塞来昔布抑制PI3K-Akt信号转导通路及COX-2表达的作用研究

目的:观察塞来昔布降调节COX-2的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及阻止PI3K-Akt信号转导的可能机制。方法:采用MTT法检测塞来昔布对HeLa细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测塞来昔布对HeLa细胞增殖周期和凋亡的影响,并用免疫组化SP法和RT-PCR法检测塞来昔布对细胞PI3K-Akt信号转导通路的影响。结果:塞来昔布抑制HeLa细胞增殖和诱导HeLa细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,经不同浓度的塞来昔布处理24 h后,HeLa细胞周期的G1期、G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,细胞被阻滞于G2/M期。塞来昔布能阻止PI3K-Akt的信号转导,并呈浓度和时间依赖性。结论:塞来昔布在体外能下调COX-2的表达,抑制HeLa细胞的增殖,并诱导其凋亡,其作用机制与阻滞细胞周期于G2/M期及阻止PI3K-Akt信号转导通路有关。     

一种新的分子治疗方式——RNAa

RNA激活是最近发现在转录水平激活目的基因表达的新的RNA调控方式,能够激活基因转录的小分子RNA被称为小激活RNA( saRNA).和siRNA的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,具有更为广泛的肿瘤治疗范围,有可能成为基因功能研究及疾病治疗的一种新的有效工具.     

提高病理学实验教学效果的几点体会

病理学实验课是病理教学中很重要的一部分,从精选编排教材,加强培养学生的实践能力,加强教学互动,贯穿病例分析,实行引导式教学等方面来提高病理学实验课教学效果谈几点体会。     

自噬与肺癌化疗和靶向药物耐药关系的研究进展

肺癌是全球癌症相关死因第一位的恶性肿瘤,目前临床上治疗中晚期肺癌主要以化疗和分子靶向治疗为主。肿瘤耐药是临床上化疗和靶向治疗失败的最主要原因之一。自噬相关分子参与机体生理病理众多过程而且调控机制非常复杂。本文主要综述在肺癌化疗和靶向药物耐药的过程中自噬相关分子发生的改变,旨在阐明自噬与肺癌耐药的关系。     

天花粉蛋白突变体的构建及其与重组天花粉在原核系统中的表达和纯化

目的:对天花粉蛋白(TCS)的第120-123位氨基酸进行缺失突变,并在原核系统中对其进行表达和纯化。方法:利用重叠延伸PCR的方法得到TCS突变体cDNA,并克隆入原核表达载体pET-28(a+)。酶切和测序鉴定后,将突变体质粒pET-28(a+)-mTCS转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化和Western-blot鉴定。结果:利用重叠延伸PCR成功获得突变天花粉蛋白的编码序列,并构建pET-28(a+)-mTCS原核表达质粒。在BL21(DE3)菌中,突变体蛋白(mTCS)可被IPTG诱导性表达,并被Ni2+-NTA树脂有效纯化。结论:本实验成功获得一种突变体TCS,并建立该突变TCS的原核表达和纯化的实验方法。     

端粒酶与肺癌研究进展

端柱酶是一种由结构RNA和蛋白质构成的逆转录酶，端粒酶的激活可使细胞获得无限增殖的能力而成为永生细胞，它与肺癌的发生发展关系密切，本文综述端拉酶与肺癌的关系研究进展。     

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及bax 、bcl-2 基因表达的影响

 目的 研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法 不同浓度天花粉蛋白分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞周期，WesternBlot检测凋亡相关蛋白bax，bcl-2的表达。结果 显微镜下观察到细胞圆缩，染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变，流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰，随着天花粉蛋白浓度的增加，bax基因的表达增加而bcl-2的表达减少。结论 天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2蛋白的减少与bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

端粒酶和P53在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的 研究人脑胶质瘤中端粒酶活性与P53蛋白表达的情况,并探讨其与胶质瘤的相关关系及可能存在的临床意义.方法 采用PCR-ELISA法和免疫组化ABC法,对72例人脑胶质瘤及16例正常脑组织标本中的端粒酶活性和P53蛋白分别进行检测.结果 脑胶质瘤中端粒酶活性和P53蛋白的阳性表达率分别为61.11%(44/72)和51.39%(37/72),且各组阳性率随病理级别的升高而增加(P＜0.01),而正常脑组织中两者表达均为阴性;P53蛋白表达阳性患者端粒酶活性表达的阳性率为83.78%(31/37);P53蛋白表达阴性患者端粒酶活性表达的阳性率为37.14%(13/35),两者之间存在相关关系(P＜0.05).结论 P53蛋白与端粒酶共同参与了脑胶质瘤的发生发展过程,可作为反映胶质瘤恶性程度的重要指标.     

Smac基因过表达联合天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响及其相关机制的研究

目的 探讨Smac基因过表达联合天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌Caski细胞凋亡影响及其相关机制.方法 构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/Smac,稳定转染入宫颈癌Caski细胞后,筛选Smac高表达的细胞株Caski/Smac;RT-PCT和Western blot法分别用于测定Smac基因在mRNA和蛋白水平上的表达水平;MTr法观察Smac高表达对Caski细胞生长及对TCS敏感性的影响;流式细胞仪分析TCS对Caski细胞凋亡的影响.结果 ①TCS能诱导Caski细胞内Smac基因表达,且呈时间与浓度依耐性;②成功获得Smac基因高表达的细胞株Caski/Smac;③Smac高表达使Caski细胞生长速度明显减慢(P＜0.01),且对TCS的敏感性显著性增加(P＜0.01);④TCS作用于Caski细胞可诱发其凋亡,但Smac高表达的细胞凋亡更为明显,差异具有显著性(P＜0.01).结论 Smac基因过表达能增加Caski细胞对TCS的敏感性,在同等药物浓度下能更明显抑制细胞增殖和促进其凋亡.此外,TCS也能够诱导细胞中Smac基因表达,这可能是其促细胞凋亡的机制之一.