海胆黄多糖SEP纯化工艺的研究

为了规模化制备具有抗肿瘤活性的海胆黄多糖(SEP),简化纯化步骤和提高多糖收率,在原有分离纯化方法的基础上,结合超滤技术,对SEP的纯化工艺进行了优化。采用木瓜蛋白酶-Sevag联用法,以超滤法替代减压浓缩和透析去除杂质,优化酶法提取条件和超滤参数。研究结果表明:用0.6%的木瓜蛋白酶在pH 6.5、60℃酶解5 h,可去除18.3%的蛋白质,3次Sevag法后,蛋白质去除率达71.7%,多糖回收率80.1%。采用截留相对分子质量100 k的膜超滤浓缩,压力0.05 MPa,原液质量浓度1.2 mg/mL,浓缩3倍时的多糖截留率为84.0%。各步骤多糖累计回收率为67.3%,该纯化工艺可获得高产率高纯度的SEP,为规模化制备SEP奠定了基础。     

荧光标记法测定大鼠血浆中海胆黄多糖研究

通过FITC荧光标记海胆黄多糖SEP,研究大鼠尾静脉注射给药SEP的血浆代谢。结果表明,荧光标记的海胆黄多糖SEP-Tyr-FITC纯度可达99%。与空白对照组及SEP组相比,SEP-Tyr-FITC组小鼠脾细胞增殖无显著差异。其在大鼠体内的血浆清除半衰期为0.24 h,消除速率常数(Ke)为2.867,给药后的最大血药浓度(cmax)为860μg/mL,消除半衰期(t1/2)为0.24 h,药-时曲线下面积(AUCt)为366.4 h·μg/mL。所用方法的定量下限为0.02 mg/mL,标准曲线线性范围为0.02～1.0 mg/mL。最低定量限(LLOQ)、低、中、高4个浓度批内变异系数和批间变异系数均小于15%,相对回收率均在85%～115%之间。同时,各浓度SEP血浆样品处理前或处理后室温放置6 h、-20℃冷冻融解1次稳定性良好,相对标准偏差均小于10%。     

药物中有关物质的色谱分析研究近况

综述近年来药物中有关物质检查的色谱分析技术及其应用,比较了各种方法的优缺点,并简要介绍了对药物中有关物质进行检查、结构分析的一般流程。药物中的有关物质与药物的质量密切相关,对有关物质的检测和控制也显得愈发重要。     

蜂毒肽突变体Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用

目的:为了提高蜂毒肽Melittin的抗肿瘤活性,我们设计出新型多肽并将其命名为Melittin-K1。并对多肽Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用进行研究。方法:采用CCK-8法检测细胞活力。扫描电镜拍照结合培养基上清中乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）的表达水平来评价细胞膜的损伤水平。构建BEL-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价Melittin-K1、Melittin体内对肝癌生长的影响以及毒性。结果:与Melittin相比,Melittin-K1抑制BEL-7402细胞生长的作用更显著;与L02细胞相比,BEL-7402对Melittin-K1的杀伤作用更敏感;Melittin-K1体外抑制BEL-7402细胞生长呈时间、剂量依赖性。扫描电镜以及LDH检测结果均显示Melittin-K1处理组细胞膜的破损情况严重。BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型结果表明,Melittin-K1体内显著抑制肿瘤生长,其抗肿瘤作用明显高于同剂量Melittin。Melittin-K1和Melittin体内毒性小,主要表现在,与模型组相比,体重曲线、肝功指标均未发生明显改变。结论:Melittin-K1能够明显抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖,是一种极具潜力的抗肝癌药物。