双组分转导系统CNX_RS34865/CNX_RS34870对安丝菌素生物合成的调控机制研究

摘要：目的 探究珍贵束丝放线菌(Actinosynnema pretiosum)中双组分转导系统CNX_RS34865/CNX_RS34870对A. pretiosum中 安丝菌素P-3(AP-3)生物合成的调控机制。方法 本研究以A. pretiosum X47菌株为出发菌株,构建双组分转导系统CNX_RS34865/ CNX_RS34870中调控基因CNX_RS34870的缺失突变菌株;利用HPLC分析及生物活性测定分析出发菌株X47与CNX_RS34870突 变菌株(ΔRS34870)的AP-3产量差异;利用转录组测序分析菌株之间各基因的转录水平差异,分析CNX_RS34870对菌株AP-3生物 合成的影响及作用机制。结果 与出发菌株X47相比,ΔRS34870菌株在液体发酵条件下AP-3生物合成量显著下降,在第6天时, ΔRS34870菌株AP-3产量降低了36.94%。转录水平分析显示ΔRS34870菌株中1524个基因的转录较X47明显不同,其中AP-3生物合 成基因簇中的asm1、asm2、asm30、asm32、asm33、asm34、asm35和asm37基因以及与初级代谢中与AP-3前体合成相关的pgk基因 出现了显著下调。结论 CNX_RS34870是菌株AP-3生物合成的正调控基因,可通过调控AP-3生物合成基因簇的转录以及影响初级 代谢从而影响AP-3的产生。本研究将为了解AP-3生物合成的调控网络以及工业菌株的遗传改造提供理论指导。     

免疫抑制剂概述

免疫抑制剂在器官移植和自身免疫系统疾病方面疗效显著,甚至使病人产生依赖性。目前市场上免疫抑制剂种类繁多,作用机制多样。本文对几种主要免疫抑制剂作了较详细的阐述。     

HPLC法测定克拉维酸钾有关物质

建立HPLC法,以进一步用液相色谱-质谱联用技术检查并推证克拉维酸钾中的有关物质。采用HPLC法测定,液相色谱条件为:采用ZORBAX ODS色谱柱,流动相A为0.01mol.L-1乙酸铵,流动相B为流动相A-乙腈(1∶1),流速:1mL.min-1,检测波长:230nm。克拉维酸钾浓度在5~160μg.mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),最低检测限为0.3μg.mL-1。本法简便、准确、灵敏度高,适用于克拉维酸钾中有关物质的测定。     

微生物相关的免疫抑制剂

主要介绍了几种微生物产生的免疫抑制剂。从发现时间、结构、作用机制等方面将各种免疫抑制剂作了比较，对其适应症、副作用等进行了阐述。大环内酯类、杂环类、直链类、芳香族类免疫抑制剂各有其特点，在治疗器官移植、自身免疫系统疾病等方面发挥着不同的作用。     

中药来源的免疫抑制剂

免疫抑制剂种类繁多,中药类占一定的比重。中药类免疫抑制剂疗效显著,副作用少,在器官移植和自身免疫系统疾病方面发挥着举足轻重的作用。     

头霉素C基因簇大片段敲除促进克拉维酸合成

摘要：目的 本研究以棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)F613-1为出发菌株，构建头霉素C基因簇中orf10、blp、lat、pcbAB和pcbC 5个完整基因片段(cep)的基因缺失突变菌株，探究头霉素C和克拉维酸(clavulanic acid，CA)生物合成的关系。方法 通过生物活性测定法检测出发菌株F613-1和两株cep片段基因缺失突变菌株(△cep::apra-2和△cep::apra-4)中的头霉素C产量，同时通过HPLC检测上述菌株的生物量以及CA产量，分析头霉素C和CA生物合成之间的关系。结果 与出发菌株F613-1相比，△cep::apra-2和△cep::apra-4菌株的表型没有明显变化；固体发酵168h，F613-1菌株中头霉素C产量为0.8875g/L，△cep::apra-2和△cep::apra-4菌株中的头霉素C产量均为0；液体发酵144h，突变菌株△cep::apra-2和△cep::apra-4中CA产量的分别为4.28和4.26g/L，较F613-1(3.16g/L)分别提高了35%和34%。结论 在头霉素C生物合成能力缺失的情况下，CA产量明显提高，说明头霉素C和CA的生物合成存在明显的竞争作用，这对于探究CA与头霉素C生物合成之间的关系提供有力的证据，并且为提高CA产量提供新思路，对CA的工业生产有一定的指导意义。     

克拉维酸钾中有关物质的HPLC／ESI／MS分析

目的检查并推证克拉维酸钾中有关物质。方法采用HPLC/ESI/MS液质联用技术,液相色谱条件为:色谱柱C18(250mm×4.6mm,5μm);柱温40℃;流动相A为0.01mol/L乙酸铵,流动相B为流动相A和乙腈(1∶1)混合物;流速1ml/min;柱后分流1∶1;检测:UV230;线性梯度洗脱。质谱条件:离子源:ESI;检出模式:正负离子二种形式;扫描范围:50~800m/z;电离电压:3.0kV;电喷雾接口干燥气(N2)流速318L/h;离子源温度150℃;锥孔电压30V。结果从克拉维酸钾中分离鉴定出6种有关物质,其中3种与欧洲药典列举的有关物质相同。结论克拉维酸钾在生产过程中生成多种有关物质,该方法为研究和鉴定克拉维酸钾中有关物质及其来源,提高药品质量和安全性提供了技术支持。