抗HER2单抗注射液(皮下注射)的质量控制

目的 研究并建立针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)的关键质量属性质控方法。方法 分别采用胰蛋白酶或Lys-C酶切结合反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)的肽图分析法进行抗HER2单抗的特异性鉴别。采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate, CE-SDS)和分子排阻色谱(size-exclusion chromatography, SEC)法进行纯度控制。采用阳离子交换色谱(ion-exchange chromatography, IEC)法进行电荷异质性分析。采用亲水相互作用液相色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)法进行寡糖图谱分析。采用酶活力测定法分析透明质酸酶含量。采用BT474细胞增殖抑制法测定生物学活性。采用紫外分光光度法测定蛋白含量。结果 两种肽图检测法均获得特征图谱，对抗HER2单抗发挥很...     

机器学习在抗体制剂不溶性微粒分类识别中的应用

目的：对微流成像技术收集的抗体注射剂的不溶性微粒图片进行分类建模,以建立不溶性微粒的分类和溯源分析方法。方法：本研究首先制备并用微流成像系统获得气泡、硅油液滴、玻璃颗粒、反复冻融产生的蛋白颗粒4种不同类型颗粒的图片,并将这些图片分为训练集和测试集两部分。采用3种卷积神经网络（Convolutional Neural Network,CNN）模型,即ResNet50、DenseNet201和ShuffleNetV2,对训练集中的图片进行训练和识别,建立数据集,并用于对测试集图片的识别。此外,通过在实际样品中的应用,将CNN模型识别和人眼分类的准确性和速度进行对比。结果与结论：各模型对于测试集的识别准确率都达到96%以上,且DenseNet201模型具有更优的稳定性;与人眼识别相比,准确率没有显著差异,识别速度更快且具有显著差异。本研究表明CNN模型能够对蛋白质制剂中不溶性微粒图片进行分类和溯源分析,以便采取有针对性的措施,降低药品的潜在风险和安全隐患。     

大脑皮层投射神经元的起源与分型

哺乳动物的大脑皮层投射神经元作为皮层的主要神经元,广泛参与机体的运动、感觉、认知等功能的调节和支配。大脑皮层投射神经元包括兴奋性投射神经元和抑制性投射神经元两大类,其中又以兴奋性投射神经元为主。皮层兴奋性投射神经元种类较多,但多数具有各自特有的发育规律和表面分子标记物。研究大脑皮层投射神经元的起源和发育过程及规律,有助...     

反相高效液相色谱法测定抗体药物中组氨酸的含量

目的 建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)。方法 利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法，并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果 该方法专属性良好，在组氨酸的保留时间范围内，无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰，且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%～102.4%之间，且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%～105%之间，变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170～4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85～20.15μg)范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系(R²=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准...     

折光率对微流成像法检测蛋白制剂不溶性微粒的影响

目的：蛋白制剂中不溶性微粒的含量是衡量样品质量的重要指标之一,为了更为准确地检测不溶性微粒的含量和粒径,本研究探讨了溶液折光率对于微流成像系统检测不溶性微粒的影响。方法：本研究以牛血清白蛋白（BSA）为例,通过常见的外界刺激条件（冷冻-解冻）制备高浓度的蛋白质不溶性微粒,并将此微粒稀释至不同折光率的溶液（由PEG1000、海藻糖制备）中,利用微流成像系统检测不溶性微粒的含量。结果：当溶液的折光率接近蛋白质不溶性微粒折光率时,利用微流成像技术检测的不溶性微粒含量低于实际的微粒含量。此外,随着溶液折光率的增加,采用微流成像技术检测出的不溶性微粒的粒径也随之减小。结论：蛋白质溶液的折光率发生改变,会影响利用微流成像技术检测不溶性微粒的准确性。因此,利用微流成像技术检测蛋白制剂中不溶性微粒时,需要考虑到制剂处方的折光率对于检测不溶性微粒的影响,必要时可以采用稀释的方法降低折光率对蛋白质颗粒的屏蔽作用。     

手持拉曼光谱仪在抗体类药物鉴别中的应用研究

目的：基于主成分分析（PCA）算法的Trutools模式，利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法：通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体，采集拉曼光谱数据，建立数据模型，分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体，采用加热和光照两种条件对其进行加速降解处理，利用手持拉曼光谱仪对加速降解的抗体进行检测，研究所建方法能否检出加速降解的抗体。并通过分子排阻色谱（SEC-HPLC）、离子交换色谱（IEC-HPLC）及竞争结合酶联免疫吸附测定（ELISA）法对加速降解的抗体进行检测，与拉曼光谱检测结果进行比较。结果：通过建立的拉曼光谱数据模型可以鉴别3种不同类型的抗体，且拉曼光谱可以鉴别加速降解后的抗PD-1抗体。结论：手持拉曼光谱仪可以用来快速鉴别抗体类药物。本研究首次将手持拉曼光谱仪引入到抗体药物大分子检测中，为抗体类药物的现场快速鉴别及打假工作提供了新的工具与方法。