还原型谷胱甘肽对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响

目的:观察还原型谷胱甘肽对大鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响。方法:实验于2005-06在兰州大学基础医学院人体解剖学教研室实验中心完成。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组和还原型谷胱甘肽处理组。每组15只。制模成功后观测各组大鼠的神经行为变化,脑梗死体积,行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润数目,应用免疫组化方法检测细胞间黏附分子1的表达情况。结果:实验中假手术组未见动物死亡,缺血再灌注组2只动物死亡,还原型谷胱甘肽处理组1只动物死亡。死因均为蛛网膜下腔出血所致。①还原型谷胱甘肽处理组及缺血再灌注模型组动物均有不同程度的神经功能缺损,且还原型谷胱甘肽处理组动物神经行为学评分有改善眼(2.04±0.47),(2.71±0.29),分(P<0.05)演;还原型谷胱甘肽处理组梗死体积小于缺血再灌注模型组眼(20.21±1.55),(29.57±4.40)%,P<0.05演,假手术组未见梗死灶。②脑缺血2h再灌注24h后大鼠脑血管细胞间黏附分子1表达增加。阳性反应的细胞间黏附分子1主要见于脑缺血侧梗塞区及其周围的毛细血管壁,于神经元和胶质细胞也可见。还原型谷胱甘肽处理组的表达较缺血再灌注模型组减少眼(11.29±1.11),(17.14±1.77),P<0.05演。③假手术组细胞形态正常;缺血再灌注模型模型组右侧大脑缺血范围内皮质水肿明显,神经细胞外周隙扩大,毛细血管周隙增宽,血管内血栓形成,在皮质和纹状体可见大量死亡神经元,可见筛状坏死灶,间质水肿呈松网状,有大量中性粒细胞的浸润;还原型谷胱甘肽处理组大脑皮质神经细胞层次尚清晰,未见明显坏死灶,神经细胞及毛细血管周围间隙稍大,但明显小于缺血再灌注模型组。间质水肿、中性粒细胞的浸润也轻于缺血再灌注模型组。结论:外源性谷胱甘肽可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍,减少脑梗死体积,通过减少脑缺血引起细胞间黏附分子1表达,抑制中性粒细胞的浸润,从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应,而发挥对脑缺血后的保护作用。     

(-)-antofine及其新型衍生物体外抗乳腺癌活性

目的研究(-)-antofine及其新型衍生物抗乳腺癌活性。方法以高藜芦酸和3-苄氧基大茴香醛为初始原料设计合成一系列新型(-)-antofine衍生物,经熔点、电喷雾电离质谱(ESR-MS)、氢核磁共振(1H-NMR)和碳核磁共振(13C-NMR)等方法表征后,通过四甲基偶氮唑盐比色法测定其对人乳腺癌细胞MCF-7和大鼠扩散乳腺癌细胞F3Ⅱ的半数抑制浓度(IC50),并与紫杉醇、母体(-)-antofine作对比。结果衍生物5a、5b、5c、5e、5f、5h对MCF-7细胞的IC50>0.9μmol.L-1,对F3Ⅱ细胞的IC50>0.7μmol.L-1,均大于紫杉醇和母体(-)-antofine的IC50。(-)-antofine衍生物5g对MCF-7细胞和F3Ⅱ细胞的IC50分别是[(0.41±0.02)、(0.32±0.04)μmol.L-1],与紫杉醇[(0.46±0.02)、(0.38±0.03)μmol.L-1])比较无显著差异(P>0.05);小于(-)-antofine[(0.62±0.01)、(0.57±0.02)μmol.L-1],比较有显著差异(P<0.05)。衍生物5d对MCF-7细胞和F3Ⅱ细胞的IC50分别是[(0.48±0.01)、(0.42±0.02)μmol.L-1],与紫杉醇的IC50比较无显著差异(P>0.05);小于(-)-antofine的IC50,比较有显著差异(P<0.05)。结论 (-)-antofine衍生物5d和5g表现出优良的体外抗乳腺癌活性,均优于母体(-)-antofine。     

