新生鼠胰岛干细胞分离、培养和分化的实验研究

目的　探索新生鼠胰岛干细胞体外分离鉴定、培养以及体外分化的方法。方法　用胶原酶消化新生大鼠胰腺 ,将消化的组织碎片在pH7.4～ 7.6条件下经含血清RPMI 164 0及无血清RPMI164 0 (添加bFGF ,EGF ,N 2 )培养液中培养 ,观察形成类胰岛样细胞团的全过程。用胰岛素释放实验检测胰岛功能 ,免疫荧光法检测nestin的表达。结果　胰腺消化碎片培养 3 6h内 ,可见nestin阳性细胞贴壁 ,添加bFGF ,EGF ,N2后nestin阳性细胞快速增长 ,18～ 2 4d形成类胰岛样细胞团 ,并可表达胰岛素。结论　胰腺细胞中nestin阳性细胞具有胰岛干细胞特点 ,经体外培养可获得类胰岛样细胞团     

重症急性胰腺炎的诊治进展

急性胰腺炎是一种常见急腹症 ,近年来发病率呈上升趋势 ,其中相当一部分发展成为重症急性胰腺炎 (severeacutepancreatitis) ,或一开始即为重症胰腺炎。重症胰腺炎病情凶险 ,病死率高。多年来对重症胰腺炎的诊断及治疗一直深受国内外学者的重视 ,现将近年来重症胰腺炎的诊治进展介绍如下。1　重症急性胰腺炎的诊断标准及严重程度评估1 .1　诊断标准　关于急性重症胰腺炎的诊断标准 ,1 996[1 ] 年贵州第六届全国胰腺外科学术会议提出定义如下 :指急性胰腺炎伴有脏器功能障碍或出现坏死、脓肿或假性囊肿等局部并发症或两者兼有。腹部体征有明…     

精索内动静脉高位结扎iNOS的表达与睾丸生精细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨精索内动静脉高位结扎术后，诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase．iNOS）的表达与生精细胞增殖和凋亡的关系。方法：免疫组化结合计算机图像分析系统检测iNOS阳性细胞光密度值；免疫组化方法检测并计算PCNA增殖指数（PCNA-Labeling index，PI）；原位末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-endlabeling method，TUNEL）检测生精细胞凋亡指数（apoptosis index，AI）。分析iNOS的表达与增殖、凋亡的相关性。结果：iNOS在术后3-15d表达增强，第7d呈强阳性表达。结扎组生精细胞PCNA增殖指数（PI）明显低于对照组（P〈0．01），凋亡细胞指数（AI）明显高于对照组（P〈0．01）。结论：精索内动静脉高位结扎，iNOS的表达与生精细胞PCNA增殖指数呈负相关，与生精细胞凋亡指数呈正相关。iNOS基因表达增强是生精细胞增殖减少和凋亡增加的重要原因。     

慢性胰腺炎K—ras基因突变的临床病理学意义

目的：探讨慢性胰腺炎K－ras基因突变的临床病理学意义。方法：9例手术切除的慢性胰腺炎的石蜡标本,用微解剖法分离慢性胰腺炎的胰导管上皮粘液细胞增生灶,提取,扩增DNA,用ASO斑点杂交检测K－ras基因第12密码子的碱基序列。对9例接受手术治疗的病人进行长期随访,结果：9例慢性胰腺炎中4例有明显的胰导管上皮粘液细胞增生,其中2例被检出GAT型突变,分别占全组和有胰管上皮粘液细胞增生的22％和505,两个突变病例分别是接受了胰体尾切除和胰头十二指肠切除手术,术后分别随访17年和10年,没有发现任何恶变迹象,结构：慢性胰腺为可以检出K－ras基因突变,发生了K－ras基因突变的慢性胰腺炎上皮粘液细胞增生灶,未必一定发生为胰腺癌,胰液、粪便、末梢血液和尿液的检测,以及胰腺组织细针刺液检出K－ras基因突变,对胰腺癌的诊断有重要参考价值,但不应视为胰腺癌的确诊依据。     

