筋骨草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立筋骨草配方颗粒的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法 采用HPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）,流速为1.0 mL/min,检测波长为207 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。以乙酰哈巴苷峰为参照峰,测定15批样品的HPLC指纹图谱。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）进行相似度评价,确定共有峰,并进行聚类分析和主成分分析。结果 15批样品的HPLC指纹图谱有8个共有峰,指认了其中2个。相似度均在0.975～1.000。15批样品可聚为4类,共提取到两大主成分,累积方差贡献率85.367%,其中峰1和峰4是对样品质量影响较大的主要成分。结论 建立的HPLC指纹图谱操作简单,重复性和稳定性均良好,能整体、全面、真实地反映制剂质量的差异,可为其质量控制及整体性评价提供参考。     

高效液相色谱法检测酶促反应中底物胆固醇

目的：建立酶促反应中底物胆固醇的高效液相色谱（HPLC）检测方法。方法：HPLC检测胆固醇含量的最佳色谱条件：Dia－monsil C18（250mm×4.6mm,5μm）为固定相,甲醇∶环己烷（90∶10）为流动相,检测波长为215nm,流速为1.0μl·min^-1,柱温为35℃。结果：胆固醇峰呈尖峰,分离较好,理论塔板数为12545;在0.5～10mg·L^-1范围内线性关系良好（A=19.136C-1.2707,r=0.9990）;平均加样回收率为104%,RSD为1.5%（n=6）。结论：该方法专属性强,重复性良好,适合初步用于酶促反应体系中底物胆固醇的含量测定,以胆固醇减少量反映转化率。     

五倍子配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

LC-MS/MS定量分析小鼠血浆和组织液中多西他赛的含量

目的:建立小鼠血浆和组织样品中多西他赛的含量测定方法。方法:选择紫杉醇为内标物,进样前用甲基叔丁基醚萃取,Hypersil BDS C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.4μm),流动相甲醇-0.1%甲酸(80∶20),柱温40℃,流速0.3 m L·min~(-1),进样量10μL。电喷雾离子源,多反应检测模式进行正离子检测,离子源喷雾电压3.5 kV,加热毛细管温度320℃,鞘气压力35 Pa,辅助气压力10 Pa,碰撞能量30 V,碰撞诱导解离电压12 V,多西他赛检测离子对m/z 876.3~549.1,紫杉醇检测离子对m/z 830.3~307.9。结果:多西他赛在小鼠血浆中的线性范围0.013~13 mg·L~(-1),在心、肝、脾、肺、肾的线性范围分别为0.012~12.937,0.013~13.068,0.012~13.001,0.013~13.133,0.011~12.965 mg·L~(-1);日内及日间精密度、各条件下稳定性均15%;血浆中低、中、高质量浓度多西他赛的平均回收率分别为98.24%,97.51%,93.70%;在小鼠心、肝、脾、肺、肾各组织的平均回收率在87.87%~98.90%。结论:相较于HPLC,LC-MS/MS更适合检测小鼠血浆及组织液中多西他赛的含量,该方法稳定可行、重复性好。     

去唾液酸糖蛋白受体配体胆固醇-半乳糖苷的酶促合成优化研究

目的在有机相中利用酶促反应合成能被去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异性识别的配体胆固醇-半乳糖苷分子,对其合成工艺进行优化。方法采用质谱和核磁碳谱鉴别产物结构;单因素和正交设计法优化酶促合成条件。结果酶促最佳条件为底物胆固醇癸二酸乙烯酯(CH-VS)与乳糖醇(LA)物质的量之比4∶1,脂肪酶Novozym 435 25 mg,反应32 h,产率高达92%。结论该方法高效、反应条件可行、产物专一。