聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠纳米颗粒在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性

目的　探讨聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠（PEI-NHAc-FS）纳米颗粒（nanoparticles,NPs）在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性。方法　选取90只健康棕色雄性挪威大鼠作为实验动物。将1 mL 荧光素钠（200 g·L^-1）加入10 mol的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）混合物中搅拌30 min,再加入10 mol的N-羟基琥珀酰亚胺搅拌3 h。然后将该溶液加入到5 mL聚乙烯亚胺（polyethyleneimine,PEI）（76 g·L^-1）中,剧烈搅拌3 d获得PEI-NH₂-FS。将2 mL三乙胺加入到PEI-NH₂-FS原液中,30 min后再将1 mL的乙酸酐加入混合物中搅拌24 h,合成PEI-NHAc-FS。使用核磁共振波谱仪和紫外可见光吸收光谱观察PEI-NHAc-FS的结构,并对合成的NPs结构进行表征;CCK-8检测其细胞毒性。选取30只大鼠,根据荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的浓度（5 g·L^-1、10 g·L^-1、50 g·L^-1）将大鼠分为6组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min进行眼底摄像,采集大鼠眼底血管荧光素图像。用激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型后,取10只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min通过眼底血管造影成像观察病灶处渗漏。另取40只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组20只,于注射后10 min、20 min、30 min和60 min进行荧光冰冻切片。将10只大鼠随机分为对照组（注射生理盐水）和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,行组织切片HE染色和视网膜电图检测。采用HE染色和视网膜电图观察PEI-NHAc-FS NPs在体内的生物安全性。结果　通过核磁共振和紫外可见光吸收光谱观察到荧光素钠与PEI成功耦合。发射荧光光谱显示,游离荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的最大发射波长分别出现在546 nm和544 nm处。CCK-8检测结果表明,不同浓度的荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs处理人脐静脉内皮细胞12 h、24 h后,细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）。即使用10 μmol·L^-1 PEI-NHAc-FS NPs处理24 h和未处理之间细胞存活率差异亦无统计学意义（P>0.05）。在5 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组中,均仅显影视网膜主要血管,不能用于荧光素眼底血管造影的诊断。而在10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组可清晰地显示视网膜主要血管及微血管的结构,且在注射后30 min时血管荧光强度基本相同。PEI-NHAc-FS NPs组在60 min时荧光强度已基本消失,而游离荧光素钠组仍保持较强的荧光强度。10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组荧光素眼底血管造影结果显示,经尾静脉注射造影剂后,视网膜血管内可见荧光成像;同时病灶部位可见荧光渗漏。游离荧光素钠组在视网膜组织中荧光较强,对视网膜组织有较强的吸附和渗透作用,而PEI-NHAc-FS NPs组在视网膜组织中荧光较弱,对视网膜组织吸附较弱。HE染色和视网膜电图对造影剂进行体内生物安全性分析结果显示,PEI-NHAc-FS NPs安全性较好。结论　PEI-NHAc-FS NPs能够安全、有效地用于荧光素眼底血管造影。     

外周血液中miRNA表达与老年性黄斑变性相关性研究

目的　检测微小核糖核酸（microribonucleicacids，miRNA）在老年性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）患者中的表达，并探讨miRNA的表达量与AMD病程之间的关系。方法　选取2014年1月至2016年11月于同济大学附属第十人民医院眼科门诊就诊的AMD患者6例为试验组，并选取同期6名正常人为对照组，通过基因芯片技术检测两组血液中miRNA的表达量。扩大样本的病例对照研究中共纳入126例AMD患者和140名正常人，检测其血液样本中miRNA的表达，比较两组人群间miRNA的表达量差异。结果　通过基因芯片技术，在试验组与对照组间共检测出216个miRNA存在表达差异（均为P<0.05），与对照组相比，试验组中111个miRNA表达量上升，105个miRNA表达量下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。扩大样本的病例对照研究结果表明，在AMD患者中，miR-27a-3p、miR-29b-3p、miR-195-5p的表达量显著上升，同时，湿性AMD患者血液中miR-27a-3p的表达量高于干性AMD患者，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　AMD患者外周血中miRNA表达量水平有明显变化，miR-27a-3p、miR-29b-3p、miR-195-5p可能成为AMD血清学诊断和预后的标志物。     

缓激肽对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响

目的　制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）细胞模型,研究缓激肽（bradykinin,BK）对视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞发生EMT的影响,并探讨BK对PVR的影响机制。方法　体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,采用不同浓度转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1,TGF- β1）分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8检测细胞增殖情况,确定TGF-β1浓度及作用时间;利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和波形蛋白（Viminten）表达情况;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力。同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达。结果　TGF- β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型。当TGF-β1浓度为10 μg·L^-1、作用时间为48 h时,细胞增殖最明显。BK在TGF- β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达,升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力。这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转。TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时,pSmad3表达量升高;TGF-β1刺激前给予BK刺激,pSmad3表达量减少;加入BK前预敷HOE-140,然后给予TGF-β1刺激,BK作用减弱,pSmad3表达量升高。Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反。结论　10 μg·L^-1 TGF-β1可导致ARPE-19细胞发生EMT。BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad 7的表达、下调pSmad 3的表达,从而逆转TGF-β1诱导的EMT。提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法。     

