卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后对巨噬细胞分化的影响

目的 探讨卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后,巨噬细胞分化亚型的改变.方法 Ficoll密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清液处理为实验组,用1640培养基处理为对照组,分别于培养第7天和第14天光学显微镜下观察巨噬细胞形态变化;流式细胞术检测实验组和对照组在不同时间后巨噬细胞表面细胞因子(CD64、CD163)表达情况.结果 培养第7天时,实验组巨噬细胞形态改变明显,细胞突起增加,细胞变细长,对照组细胞形态无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例高于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例低于对照组(P＜0.05);培养第14天时,实验组巨噬细胞形态逐渐恢复,对照组细胞形态仍无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例低于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例高于对照组(P＜0.05).实验组CD64-M1型巨噬细胞在第7天时M1/M0水平高于第14天,CD163-M2型巨噬细胞在第7天时M2/M0低于在第14天,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SKOV3细胞培养上清液可改变巨噬细胞形态,激活巨噬细胞免疫反应,随着时间的推移,细胞形态恢复,发生免疫抑制;同时,也可促进巨噬细胞分化,随着时间的推移,亚型也有不同,主要由CD64-M1型巨噬细胞向CD163-M2型巨噬细胞转变.     

卵巢癌细胞系SKOV3培养上清对巨噬细胞共刺激分子的影响

目的 研究卵巢癌细胞系SKOV3培养上清处理巨噬细胞后,巨噬细胞亚型的改变,以及CD80、CD86、CD40在不同巨噬细胞亚型上表达的差异.方法 Ficoll 密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清处理14 d后,采用流式细胞术检测巨噬细胞亚型的改变及不同亚型细胞CD80、CD86和CD40的表达情况.结果 流式细胞术检测显示,用SKOV3细胞培养上清培养巨噬细胞14 d后,巨噬细胞主要向CD163-M2型巨噬细胞分化[M1/M2=(12.37±1.76)%/(22.23±2.21)%].CD163-M2型巨噬细胞CD40的表达较CD64-M1型显著降低,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而CD80、CD86的表达无明显改变,2组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 SKOV3细胞培养上清刺激后的巨噬细胞向不同巨噬细胞亚型分化;M2型巨噬细胞较M1型巨噬细胞共刺激分子表达下调,提示这些共刺激分子在巨噬细胞的活化及免疫应答过程中很重要,可能与肿瘤细胞的免疫逃逸有关.     

以CRSIPR/Cas9 技术删除CTLA-4 后CTL抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果

目的：探讨使用CRSIPR/Cas9 技术删除CTL的免疫检查点CTLA-4 后CTL的抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果及其作用机制。方法：针对CTLA-4 设计特异性小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)并构建sgRNA/Cas9 质粒，使用慢病毒载体转染质粒至CTL获得删除CTLA-4 的CTL（CTLA-4 KOCTL），并验证质粒的转染效率和CTLA-4 的删除效率。BALB/c裸鼠随机分为2 组进行实验，预防性注射CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组），3 d 后接种结肠癌细胞株LS174-T，观察成瘤率及成瘤时间。建立结肠癌移植瘤裸鼠模型，成瘤后裸鼠随机分为2 组，分别给予CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组）进行细胞治疗，观察移植瘤的体积、裸鼠的生存时间，并检测移植瘤裸鼠血清中TNF-α 及IFN-γ 分泌水平。结果：设计sgRNA并成功构建以慢病毒为载体的CRSIPR/Cas9 系统，使用构建好的CRSIPR/Cas9 系统转染CTL细胞，转染效率最高可达（28.80±0.62)%，转染后以流式细胞术检测CTLA-4 的删除效率，CTLA-4 KO CTL 组的CTLA-4 表达较CTL 组显著降低[ （0.91±0.25）% vs（42.70±2.72）%，P<0.01]。预防实验中，实验组结肠癌移植瘤发生率明显低于对照组（33.33% vs 100.00%，P<0.01）。治疗实验中，实验组肿瘤体积较对照组显著减少[ （503.0±23.9）vs（911.2±51.4）mm3，P<0.05]，实验组裸鼠相较于对照组生存时间明显延长（中位生存期：78 vs 42 d，P<0.05），实验组裸鼠血清TNF-α（[ 268.93±17.04）vs（148.26±20.07）pg/ml，P<0.05]及IFN-γ（[ 315.38±18.67）vs (202.92±29.32) pg/ml，P<0.05]的分泌水平较对照组明显增高。结论：以CRSIPR/Cas9 技术成功删除CTL中免疫检查点CTLA-4 后可以显著抑制裸鼠结肠癌移植瘤的成瘤率、增强CTL对荷结肠癌裸鼠的抗肿瘤作用，并明显增高荷瘤鼠血清中TNF-α 和IFN-γ 水平。     

