抗体药物的设计及其研究进展

先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提高,形成高通量筛选技术平台,用于筛选多种对应大量基因组编码靶标的抗体.从头设计抗体已开始成为制造新抗体的一种策略,但仍具有技术挑战性.然而,抗体-抗原结构数据库的不断增加和计算工具的不断开发,都表明这些挑战是可以克服的.预计未来以物理分子模拟知识为基础的计算方法,将成为提高抗体设计准确性和成功性的主要驱动力.     

全人源抗体基因库的构建及抗表皮生长因子受体单链抗体的筛选

目的 从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库,并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单链抗体.方法 采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的全人源抗体基因库.针对EGFR抗原靶标,应用真核核糖体展示技术对该基因库进行高效富集筛选.通过大肠埃希菌表达体系对回收的基因库进行克隆、表达,并鉴定抗体活性.结果 构建的全人源抗体基因库库容估算为4.3×1013分子.对该基因库进行3轮富集筛选后,获得EGFR富集的单链抗体基因库.对回收基因库进行克隆、表达,并随机鉴定了49个克隆,获得结合力为108～107mol/L的2株全人源抗EGFR单链抗体.结论 利用肿瘤患者外周血,结合核糖体展示技术可以较快获得具有医用价值的全人源单链抗体.     

一种新的大肠埃希菌蛋白质快速合成方法

目的 在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白质快速表达的方法。方法 通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后，无需使用任何限制性酶，直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果 通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质，证实了该方法的有效性和可靠性。使用标准光谱（280 nm）定量方法分析纯化的蛋白质，发现绿色荧光蛋白的可溶性蛋白表达量达到30 mg/L，血管内皮生长因子特异性 VH的可溶性蛋白表达量达到20 mg/L。结论 该方法设计灵活，且易于进行多种蛋白质的并行表达，为快速筛选理想的蛋白突变体提供了一新途径。