缓激肽刺激体外培养的视网膜色素上皮细胞炎症反应的作用机制

目的：探讨缓激肽刺激体外培养的视网膜色素上皮（ retinal pigment epithelium , RPE ）细胞炎症反应的作用机制。方法：体外培养 ARPE－19细胞,100 nmol／L 缓激肽（bradykinin,BK）刺激24h后,光镜下观察细胞形态变化,细胞免疫荧光检测BK受体定位;共聚焦显微镜检测BK及其拮抗剂作用下Ca2＋变化;Western blot 检测对照组与100 nmol／L BK 处理24 h 后（ BK 组） COX－1、COX－2、eNOS、iNOS蛋白的表达量。结果：BK刺激后,ARPE－19细胞形态无明显变化;ARPE－19细胞可检测到激肽B1、B2受体;与对照组相比, BK组Ca2＋浓度显著升高;B1R拮抗组及B2R拮抗组的Ca2＋浓度较BK组升高幅度降低,B1R及B2R拮抗组Ca2＋浓度较对照组无明显变化;BK作用ARPE－19细胞后, COX－2及iNOS蛋白含量显著增加（P＜0．001）。结论：BK通过与B1 R及B2 R结合促进体外培养的ARPE细胞COX－2及iNOS表达增加。     

不同光谱组成的人工照明对视网膜色素上皮细胞的影响

目的 探讨不同光谱组成的人工照明对视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞随机分组：无光照对照组、非全光谱照明组(细分为300 lx、600 lx两个亚组)、全光谱照明组(细分为100 lx、300 lx、600 lx、900 lx四个亚组),无光照对照组细胞避光培养,其他组细胞采用相应光谱和光照强度干预。将分组光照24 h、48 h、72 h后的ARPE-19细胞置于倒置荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞活力;线粒体膜电位法检测线粒体功能。结果 光学显微镜下可见,光照72 h后,各组细胞密度明显增大,细胞大小不一,细胞多边形不典型;全光谱照明组细胞较非全光谱照明组细胞形态规整,异形细胞数少。光照24 h后,与无光照对照组相比,非全光谱照明300 lx组,全光谱照明300 lx、600 lx、900 lx组细胞活力均降低(均为P<0.05)。全光谱照明900 lx组细胞活力高于非全光谱照明300 lx组(P<0.05)。光照48 h后,各组细胞活力较光照24 h时提高;全光谱照明100 lx、300 lx组细胞活力低于非全光谱...     

雌激素在绝经后干眼治疗中的研究进展

干眼的发病主要与炎症、细胞凋亡、性激素失调等有关,绝经后女性干眼的发病率明显升高。眼表组织如睑板腺、泪腺、角膜及结膜组织上均有雌激素受体的分布,这可能是眼表组织作为雌激素作用靶器官的原因。激素替代治疗是目前治疗绝经后干眼的方法之一,主要以雌激素及雌孕激素联合应用为主,但是激素替代治疗的有效性及安全性仍然存在争议。本文就雌激素在绝经后干眼治疗中的研究进展进行综述。     

腓骨近端截骨术配合益气活血外洗方治疗膝关节骨性关节炎的临床治疗研究

目的 探讨腓骨近端截骨术配合益气活血外洗方治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效.方法 选取2017年6月至2019年10月本院收治的膝关节骨性关节炎患者80例,随机分为治疗组和对照组,每组40例.治疗组采用手术+益气活血外洗方熏洗治疗,对照组采用手术+热水熏洗进行治疗,比较两组膝关节功能、围术期指标.结果 治疗组HSS评分高于对照组,VAS评分低于对照组,髋膝踝角大于对照组,住院时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 运用腓骨近端截骨术配合益气活血外洗方治疗治疗膝关节骨性关节炎可明显改善膝关节疼痛,促进关节功能的恢复,临床治疗效果显著.     

口服酪氨酸激酶抑制剂CM082对实验大鼠脉络膜新生血管的影响

目的 建立脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)大鼠模型,观察药物酪氨酸激酶抑制剂CM082对CNV的影响.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威(brown norway,BN)大鼠CNV模型.将50只光凝造模后大鼠随机分为对照组(n=25)、实验组(n=25).造模7d后给予实验组口服给药CM082 30 mg·kg-1·d-1,对照组造模后给予药物溶媒5mL· kg-1·d-1.分别于造模后7d及给药后7d、14 d行眼底荧光血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)、组织病理学和视网膜色素上皮(reti-nal pigment epithelium,RPE)-脉络膜-巩膜铺片进行评估.结果 FFA结果显示,实验组给药后7d、14 d光凝斑部位荧光渗漏强度(0.43 ±0.17、0.55±0.15)显著低于对照组(0.74±0.19、0.80±0.13),差异有统计学意义(P＜0.05).苏木精-伊红染色的CNV病理组织学显示,实验组中病变范围较小.免疫组织化学检查表明,CM082的治疗可以明显抑制p-VEGFR-2的表达.RPE-脉络膜-巩膜铺片显示,给药后7d、14d,实验组中CNV损伤区域为(4.26±0.93)×104 μm2、(3.58±0.72)×104 μm2,明显小于对照组(12.90±6.40)×104 μm2、(17.81±5.34)×104 μm2,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CM082口服给药30mg·kg-1·d-1能有效抑制激光诱导的BN大鼠CNV病变.     

益气复元膏方对气虚质人群的临床干预研究

目的：观察益气复元膏方对气虚质人群的干预情况。方法：使用《中医体质分类与判定》标准中的体质判断表判断体质,将气虚质人群120例分为对照组30例和治疗组90例,对照组未服用益气复元膏方,治疗组给予益气复元膏方治疗,于冬至前后开始服用,每次约25g,开水冲服,每日早晚各1次,共计服用50～60d。结果：服用膏方后气虚质各相关因子积分差别均有统计学意义（P〈0．001）,气虚质各因子的有效率为32．22％～68．89％,平和体质人数增加,各偏颇体质亦有部分改善。治疗前后各型体质症状总积分比较,具有统计学意义（P〈0．01）。结论：益气复元膏方可以改善偏颇体质,改善气虚质人群的整体机能。