两种人胚胎干细胞体外诱导CD34＋造血前体细胞方法的比较

目的对比小鼠骨髓基质细胞系OP9共培养和二维单层诱导方法体外诱导人胚胎干细胞（hESCs）产生CD34＋造血前体细胞的效率,为后续研究提供参考。方法采用hESCs与OP9共培养方法或用二维单层诱导方法诱导hESCs产生CD34＋造血前体细胞,通过流式细胞仪检测分化效率,比较两种方法的效果。结果通过hESCs／OP9共培养方法,hESCs在分化第9日出现CD34＋细胞,比例达（19．7±7．9）％;通过二维单层诱导方法,hESCs在分化第6日即出现CD34＋细胞,比例仅为（5．8±1．8）％,两种方法分化效率比较差异具统计学意义（P〈0．05）。结论hESCs／OP9共培养方法和二维单层诱导方法均可将hESCs诱导为造血前体细胞,相对于二维单层诱导方法,hESCs／OP9共培养方法尽管需要更长的时间,但其分化效率更高,更有利于后续研究。     

丁型肝炎病毒核酶反式切割HBV mRNA片段的实验研究

目的　探讨反式作用丁型肝炎病毒 (HDV)核酶体外切割乙型肝炎病毒 (HBV)mRNA片段的可行性。方法　将化学合成的核酶cDNA克隆到含有T7启动子的载体PGEM 4Z中。利用体外转录技术转录出核酶及底物 ,研究其体外切割活性。利用E H作图法进行核酶的酶促动力学研究。结果　在体外实验中显示两酶均能成功的将底物切割 ,37℃温浴 90min的切割百分率为 5 0 %和5 1%。利用E H作图法进行的酶促动力学研究中求得Rc1、Rc2的Km值分别为 0 6 1μmol L、0 5 8μmol L,Kcat值分别为 :0 6 4·min 1 、0 6 0·min 1 。结论　反式作用HDV核酶对非HDV底物 HBVmRNA片段的成功切割为寻找新的HBV的反义抑制手段开辟了途径。     

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。     

核酶在肿瘤基因治疗中应用的研究进展

核酶是一类具有催化活性的小分子RNA ,它能够特异性的与靶RNA分子结合后进行切割 ,从而能抑制目的基因的表达。设计合适的核酶分子能够阻断癌基因的异常表达 ,逆转肿瘤细胞MDR ,促进肿瘤细胞凋亡 ,有望成为肿瘤基因治疗的有效手段之一。     

人类白细胞抗原-B51与Behet病葡萄膜炎的相关性研究

目的　探讨人类白细胞抗原 (HL A) - B5 1与 Behcet　 ) 病葡萄膜炎间的相关性。　方法　应用微量淋巴细胞毒试验 ,对 2 7例 Behcet　 ) 病患者和 30例健康人的 HL A- A和 HL A- B抗原进行研究。应用聚合酶链式反应 -序列特异性引物 (PCR- SSP)技术测定 HL A- B5 1抗原阳性的 Behcet　 ) 病患者和对照组人群中的HL A- B5 1等位基因 (HL A- B* 5 10 1- B* 5 10 7)。　结果　 Behcet　 ) 病患者和对照组 HL A- B5 1的阳性频率分别为 6 3%和 16 .7% [χ2 =12 .9,P<0 .0 0 1,Pc<0 .0 5 ,相对危险度 (RR) =8.5 ]。在 Behcet　 ) 病患者中 ,葡萄膜炎的患病率为 4 0 .7% (11/ 2 7) ;72 .7% (8/ 11) Behcet　 ) 病葡萄膜炎中存在 HL A- B5 1(均为 HL A- B* 5 10 1)。HL A- B5 1和 HL A- B* 5 10 1与 Behcet　 ) 病葡萄膜炎存在弱相关性 ,但均未见统计学差异 (分别为 RR=2 .0 7,χ2 =0 .75 9,P >0 .2 5 ;RR =2 .6 7,χ2 =1.395 ,P >0 .10 )。　结论　提示 HL A- B5 1(HL A- B* 5 10 1)是Behcet　 ) 病的易感基因 ,并与葡萄膜炎有一定的相关性     

