药-时曲线下面积（AUC）及平均滞留时间（MRT）。结果：所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法具备良好的专属性、标准曲线及线性范围良好、方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定；玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在血液中的分布符合一室模型，除肾脏及脑组织外，其余脏器中提取物效应组分的房室特征多为静脉注射的二室模型，柚皮苷在肾脏中的拟合结果为非静脉注射的二室模型，新橙皮苷在脑组织拟合结果为静脉注射的三室模型，给药后8 h各组织中效应组分新橙皮苷及柚皮苷AUC值大小顺序均为小肠 > 胃 > 肾 > 脂质 ≈ 脾脏 > 肺 > 肌肉 > 肝 > 心 > 脑，效应组分在各脏器中均无明显蓄积；效应组分在血液、肾脏、肝脏中的滞留时间较长，MRT均大于2 h，脂质最短，MRT不足1 h；各脏器中新橙皮苷的药-时曲线下面积约是柚皮苷的3倍，而心、肝、肾中则是3.5，2.1和3.4倍。结论：玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠组织中分布迅速，达峰时间早于血液；效应组分在肠道内消除缓慢，给药8 h后在各脏器中的含量均显著下降且无特异的蓄积部位。研究结果揭示玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠体内的分布特征及规律，为进一步理解玳玳果黄酮降脂提取物在体内的作用靶点及机制奠定了基础。     

三叶青藤叶配方颗粒急性毒性试验

目的观察三叶青藤叶配方颗粒的小鼠急性毒性反应,初步评价其用药安全性。方法采用最大耐受量（MTD）试验法,取昆明小鼠40只,雌雄各半,按体质量随机分为给药组及空白组;给药组以0.76 g/mL三叶青藤叶配方颗粒最大给药浓度药液按小鼠灌胃最大给药体积40 m L/kg给药;空白组灌服40 m L/kg蒸馏水,连续观察14 d,观察2组急性毒性症状谱,记录2组小鼠累计死亡数、脏器指数及体质量变化。结果无法得出三叶青藤叶配方颗粒半数致死量。最大耐受实验观察期间给药组小鼠未见中毒反应,无动物死亡;给药后10～15 min,给药组小鼠行动减缓,对外界刺激反应迟钝;给药25～30 min后,开始逐渐恢复正常活动及饮食饮水;给药组给药14 d后解剖肉眼未见脏器异常。比较2组的脏器指数及小鼠体质量变化,差异无统计学意义（P>0.05）。结论三叶青藤叶配方颗粒的小鼠灌胃给药最大耐受剂量大于最大给药量30.4 g/（kg·d）,相当于是临床按60 kg体重计算每公斤体质量日用量的121.6倍以上;三叶青藤叶配方颗粒口服毒性小,临床剂量下用药安全可靠。     

三叶青地上部分抗炎提取物质量控制研究

目的 建立三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)质量控制方法。方法 采用薄层色谱法鉴别三叶青地上部分药材;采用比色法测定三叶青地上部分抗炎提取物总黄酮含量;建立HPLC法同时测定三叶青地上部分抗炎提取物7个效应组分含量,并在此基础上建立了以异荭草苷为内参物,同步测定7个效应组分的 HPLC一测多评法。结果 6批THAA供试品色谱,在与三叶青地上部分对照药材及混合对照品色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点,各组分分离良好;建立的比色法在9.63～57.79μg.mL_^-1范围内呈良好的线性关系,回归方程为A=1.120×10_^-2C-2.400×10_^-3,r=0.9995,3批THAA总黄酮平均含量为60.02%～60.32%。HPLC法测得三叶青地上部分抗炎提取物中绿原酸,荭草苷,异荭草苷,异荭草苷-2-O’-鼠李糖苷,牡荆苷,异牡荆苷,牡荆苷-2-O’-鼠李糖苷的平均含量分别为21.64%、8.04%、6.61%、19.51%、2.03%、1.59%、4.03%;一测多评法同时测定三叶青地上部分抗炎提取物中7个抗炎效应组分含量与外标法分别测定的含量结果无显著性差异。结论 所建立的薄层色谱鉴别法,总黄酮的含量测定法以及7个效应组分HPLC含量测定法及一测多评法,可作为三叶青地上部分抗炎提取物内在质量控制质量标准的参考依据。     

玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分的含量测定研究

目的 建立HPLC法同时测定玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的含量。 方法 采用高效液相色谱法,色谱柱Lichrocart C₁₈ 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.2%醋酸水溶液为流动相; 程序洗脱; 检测波长284 nm; 流速1.0 mL/min; 柱温30 ℃; 进样量10 μL。外标法同时测定提取物效应组分新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的含量。 结果 玳玳果黄酮降脂提取物新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的质量浓度分别在76.365～1 491.482 μg/mL(r=0.999 4),49.155～1 024.283 μg/mL(r=0.999 7),5.134～61.151 μg/mL(r=0.999 5),1.771～40.962 μg/mL(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系; 平均回收率(n=6)分别为100.3%,102.2%,97.98%及95.16%; 相对标准偏差分别为1.50%,1.79%,1.70%及2.42%。结论 所建立的HPLC法同时测定提取物4个效应组分群含量的方法,可用于多指标定量监控玳玳果黄酮降脂提取物的质量。     