超声光散射断层成像(DOT)与乳腺癌血管生成病理学的相关性

 目的 通过研究乳腺癌超声光散射断层成像(diffused optical tomography,DOT)综合诊断指数(synthesis diagnostic index,SDI)以及CD105、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-lα,HIF-1α)在乳腺癌中的表达,探讨乳腺癌超声DOT-SDI与微血管密度(microvessel density,MVD)、VEGF和HIF-1α表达的关系。方法 采用超声DOT系统,研究163例乳腺良性病变(含典型良性病变108例,乳腺导管内乳头状瘤31例,乳腺导管上皮不典型增生24例)和167例乳腺癌(含乳腺导管原位癌37例,乳腺浸润性癌130例),测量超声DOT-SDI。通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)确定乳腺癌的最佳诊断阈值。使用免疫组化法检测乳腺癌CD105标记的MVD、VEGF和HIF-1α的表达强度。分析乳腺癌SDI值、MVD值以及VEGF和HIF-1α表达的关系。结果 经ROC曲线分析得出:SDI值的ROC曲线下面积(area under the zone,AZ)为0.879,确定SDI值＞140.81作为乳腺癌的最佳诊断阈值。乳腺典型良性疾病、乳腺导管内乳头状瘤、乳腺上皮不典型增生、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性癌的SDI值分别为:83.46±37.47、130.46±59.24、142.14±64.33、157.81±31.86、190.43±61.60。乳腺典型良性病变、乳腺浸润性癌与其他各组之间的差异有统计学意义(P＜0.05)。乳腺导管内乳头状瘤、乳腺上皮不典型增生、乳腺导管原位癌三者之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。SDI值与MVD值呈正相关(r= 0.682,P＜0.05)。VEGF、HIF-1α表达阴性、阳性、强阳性乳腺癌的SDI值之间的差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 DOT-SDI与乳腺癌MVD、VEGF和HIF-1α表达密切相关,可以间接反映血管生成活性和组织缺氧对乳腺癌的诊断、病情判断具有重要指导意义。     

还原型谷胱甘肽对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响

目的：观察还原型谷胱甘肽对大鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响。方法：实验于2005—06在兰州大学基础医学院人体解剖学教研室实验中心完成。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型，随机分为假手术组、缺血再灌注模型组和还原型谷胱甘肽处理组。每组15只。制模成功后观测各组大鼠的神经行为变化，脑梗死体积，行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润数目，应用免疫组化方法检测细胞间黏附分子1的表达情况。结果：实验中假手术组未见动物死亡，缺血再灌注组2只动物死亡，还原型谷胱甘肽处理组1只动物死亡。死因均为蛛网膜下腔出血所致。①还原型谷胱甘肽处理组及缺血再灌注模型组动物均有不同程度的神经功能缺损，且还原型谷胱甘肽处理组动物神经行为学评分有改善[（2．04&;#177;0．47），（2．71&;#177;0．29），分（P〈0．05）]；还原型谷胱甘肽处理组梗死体积小于缺血再灌注模型组[（20．21&;#177;1．55），（29．57&;#177;4．40）％，P〈0．05]，假手术组未见梗死灶。②脑缺血2h再灌注24h后大鼠脑血管细胞间黏附分子1表达增加。阳性反应的细胞间黏附分子1主要见于脑缺血侧梗塞区及其周围的毛细血管壁，于神经元和胶质细胞也可见。还原型谷胱甘肽处理组的表达较缺血再灌注模型组减少[（11．29&;#177;1．11），（17．14&;#177;1．77），P〈0．05]。③假手术组细胞形态正常；缺血再灌注模型模型组右侧大脑缺血范围内皮质水肿明显，神经细胞外周隙扩大，毛细血管周隙增宽，血管内血栓形成，在皮质和纹状体可见大量死亡神经元，可见筛状坏死灶，间质水肿呈松网状，有大量中性粒细胞的浸润；还原型谷胱甘肽处理组大脑皮质神经细胞层次尚清晰，未见明显坏死灶，神经细胞及毛细血管周围间隙稍大，但明显小于缺血再灌注模型组。间质水肿、中性粒细胞的浸润也轻于缺血再灌注模型组。结论：外源性谷胱甘肽可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍，减少脑梗死体积，通过减少脑缺血引起细胞间黏附分子1表达，抑制中性粒细胞的浸润，从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应，而发挥对脑缺血后的保护作用。     

超声光散射断层成像与乳腺癌HIF-1α表达的相关性

目的通过研究术前乳腺癌超声光散射断层成像(diffused optical tomography with ultrasonography)的综合诊断指数(synthesis diagnostic index,SDI)以及术后缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、CD105在乳腺癌中的表达,探讨乳腺癌超声光散射断层成像综合诊断指数与缺氧诱导因子-1α表达、微血管密度(microvessel density,MVD)的关系。方法采用超声光散射断层成像系统,研究2008年11月至2010年9月我科131例乳腺良性肿块及142例乳腺癌患者,测量超声光散射断层成像综合诊断指数(synthesis diagnostic index,SDI),通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)确定乳腺癌的最佳诊断阈值。使用免疫组化法检测HIF-1α表达与定位,检测乳腺癌MVD。分析超声光散射SDI值与HIF-1α表达、MVD值的关系。分析超声光散射的SDI值以及HIF-1α表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺良性疾病与乳腺癌的SDI值分别:(109.35±48.03)、(190.87±60.33)。两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析确定,以SDI值>141.2作为乳腺癌的最佳诊断阈值。HIF-1α表达阳性的乳腺癌SDI值高于HIF-1α表达阴性的乳腺癌(P<0.05)。SDI值与MVD值呈正相关(r=0.673,P<0.01)。HIF-1α表达阳性的MVD值大于HIF-1α表达阴性的MVD值(P<0.05)。SDI值、HIF-1α表达与乳腺癌临床病理联系显示:两者与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、CerbB-2表达有关(P<0.05)与ER、PR表达无关(P>0.05)。结论超声光散射断层成像系统作为一种新的功能性检测技术对乳腺癌的诊断、病情判断方面有重要的指导意义。     