肿瘤热休克蛋白70-多肽复合物诱导特异性细胞毒T淋巴细胞产生的实验研究

目的　研究肿瘤细胞的热休克蛋白 70多肽复合物 (heatshockprotein 70peptide complexes ,HSP PC70 )诱导活化肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocytes,CTL)的作用及该CTL的杀瘤效应。方法　利用细胞培养 ,流式细胞技术 ,蛋白质的分离纯化技术 ,电泳技术 ,Western blot检测方法 ,T淋巴细胞的诱导及体外扩增 ,酶标技术等 ,测定肿瘤HSP70 多肽复合物诱导活化小鼠体内CTL产生的作用。结果　HcaF细胞HSP PC70的自然表达率为 6 3.5 % ,热诱导后为 75 .5 % ;HcaF细胞的HSP PC70能够诱导活化肿瘤特异性的CTL ,该CTL在效靶比例为 5 0∶1、2 5∶1、12 .5∶1时于体外对HcaF细胞的杀伤效率分别为 84.2 %± 3.2 %、47.9%± 2 .6 %和 14.8%± 3.0 % ;该CTLCD3、CD8的阳性率分别为 93%± 7% ,92 %± 8% ;将活化的CTL注入荷瘤小鼠体内可见明显的治疗作用 ,注入 10 7CTL 4次后 ,10 0 %的小鼠获长期生存。结论　肿瘤来源的HSP PC70具有强大的免疫原性 ,可活化CD8 T淋巴细胞成为肿瘤特异性的CTL ,该CTL具有较高的体外杀瘤活性和良好的治疗作用。     

胆囊癌组织中环氧合酶-2和P-耐药糖蛋白的表达及其相关性研究

目的 :探讨环氧合酶 -2 (COX 2 )和P -耐药糖蛋白 (P gp)在胆囊癌组织中表达的临床病理意义和相关性。方法 :采用免疫组织化学方法 (SP法 )检测64例胆囊癌组织标本中COX 2和P gp蛋白的表达。结果 :胆囊癌组织中COX 2和P gp蛋白的阳性率分别为 71 9% ( 4 6/ 64 )和 65 6% ( 4 2 / 64 ) ,显著高于癌旁正常组织中两者的阳性率 4 8% ( 2 / 42 )和 7 1%( 3 / 42 ) ,P <0 0 5 ,P =0 0 0 6。COX 2的表达与胆囊癌临床分期、淋巴结转移及患者的预后密切相关 ,P <0 0 5 ,P =0 0 0 0、0 0 0 0、0 0 1,而与组织学分级无关 ;P gp的表达与淋巴结转移及患者的预后密切相关 ,P <0 0 5 ,P =0 0 0 2、0 0 0 1,而与组织学分级、临床分期无关 ;二者的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小均无关。COX 2与P gp的表达调控呈正相关 ,两者的表达水平呈正相关性 ,r =0 42 5 ,P<0 0 5。结论 :在胆囊癌中 ,COX 2、P gp参与肿瘤发生发展过程并与患者的预后有关 ,COX 2和P gp的协同作用在肿瘤多药耐药的形成中起着重要作用 ,选择性COX 2抑制剂的应用会预防肿瘤耐药并提高化疗的疗效     