苁蓉舒痉颗粒剂的薄层色谱鉴别

目的建立苁蓉舒痉颗粒剂的薄层色谱鉴别法。方法采用薄层色谱法,针对苁蓉舒痉颗粒剂处方中的主药酒苁蓉、丹参、赤芍,以聚酰胺薄膜为固定相,甲醇-醋酸-水（2∶1∶7）为展开系统,鉴别酒苁蓉;以硅胶G为固定相,三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4）为展开体系1,石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开体系2,10%硫酸乙醇为显色剂,鉴别丹参;以硅胶G为固定相,三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂,5%香草醛硫酸为显色剂,鉴别赤芍。结果三批苁蓉舒痉颗粒剂分别鉴别酒苁蓉、丹参、赤芍时,供试品在对照物相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。本方法专属性强,重复性良好,且提示制成的颗粒剂保留了原药材的组分群。结论研究建立的苁蓉舒痉颗粒薄层色谱法可以用于该颗粒剂的定性鉴别。     

苁蓉舒痉颗粒中间体总多糖的质量控制研究

目的建立分光光度比色法测定苁蓉舒痉颗粒中间体的总多糖含量。方法采用蒽酮-硫酸比色法,以无水葡萄糖为对照,在582 nm波长处测定总多糖含量,进行精密度、稳定性、重复性及加样回收率等方法学考察。结果无水葡萄糖质量浓度在3.41~27.26μg/mL范围内吸光度值呈良好的线性关系,回归方程为A=3.73×10^2C+4.47×10^2(r=0.998 8),平均回收率为98.32%(RSD=1.65%),3批苁蓉舒痉颗粒中间体的总多糖含量分别为20.48、22.04、24.81 mg/g。结论方法准确,重复性良好,可用于苁蓉舒痉颗粒中间体总多糖质量控制。     

玳玳果黄酮降脂提取物体内效应组分排泄动力学研究

目的 建立同时测定大鼠尿液及粪便中提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷含量方法,研究大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后的尿药排泄动力学及排泄特征。方法 采用UPLC-MS/MS建立效应组分新橙皮苷及柚皮苷在大鼠尿液及粪便的定量分析方法,计算口服玳玳果黄酮降脂提取物后不同时间点新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄率,并以亏量法计算尿液中的消除半衰期及消除速率常数,评价大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后尿药排泄动力学及排泄特征。结果 所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法专属性良好、标准曲线及线性范围良好,方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定,该方法能够满足大鼠尿液及粪便中效应组分的定量检测需要;口服72 h后,大鼠尿液中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为（1.76±0.76）‰和（1.39±0.57）‰;大鼠粪便中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为（52.45±6.30）%和（51.57±4.80）%;口服后效应组分新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄量分别在24~36 h和4~8 h达到峰值;72 h后仍有药物经尿液排泄,给药后24 h粪便累计排泄率便达坪值;亏量法计算得新橙皮苷消除速率常数为（0.080±0.021）·h^-1,消除半衰期为（9.41±3.22）h,柚皮苷消除速率常数为（0.077±0.017）·h^-1,消除半衰期为（9.51±2.97）h,新橙皮苷及柚皮苷的动力学参数间差异无统计学意义。结论 口服给药后效应组分原形即通过粪便较快地排出体外,粪便排泄是效应组分排出体外的主要途径,新橙皮苷及柚皮苷经尿液排泄的特征无明显差异。     

健康教育对肺结核患者遵医行为的影响

目的 研究分析健康教育对肺结核患者遵医行为的程度及其对临床效果的影响.方法 选择自2009年5月～2010年12月收治的住院治疗患者共82例,随机分为观察组与对照组,观察组采取具有针对性的健康教育,对照组不予以健康教育.对两组患者的遵医行为进行比较分析.结果 实施健康教育的观察组对该病的知晓率达98.7%,对照组为76.8%,观察组的复发率也明显比对照组低（P〈0.05）.结论 对患者实施健康教育可提高自我保健意识,更能提高患者对肺结核病的认知率及其患者遵医行为的依从性,改变不良生活方式,增加治愈率,减少复发率.     

苁蓉舒痉颗粒中间体总多糖的质量控制研究

目的建立分光光度比色法测定苁蓉舒痉颗粒中间体的总多糖含量。方法采用蒽酮-硫酸比色法,以无水葡萄糖为对照,在582 nm波长处测定总多糖含量,进行精密度、稳定性、重复性及加样回收率等方法学考察。结果无水葡萄糖质量浓度在3.41～27.26μg/mL范围内吸光度值呈良好的线性关系,回归方程为A=3.73×102C+4.47×102（r=0.998 8）,平均回收率为98.32%（RSD=1.65%）,3批苁蓉舒痉颗粒中间体的总多糖含量分别为20.48、22.04、24.81 mg/g。结论方法准确,重复性良好,可用于苁蓉舒痉颗粒中间体总多糖质量控制。     

玳玳果黄酮提取物效应组分新橙皮苷及柚皮苷敲出分离制备

目的对玳玳果黄酮提取物主要效应组分新橙皮苷及柚皮苷进行敲出分离纯化。方法采用制备薄层色谱法结合高压制备液相色谱分离技术,以氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）下层溶液为展开体系,碘蒸气为定位显色剂,初步敲出分离新橙皮苷及柚皮苷;再用色谱性高压制备柱Ultiamte XB-C18（10 mm×250 mm,5μm）,保护柱XB-C18（5μm）,流速3.0 mL/min,检测波长284 nm,温度为室温,进样量100μL,进一步分离纯化新橙皮苷与柚皮苷,高效液相色谱法检测其纯度。结果制备薄层色谱法敲出分离得柚皮苷及新橙皮苷纯度为69.24%和75.45%,得率分别为23.15%和26.77%;高压制备液相色谱法进一步分离得柚皮苷及新橙皮苷纯度为98.81%和98.84%,得率分别为21.73%和24.87%。结论采用制备薄层色谱结合高压制备液相色谱可从玳玳果黄酮提取物敲出分离纯度大于98%的主要效应组分新橙皮苷及柚皮苷。