抗体药物的设计及其研究进展

先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提高,形成高通量筛选技术平台,用于筛选多种对应大量基因组编码靶标的抗体.从头设计抗体已开始成为制造新抗体的一种策略,但仍具有技术挑战性.然而,抗体-抗原结构数据库的不断增加和计算工具的不断开发,都表明这些挑战是可以克服的.预计未来以物理分子模拟知识为基础的计算方法,将成为提高抗体设计准确性和成功性的主要驱动力.     

中成药治疗复发性流产的临床研究概况性综述

目的 系统梳理中成药治疗复发性流产（RSA）的药品信息和临床研究现状,为临床合理用药提供参考证据,为临床实践和医疗卫生决策提供依据。方法 检索中英文数据库中对中成药治疗RSA的临床文献进行系统回顾,利用相关软件进行文献管理,并对药品及研究的基本信息进行提取,以文字描述和图表的形式开展可视化对比分析。结果 共纳入95篇文献,包括系统评价和Meta分析2篇,临床研究93篇;涉及11种中成药,包括1种中药注射剂。临床研究数量较多的药品是滋肾育胎丸、固肾安胎丸和保胎灵制剂;2005年起相关研究数量整体呈升高趋势,已在全国24个地区开展;样本量为51～100例的研究最多,包括67项（72.04%）;研究数量最多的比较类型是中成药联合西药与西药比较,研究总量达75项（80.65%）。目前临床无统一的治疗方案及疗效判断标准,部分研究（43.01%）记录了患者用药过程中不良反应发生情况。结论 临床上中成药治疗RSA具有较好的适宜性,其与西药联用的效果明确。但存在药品说明书内容缺乏、用药时机疗程和结局评价指标未标准化、用药安全的重视程度不够、中医特色体现度不足等问题有待未来改善。     

老年人社区健康服务利用现状及其影响因素分析

目的：了解北京市老年人社区健康服务利用现状并探讨其影响因素。方法：于2012年5—7月对北京市20个社区的406名老年人进行问卷调查。结果：社区老年人的健康状况较差,最希望得到的健康服务为意外事件救助（98．0％）;对社区医疗服务利用率低,仅24．3％的老年人考虑去社区医院就诊;影响老年人社区就诊的因素包括性别、家庭结构、文化程度、自理能力、就医经济压力等。结论：社区健康服务在体系支撑、经费投入和人员配置上仍须加强;社区工作者应促进社区健康服务水平优质化和服务方式多样化。     

应用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE单链抗体

本研究从哮喘患者外周血分离淋巴细胞、提取总mRNA,采用RT-PCR技术分别构建重链可变区VH(variable region of heavy chain)和轻链可变区VL(variable region of light chain)cDNA库,然后通过连接肽(Gly4Ser)3和特定引物将VH和VL cDNA基因组装成人源单链抗体(scFv)核糖体展示模板基因库。应用兔网织红细胞核糖体展示技术,单引物原位反转录技术,经3轮展示富集并回收针对人源IgE蛋白(免疫球蛋白E)的目的单链抗体基因;回收的抗体基因经双酶切后与pET22b(+)载体连接,转化至E.coli Rosseta(DE3)宿主细胞,应用菌落PCR结合Dot blotting技术快速鉴定阳性克隆,抗原ELISA法进一步鉴定阳性克隆。VH和VL基因库得到正确的构建,长度分别为400和710 bp,库容为1013。核糖体展示模板构建正确,长度为1 100 bp。该基因库经过3轮针对IgE蛋白的核糖体展示,目的基因得到了有效富集和回收。经过高效克隆、表达和鉴定,确定1株针对人IgE蛋白显示最强亲和力的阳性克隆菌pET-IgE-6。经测序和序列分析证实该单链抗体为人源抗体,序列未见国内外报道。结果表明,采用患者外周血构建人源抗体基因库,结合核糖体展示技术,可以成功获得高亲和力的人源单链抗体分子。该技术路线为快速获得具有药用价值的人源抗体提供了参考。     

全人源抗体基因库的构建及抗表皮生长因子受体单链抗体的筛选

目的 从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库,并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单链抗体.方法 采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的全人源抗体基因库.针对EGFR抗原靶标,应用真核核糖体展示技术对该基因库进行高效富集筛选.通过大肠埃希菌表达体系对回收的基因库进行克隆、表达,并鉴定抗体活性.结果 构建的全人源抗体基因库库容估算为4.3×1013分子.对该基因库进行3轮富集筛选后,获得EGFR富集的单链抗体基因库.对回收基因库进行克隆、表达,并随机鉴定了49个克隆,获得结合力为108～107mol/L的2株全人源抗EGFR单链抗体.结论 利用肿瘤患者外周血,结合核糖体展示技术可以较快获得具有医用价值的全人源单链抗体.     

