白藜芦醇抑制HCT116结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;利用TCF4/LEF萤光素酶报告质粒检测Res对Wnt/β-catenin信号转导的影响。采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内β-catenin表达水平的影响。结果与对照组相比,Res能抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;流式细胞术和Western blot检测结果均显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;报告质粒分析结果显示,Res呈浓度依赖性降低TCF4/LEF报告质粒萤光素酶活性(Res为20μmol·L-1时,P<0.05;Res为40或80μmol·L-1时,P<0.01);Western blot和PCR分析结果显示,Res不仅明显降低HCT116细胞中β-catenin的蛋白水平,同时也下调β-catenin mRNA的表达水平。结论Res能抑制HCT116细胞增殖并促进凋亡,其机制可能至少与Res下调β-catenin mRNA表达,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

PI3K/Akt信号与吴茱萸碱抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究

目的 研究吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制.方法 采用结晶紫染色分析Evo(0、0.5、1、2、4μmol/L)对LoVo细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞凋亡的促进作用;Western blot法分析Evo(0、0.5、1 μmol/L)对LoVo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Caspase-3蛋白表达水平的影响;利用缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor 1-alpha,HIF-1 α)荧光素酶报告质粒检测Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对HIF-1 α转录活性的影响.采用Western blot法分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞中HIF-1 α、Akt1/2和磷酸化Akt1/2蛋白水平的影响.结果 与对照组相比,Evo明显抑制LoVo细胞增殖,下调PCNA蛋白水平,促进LoVo细胞凋亡;报告质粒统计结果显示,Evo呈浓度依赖性降低HIF-1α荧光素酶报告质粒活性(Evo为0.5μmol/L时,P＜0.05;Evo为1μmol/L或2μmol/L时,P＜0.01);Western blot检测结果显示,Evo能够明显降低HIF-1 α蛋白水平,下调Akt1/2磷酸化水平.结论 Evo能够抑制LoVo细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与Evo下调HIF-1α蛋白表达,抑制PI3 K/Akt信号转导相关.     

白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖及其与PTEN的关系研究

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制.方法 采用结晶紫染色、流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和免疫荧光分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内Aktl/2及PTEN表达水平的影响;通过重组腺病毒介导的PTEN过表达或沉黙表达,分析Res抑制HCT116细胞增殖及其与PTEN的关系.结果 与对照组相比,Res处理组HCT116细胞增殖受到抑制(P ＜0.05,P＜0.01),G1期细胞比例也随Res浓度增加而升高,同时PCNA蛋白表达水平下降;流式细胞术分析结果显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;Western blot和PCR分析结果显示,Res对Akt1/2 mRNA表达无明显影响,但能降低Akt 1/2的磷酸化水平,同时促进PTEN表达.外源性过表达PTEN能增强Res对HCT116细胞的增殖抑制作用(P＜0.01),而沉黙PTEN表达能部分逆转Res对HCT116细胞增殖的抑制作用(P＜0.01).结论 Res对HCT116细胞增殖具有抑制作用,并能促进其凋亡;Res的这种作用可能与其促进PTEN表达,抑制PI3K/Akt活化有关.     

PTEN在骨形态发生蛋白9诱导小鼠胚胎成纤细胞骨向分化中的作用

目的 研究PTEN对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化的影响,并分析PTEN调节BMP9功能的可能机制.方法 采用定量PCR检测PTEN在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达,分析在MEFs中BMP9对PTEN表达的影响.采用组织化学染色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,PCR检测OPN和OCN的表达水平,茜素红染色检测钙盐沉积,分析PTEN对BMP9诱导MEFs成骨分化的影响;利用荧光素酶报告质粒和蛋白印迹等方法分析PTEN对骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)/Smads信号转导的影响.结果 PTEN在几种常见MSCs中均有表达;BMP9在MEFs中明显抑制PTEN的表达.抑制PTEN能促进BMP9诱导MEFs的ALP活性增加,但过表达PTEN对BMP9诱导MEFs的ALP活性有明显抑制作用.抑制PTEN明显促进BMP9在MEFs细胞中诱导的OCN表达,并增强钙盐沉积.报告质粒分析结果显示,抑制PTEN能明显增强BMPR-Smad报告质粒的转录活性,并增加Smad1/5/8的磷酸化水平.结论 下调PTEN表达可能是BMP9诱导MEFs成骨分化重要途径之一,其机制可能与促进BMPs/Smads信号转导有关.