地塞米松治疗重症急性胰腺炎大鼠胰性脑病的研究

【目的】探讨地塞米松治疗重症急性胰腺炎（SAP）大鼠胰性脑病的治疗效果。【方法】将实验用大鼠随机分成3组，采用改良AhoS法制作SAP模型。A组为地塞米松治疗组：SAP制模后3h给予大鼠地塞米松治疗；B组为SAP大鼠空白对照组、C组为假手术组。分别检测各组模型制作成功后24h的血清髓鞘碱性蛋白（MBP），血清淀粉酶（AMS）、白细胞介素-6（IL-6）水平及脑水含量和脑组织细胞超微结构的变化。【结果】B组中大鼠血清AMS、MBP、IL-6、脑水含量水平显著高于C组与A组，且差异均有显著性（P均〈0．05）。C组大鼠脑细胞超微结构正常，无病变；B组大鼠神经元细胞核出现明显的边集现象，线粒体、内质网均出现不同程度的变性；A组大鼠脑细胞线粒体有轻度肿胀，细胞核、内质网无异常。【结论】地塞米松可有效的控制SAP炎症的发生扩散，降低胰性脑病发生率。     

三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及功能测定

目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化,并对其功能进行测定。方法采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,台盼蓝拒染实验观察细胞活力,利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞,倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化,定期收集培养细胞上清液,检测所培养肝细胞的分泌及生物转化功能,并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取(2～3)×108个肝细胞,存活率为(93±3)%;体外肝细胞培养第3天,细胞活力、清蛋白分泌功能恢复到最佳状态;三明治构型培养第7天,地西泮24h代谢量达到最高峰。三明治构型培养的肝细胞形成肝索样结构,并逐渐形成胆小管网络;在培养的21d内,清蛋白分泌、地西泮代谢始终维持较高的水平;肝细胞形态维持可达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能。三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究,而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。     

肺源性一氧化氮过度表达在急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的 探讨肺源性一氧化氮（NO）过度表达对急性坏死性胰腺炎（ANP）肺损伤的影响。方法 将72只成年SD大鼠随机分为三组各24只。ANP组、ANP预处理组（预处理组）逆行性胰胆管注射5％牛磺酸钠建立ANP大鼠模型，对照组注射等量生理盐水。造模前30min，预处理组腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）10mg／kg。造模后1、3、6、12h分别处死大鼠各6只，取肺泡巨噬细胞（AM）检测NO水平及诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）mRNA表达情况及TNF-a水平，并行肺组织病理学检查。结果 ANP组肺损伤随时间延长而逐渐加重；AM分泌TNF-a，NO水平逐渐升高，至6h达到高峰，12h回落。AMiNOS mRNA的表达情况与NO的变化趋势相似。预处理组各指标变化趋势与ANP组相似，但各指标均低于ANP组（P均〈0．05）；肺组织髓过氧化物酶（MPO）、支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、肺组织湿／干重值逐渐升高，12h达最高值．动脉血氧分压值逐渐降低。结论 ANP发生后肺泡AM的iNOS表达增强，肺源性NO过量表达，并促进TNF-a大量分泌，加重肺损伤，应用iNOS抑制剂则能减轻肺损伤。     

直线切割闭合器在全腹腔镜下胃肠Roux-en-Y 吻合中应用

目的：探讨直线切割闭合器在全腹腔镜下胃肠 Roux-en-Y 吻合中应用的可行性与安全性。方法回顾性分析2011年11月至2014年2月间在首都医科大学附属北京天坛医院普通外科全腹腔镜下21例胃远端切除患者的临床和随访资料,其中消化道重建全部采用了使用直线切割闭合器胃肠 Roux-en-Y 吻合。结果所有病例均顺利完成手术,无中转开腹。20例逆蠕动胃肠 Roux-en-Y吻合时间25-40（32.1±5.5）min,1例顺蠕动胃肠 Roux-en-Y 吻合时间为35 min。1例逆蠕动胃肠 Roux-en-Y 吻合患者术后第4天进食,术后6 d 出现胃排空障碍,经保守治疗术后12 d 缓解。其余患者围手术期未出现吻合口出血、瘘、狭窄（梗阻）等并发症。术后随访2周~27个月,1例术后5.5个月因小肠侧侧吻合口狭窄再次开腹手术,其余未见吻合口相关的并发症。结论直线切割闭合器在全腹腔镜胃肠Roux-en-Y 吻合中应用,避免了镜下缝合操作,具有操作简单、易于掌握、安全等特点。