卵巢子宫内膜异位症患者miR-200c和ZEB1基因表达及其临床意义

目的 探讨卵巢子宫内膜异位症（EMs）患者微小RNA(miR)-200c和E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)基因表达及其临床意义。方法 收集2022年1月至2022年6月在石家庄市人民医院手术治疗的卵巢EMs患者异位、在位内膜组织各50例；选取同期由于宫颈上皮内瘤样病变（CIN）Ⅲ行全子宫切除术患者的子宫内膜组织50例作为对照组。采用实时荧光定量PCR法测定miR-200c和ZEB1基因表达；采用免疫组化法测定ZEB1蛋白表达。比较各组miR-200c和ZEB1相对表达量；比较各组ZEB1蛋白阳性率；分析miR-200c与ZEB1相关性；分析miR-200c和ZEB1与卵巢EMs关系。结果 异位内膜组miR-200c和ZEB1相对表达量高于在位内膜组和对照组（P<0.05）；在位内膜组miR-200c和ZEB1相对表达量高于对照组（P<0.05）。异位内膜组ZEB1蛋白阳性率高于在位内膜组和对照组（P<0.05）；在位内膜组ZEB1蛋白阳性率高于对照组（P<0.05）。经Pearson分析显示，miR-200c与ZEB1呈线性正相关（P<0.05）。经多因素L...     

miR-107在卵巢癌组织中的表达及其对VEGFA的影响

目的 探讨microRNA-107（miR-107）在卵巢癌组织中的表达及其对血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）表达的影响。 方法 选取卵巢癌患者56例为病例组,同期因子宫脱垂、子宫肌瘤或宫颈癌行全子宫双附件切除术患者60例为对照组,留取卵巢癌组织及正常卵巢组织,荧光定量PCR（real time quantitative PCR,RT-qPCR）检测两组标本中miR-107与VEGFA基因mRNA的表达情况,并对miR-107和VEGF mRNA表达量的相关性进行分析。此外,采用ROC曲线分析卵巢癌组织中miR-107表达水平对卵巢癌诊断的价值。 结果 RT-qPCR结果显示,与对照组比较,卵巢癌组织中miR-107的表达量显著下调,VEGFA基因mRNA的相对表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,且卵巢癌组织中miR-107和VEGFA基因mRNA的表达与卵巢癌患者的FIGO分期及淋巴结转移显著相关（P＜0.05）。Pearson相关性分析结果显示卵巢癌组织中miR-107表达水平与VEGFA基因mRNA表达量呈显著负相关性（r=-0.498,P＜0.001）。miR-107表达水平预测卵巢癌的ROC曲线下面积（AUC值）为0.936（P＜0.001）,最优截断点为1.639,其敏感度和特异度分别为94.6%和76.7%。 结论 卵巢癌组织中miR-107表达降低可能通过靶向上调VEGFA基因的表达来促进卵巢癌细胞的浸润和转移能力,从而在卵巢癌发生、发展中起作用。     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.