乙型肝炎病毒不同基因区RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制和表达的实验研究

目的针对乙型肝炎病毒(HBV)不同基因区设计siRNA,观察其对HBV表面抗原、e抗原分泌和HBVDNA复制的影响。方法靶向HBV基因区S、C、X的siRNA分别转染可稳定分泌HBV颗粒的HepG2.2.15细胞,转染后72h,采用ELISA方法检测上清液中HBsAg、HBeAg的含量,Real-timePCR定量检测HBVDNA拷贝数。结果靶向不同基因区的siRNA均能不同程度地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌和HBVDNA的复制,其中S区siRNA对HBsAg呈现非常显著的抑制作用,抑制率为91.88%(P﹤0.01),对HBeAg表达的抑制作用较弱,抑制率为24.85%(P﹤0.05),对HBVDNA的抑制率为63.07%(P﹤0.01);C区siRNA对HBeAg和HBVDNA抑制作用较强,分别为54.77%(P﹤0.01)和76.97%(P﹤0.01),但对HBsAg的表达无明显影响(P﹥0.05);X区siRNA对HBsAg和HBeAg、HBVDNA均有抑制作用,抑制率分别为90.83%(P﹤0.01)、34.85%(P﹤0.01)和70.31%(P﹤0.01)。靶向不同基因区的siRNA对HBsAg、HBeAg、HBVDNA的抑制作用在一定的程度上存在剂量效应,而无关序列对HBsAg、HBeAg和HBVDNA的复制和表达几乎无干扰作用(P﹥0.05)。结论靶向HBVC、S、X基因区的siRNA可特异、高效、稳定地抑制HBV的复制和表达,为应用RNA干扰治疗乙型肝炎病毒奠定了一定基础。     

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒基因分型的研究

[目的]了解宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)的感染及其基因型的分布情况,并探讨人乳头瘤病毒感染及其基因型与癌肿类型的相关性.[方法]采用可检测23种HPV基因型的基因芯片方法分别检测200例宫颈癌组织的HPV基因型,计算宫颈癌组织中HPV及各基因型的感染率,比较HPV及其主要基因型与癌肿类型的关系.[结果]①200例官颈癌组织中HPV的阳性率为94.00%(188/200),其中鳞癌为95.86%(162/169),显著高于腺癌的80.00%(X2=9.73,P<0.01),而HPV16、HPV18型和HPV双重感染在鳞、腺癌中的阳性率差异无显著性.②200例宫颈癌组织中共检测到9种HPV基因型,分别为HPV16,18,45,33,58,59,73,31,56,均为高危型感染,其中HPV16最常见,检出率达74.00%(148/200)、其次是HPV18,16.00%(32/200);200例宫颈癌组织中共检测到HPV双重感染24例,检出率达12.00%.[结论]HPV与宫颈癌的关系密切,HPV感染更常见于宫颈鳞癌.但HPV各基因型的分布与宫颈癌的类型无关;宫颈癌的HPV基因型呈多样性,且均为高危型感染,其中以HPV16型最常见,其次是HPV18型,并存在一定数量的双重感染.     

荧光定量PCR技术检测石蜡包埋组织结核杆菌DNA的应用评价

[摘要] 目的 探讨荧光定量PCR技术（FQ-PCR）检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA（TB-DNA）在结核病诊断中的应用价值。方法233例的石蜡包埋组织标本采用实时荧光定量PCR技术检测TB-DNA，同时进行抗酸染色和组织病理学检查，以临床诊断结果为金标准，分别计算TB-DNA、抗酸染色和病理学检查的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值。结果129例临床诊断为结核病的组织标本中，TB-DNA阳性107例， TB-DNA阴性22例；104例非结核病的标本中， TB-DNA阳性2例，TB-DNA阴性102例。TB-DNA检测的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为82.95%、98.08%、89.70%、98.17%、82.25%，均高于抗酸染色的63.57%、95.19%、77.68%、94.25%、67.80%和病理学检查的77.52%、96.15%、85.84%、96.15%、77.52%。结论 FQ-PCR技术检测石蜡包埋组织的TB-DNA用于各种结核病的诊断具有灵敏度高、特异性强的优点，与病理学检查相结合可以大大提高结核病的诊断率，适合于临床推广应用。