眼表铁过载小鼠干眼模型的构建和机制研究

目的：通过给小鼠腹腔注射右旋糖酐铁，建立小鼠铁过载干眼模型并初步探索其可能的机制。

方法：将40只雄性C57BL/6小鼠(取右眼为实验眼)用随机数字表法将小鼠分为4组：对照组10只，每次腹腔注射生理盐水0.2mL； 低剂量组、中剂量组、高剂量组各10只为模型组，每次分别腹腔注射浓度为12.5、25、50mg/mL的右旋糖酐铁溶液0.2mL。每3d注射1次，共注射28d。注药后第7、14、28d观察各组小鼠眼表炎症指数、角膜荧光素染色、泪膜破裂时间(BUT)及泪液分泌量(SⅠt)，评估干眼及眼表炎症程度。28d后处死小鼠，取角膜、结膜及泪腺组织，进行HE染色、普鲁士蓝染色以及组织铁检测，评估小鼠炎症反应及铁过载情况； 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。

结果：与对照组相比，模型组小鼠出现一系列干眼症状，小鼠眼表炎症指数增高，角膜荧光素染色评分增加，BUT缩短，泪液分泌量减少(均P<0.05)； 模型组小鼠角膜、结膜及泪腺组织均受到不同程度的损伤，各组织眼表铁沉积情况较对照组加重，组织铁含量明显增加(均P<0.01)； 模型组小鼠角膜、结膜及泪腺组织中炎症因子(IL-1β、TNF-α、MMP-9)的含量均高于对照组(均P<0.01)，随着右旋糖酐铁注药时间及浓度增加，小鼠干眼及眼表炎症程度逐渐加重。

结论：腹腔注射右旋糖酐铁可成功建立小鼠铁过载干眼模型，其机制可能与铁过载加重眼表炎症反应有关。     

胞葬作用调控巨噬细胞极化影响高铁环境下眼表炎症发生

目的：探究胞葬作用是否通过调控巨噬细胞极化影响高铁环境下眼表炎症发生。

方法：选取6～8周龄健康C57BL/6雄性小鼠50只随机分为正常对照组、单纯铁剂组、抑制剂组、增强剂组及溶剂对照组,每组10只。正常对照组腹腔注射生理盐水0.2mL,其它组均腹腔注射50mg/mL右旋糖酐铁0.2mL,每3d注药1次; 第14d起抑制剂组、增强剂组及溶剂对照组每天分别增加1次腹腔注射同体积(0.2mL)50mg/kg XMD8-92、10mg/kg辛伐他汀和50% DMSO溶剂。于注药后第7、14、28d裂隙灯下观察各组小鼠眼前节情况,进行眼表炎症指数评估及角膜荧光素染色评分; 28d后取角膜、结膜及泪腺组织进行HE染色、免疫荧光染色,并采用RT-PCR检测巨噬细胞极化相关指标(CD86、CD206、iNOS、Arg-1); Western blot检测胞葬作用相关信号因子(Gas6、MerTK)的表达; ELISA检测炎症因子(IL-1β、TNF-α、MMP-9)的表达。

结果：注药28d,与正常对照组比较,单纯铁剂组及溶剂对照组眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分增加; HE染色显示角膜上皮欠完整,结膜杯状细胞减少,泪腺结构欠清晰且细胞排列相对杂乱; 各组织中CD86、iNOS等M1型巨噬细胞标志物表达上调,CD206、Arg-1等M2型巨噬细胞标志物表达下调,IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达上调(均P<0.05)。与单纯铁剂组和溶剂对照组比较,抑制剂组小鼠眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分进一步增长; HE染色显示角膜上皮脱落明显,结膜杯状细胞进一步减少甚至消失,泪腺结构紊乱且细胞排列杂乱不规则; 各组织中Gas6、MerTK等胞葬作用相关信号因子表达下调(均P<0.05),CD86、iNOS等M1型巨噬细胞标志物及IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达进一步上调(均P<0.05); 而增强剂组小鼠眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分下降,HE染色显示角膜上皮完整,结膜杯状细胞增多,泪腺结构形态改善; 各组织中Gas6、MerTK等胞葬作用相关信号因子表达上调(均P<0.05),且CD206、Arg-1等M2型巨噬细胞标志物表达上调,IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达下调(均P<0.05)。

结论：高铁环境诱导巨噬细胞向M1型定向极化,加重眼表炎症反应及组织损伤,胞葬作用可调控巨噬细胞极化影响高铁环境下眼表炎症反应的发生。