核酶在肿瘤基因治疗中应用的研究进展

核酶是一类具有催化活性的小分子RNA，它能够特异性的与靶RNA分子结合后进行切割，从而能抑制目的基因的表达。设计合适的核酶分子能够阻断癌基因的异常表达，逆转肿瘤细胞MDR，促进肿瘤细胞凋亡，有望成为肿瘤基因治疗的有效手段之一。     

HLA—B＊5101与白塞病的相关性研究

目的 :　探讨HLA -B 5 10 1等位基因与白塞病之间的相关性。方法 :　应用微量淋巴细胞毒试验检测HLA -A和HLA -B抗原。应用PCR -SSP技术对HLA -B5 1等位基因 (HLA -B 5 10 1～HLA -B 5 10 7)进行分析。 2 0名白塞病患者符合国际白塞病委员会分类诊断标准 ,同时以 30例正常人作对照组。结果 :　在白塞病患者中 ,HLA -B5 1表型频率明显高于对照组 [患者为 6 0 % (12 2 0 ) ,对照组为 16 .7%(5 30 ) ],χ2 =10 .0 4 ,P <0 .0 0 1,校正P值 <0 .0 5 ,相对危险度为 8.98。没有发现其它HLA -A和HLA -B抗原与白塞病相关。在 12例HLA -B5 1阳性的患者中 ,均为等位基因HLA -B 5 10 1,5个HLA -B5 1阳性的对照亦均为等位基因HLA -B 5 10 1。结论 :　等位基因HLA -B 5 10 1与白塞病的易感性相关     

反式作用丁型肝炎病毒核酶体外切割活性的研究

丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ)在复制过程中 ,基因组ＲＮＡ及复制产生的抗基因组ＲＮＡ均具有自我裂解的活性———核酶(Ｒｉｂｏｚｙｍｅ)活性。ＨＤＶ核酶是在所发现的核酶类型中唯一在人体的细胞中具有天然裂解活性的核酶。通过对ＨＤＶ核酶的研究 ,已经确定了 85ｎｔ长度的核酶活性区 ,并且其二、三级结构也有了阐明。本文根据ＡｎｎｅＴ等人提出的ＨＤＶ核酶自我裂解时的假结样 (ｐｓｅｕｄｏｋｎｏｔ ｌｉｋｅ)二级结构 ,将 85ｎｔ的ＨＤＶ核酶从其Ｊ(1/ 2 )连接处分成两段 ,一段作为核酶 ,一段作为底物 ,设计ＨＤＶ核酶的反式作用形式 ;将反…     

反义核酸类药物的药理学研究进展

反义核酸技术是 2 0世纪 80年代出现的一种以应用反义核酸类药物来抑制特定基因表达为目的的基因治疗技术。反义核酸类药物包括反义寡核苷酸和核酶。前者是人工设计合成的与特定基因互补的寡核苷酸 ,它能通过Ｗ Ｃ配对与特定基因结合来抑制其表达。核酶是具有ＲＮＡ裂解活性的ＲＮＡ。它能与与其互补的靶基因的ｍＲＮＡ进行反式结合并能对其进行定点切割。应用反义核酸类药物可以特异 ,高效的抑制某种基因的表达 ,有望成为较理想的基因治疗手段。然而反义核酸要想真正成为一种药物用于临床尚存在一些问题 ,如 :他们必须先找到靶细胞 ,然后通…     

Deoxyribozymes的研究进展

具有 RNA裂解活性的 DNA分子称为脱氧核酶。它是经过体外选择技术经多次筛选获得的。脱氧核酶在切割与其互补的 RNA底物分子时具有极高的特异性和切割效率 ,有望成为新的 RNA灭活工具