枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础。从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析。该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定。将该载体转化入大肠杆菌BL21中,通过SDS-PAGE电泳检测guaB基因的表达效果。克隆的guaB基因长度为1 510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99%,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因。穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1 510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带。SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显。论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达。