一种新的大肠埃希菌蛋白质快速合成方法

目的 在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白质快速表达的方法。方法 通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后，无需使用任何限制性酶，直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果 通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质，证实了该方法的有效性和可靠性。使用标准光谱（280 nm）定量方法分析纯化的蛋白质，发现绿色荧光蛋白的可溶性蛋白表达量达到30 mg/L，血管内皮生长因子特异性 VH的可溶性蛋白表达量达到20 mg/L。结论 该方法设计灵活，且易于进行多种蛋白质的并行表达，为快速筛选理想的蛋白突变体提供了一新途径。     

含组氨酸标签的小分子抗体临床应用现状

<正>单链抗体(scFv)是由免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一条连接肽,如(GGGGS)4连接而成的小分子抗体(图1)。与全抗相比,它因分子小、容易进入实体肿瘤、体内清除快、免疫原性低、成像清晰等优点成为目前医用抗体研究的热点[1]。另外,单链抗体易于实现基因操作,可采用微生物细胞规模生产,因而相对于哺乳动物细胞生产线,其制造成本低,在制药工业得到了广泛的应用。重组蛋白质药物生产的关键技术之一是目的蛋白的纯化,即如何将重组蛋白从微生物细胞产生的总蛋白中分离纯     

人体质量指数与非酒精性脂肪性肝病发生和消退的关系

目的：探讨健康成人基线人体质量指数（BMI）及其变化与非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病及消退的关系。方法：回顾性分析2008年7月浙江省某三甲医院体检中心成人健康体检的体检资料以及相同体检者2011年健康体检资料,主要包括饮酒史、既往史、身高、人体质量、血压、实验室检查和肝脏超声检查结果。以2008年体检时超声检测出有无脂肪肝及根据是否符合《NAFLD诊疗指南》（2010年修订版）诊断,分为NAFLD组和非NAFLD组。对两组NAFLD发病和消退情况进行跟踪并分析危险因素。结果：共725例体检者纳入研究,其中非NAFLD者563例,NAFLD者162例。随访3年,563例非NAFLD者中132例（23.4%）进展为NAFLD,随访中NAFLD发病率随基线BMI增加而显著升高 （χ²=82.861,P＜0.01）;多因素logistic回归分析显示收缩压、基线BMI及BMI增幅和丙氨酸转氨酶是NAFLD发病的独立危险因素,而高密度脂蛋白胆固醇是NAFLD发病的保护因素。162例NAFLD患者随访3年后71例（43.8%）转归为非NAFLD,随访中NAFLD消退率随基线BMI增加而显著下降（χ²=22.425,P＜0.01）;多因素logistic回归分析显示男性、基线BMI和BMI增幅是NAFLD消退的独立危险因素,而年龄是NAFLD消退的保护因素。结论：健康体检人群中NAFLD发病率及消退率高,基线时高BMI以及随访中BMI增加是NAFLD发病及消退的独立危险因素。     

体外磁波盆底治疗对阴道分娩产妇盆底肌功能恢复效果

目的：探究体外磁波盆底治疗对阴道分娩产妇盆底肌功能恢复效果。方法：选取2022年4-10月本院行阴道分娩产妇102例，随机数字表法分为两组各51例，分别采用常规盆底肌训练(常规组)及常规组基础上实施体外磁波盆底治疗(磁波组),均治疗3个月。比较两组盆底肌电Glazer评估、盆底功能障碍状况、产后并发症、肌纤维疲劳水平及阴道动态压、产后漏尿情况。结果：治疗后两组快肌收缩最大值、10s慢肌收缩平均值、60s慢肌收缩平均值均得到提升，且磁波组高于常规组；磁波组盆底障碍影响问卷(21.99±4.38分)、盆底功能障碍量表评分(19.24±5.57分)均低于常规组(30.84±4.65分、28.53±4.88分);产后下腹坠胀感、便秘、尿频等并发症总发生率磁波组(9.8%)低于常规组(37.3%),肌纤维疲劳指数及阴道动态压改善优于常规组；治疗后2 d、10周、3个月，磁波组压力性尿失禁评分(5.17±0.84分、4.86±0.42分、3.15±0.34分)均低于常规组(6.66±1.12分、5.54±0.62分、4.73±0.55分)(均P<0.05)。Pearson相关分析，阴道分娩产...