超声光散射诊断乳腺癌及其与VEGF表达的相关性研究

目的：探讨乳腺癌超声光散射断层成像综合诊断指数（SDI）与血管内皮生长因子（VEGF）的关系以及它们与乳腺癌临床病理特征的关系。方法：采用超声光散射乳腺断层成像系统研究131例乳腺良性疾病及142例乳腺癌患者,测量超声光散射断层成像SDI,通过受试者工作特征（ROC）曲线确定乳腺癌的最佳诊断阈值。使用免疫组织化学SP法检测VEGF在乳腺癌组织中的表达。分析SDI值与VEGF表达的关系。分析SDI值以及VEGF表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果：乳腺良性疾病与乳腺癌的SDI值分别为109.35±48.031、90.87±60.33,两者之间差异有统计学意义（P〈0.01）。经ROC曲线分析可得：SDI值的ROC曲线下面积为0.889,以SDI值〉141.2作为乳腺癌的最佳诊断阈值。VEGF表达阳性的乳腺癌组织,SDI值高于VEGF表达阴性的乳腺癌组织（P〈0.01）。SDI值、VEGF表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期c、erbB-2表达有关（P〈0.01）,与雌、孕激素受体（ER、PR）表达无关（P〉0.05）。结论：超声光散射作为一种新的功能性检测技术对乳腺癌的诊断、病情判断方面有重要的指导意义。     

miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用

背景与目的：多种微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。miRNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨miR-199a-3p在乳腺癌中的表达水平,及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中miRNA-199a-3p的表达水平,miR-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)miR-199a-3p的表达后,通过MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果：相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞,miR-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p mimic过表达miR-199a-3p可抑制细胞增殖,促进其凋亡;在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p inhibitor沉默miR-199a-3p可促进细胞增殖,抑制其凋亡。结论：miR-199a-3p在乳腺癌中表达下调,并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。     

长链非编码RNA BDNF-AS在乳腺癌中的表达及作用

  目的  探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）-AS在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。  方法  收集2016年1月至2018年12月88例于兰州大学第一医院行乳腺癌手术切除患者的组织样本。RT-qPCR检测癌组织、癌旁组织、乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468和SK-BR-3）及正常乳腺细胞HBL-100中lncRNA BDNF-AS的表达并分析其与临床特征的相关性。MDA-MB-231细胞经pcDNA3.1质粒过表达lncRNA BDNF-AS,使用MTT法检测细胞活性,EdU实验检测细胞增殖能力,比色法检测Caspase-3活性;Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）、侵袭转移相关蛋白（MMP-9、E-cadherin）和BDNF蛋白表达,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。  结果  lncRNA BDNF-AS在乳腺癌组织（P < 0.05）和乳腺癌细胞中表达显著降低（P < 0.01）。乳腺癌组织中的lncRNA BDNF-AS表达与患者TNM分期（P < 0.05）和淋巴结转移（P < 0.05）呈负相关。lncRNABDNF-AS过表达可降低MDA-MB-231细胞活性（P < 0.01）、EdU检测的阳性细胞数（P < 0.01）、Caspase-3活性（P < 0.01）,下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达（P < 0.01）。lncRNA BDNF-AS过表达可抑制划痕愈合和细胞侵袭（P < 0.01）,下调MMP-9蛋白和上调Ecadherin蛋白表达（P < 0.01）及下调BDNF mRNA和蛋白的表达。  结论  在乳腺癌中lncRNA BDNF-AS表达下调,BDNF-AS抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进凋亡。      

刺囊酸对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的探讨刺囊酸对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度刺囊酸处理乳腺癌细胞MCF-7,MTS检测细胞生长情况,EdU检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果刺囊酸抑制MCF-7细胞的生长,呈剂量和时间依赖性。MCF-7细胞经不同浓度刺囊酸干预后,增殖能力明显下降(P0.05),凋亡率显著增加(P0.05)。刺囊酸处理MCF-7细胞,可剂量依赖性地上调促凋亡基因Bax的表达和下调抗凋亡基因Bcl-2的表达(P0.05)。结论刺囊酸可抑制乳腺癌细胞MCF-7的生长,降低细胞增殖能力,促进细胞凋亡,其机制可能涉及影响凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达。