从ALT异常患者外周血中检出CD3- CD4+ 淋巴细胞一例

我科于2006年6月从一患者外周血检出CD-3CD+4淋巴细胞.对该患者进行跟踪观察,发现该群淋巴细胞始终存在于外周血中.现报告如下.     

Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。     

一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化

为了研究外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化，将HL-60细胞与SNP在体外培养，用MTT法观察NO对细胞的抑制作用；用透射电子显微镜和光学显微镜观察细胞结构的变化；用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、Annexin-V／PI法等分析细胞凋亡；用双氢罗丹明123（DHR）标记、流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS），并同时测定细胞内谷胱甘肽（GSH）和3种抗氧化酶的活性。结果表明：SNP能抑制HL-60细胞生长，典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚二倍体峰比例增加、DNA末端标记和Annexin-V^＋／PI^-表达增加等证实NO能诱导白血病细胞凋亡，且两者之间有明显的量效和时效关系。在此过程中，细胞内ROS水平增加，细胞内谷胱甘肽和过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性降低。ROS含量和CAT、GST、GPX活性与SNP之间也有明显的量效关系。结论：细胞内活性氧自由基增加和抗氧化能力下降在外源性一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中发挥了重要作用。     

细胞免疫表型分析在急性白血病诊断中的应用

采用流式细胞术对４５例急性白血病病人进行免疫表型分析。急性髓系白血病均表达髓系抗原，部分同时伴有淋系抗原（ＣＤ７）表达，急性淋系白血病均表达淋系抗原，少数伴有髓系抗原（ＣＤ１３、ＣＤ３３）表达。１例慢粒急淋变既表达髓系抗原标记，又表达Ｂ系抗原标记。结果表明，白血病免疫表型是急性白血病诊断与分型的重要手段一仍需结合细胞形态学、组织化学检测。     

脓毒症患者调节性T细胞与CD64指数的相关性研究

目的 探讨CD4+ CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+在脓毒症发生发展中的作用.方法 流式细胞术检测脓毒症患者(其中生存组17例,死亡组11例)CD4+ CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+、CD64指数,同时测定白细胞数(WBC)和C-反应蛋白(CRP)的水平,并与正常对照组比较.结果 脓毒症组CD4+ CD25+/highCD127 low/-、CD64指数均明显高于正常对照组,CD14+ HLA-DR+明显低于正常对照组;动态观察结果显示,随着疾病的进展,生存组CD4+ CD25+highCD127low/-、CD64指数均明显回落,而死亡组两者却持续升高;而CD14+ HLA-DR+刚好相反,生存组CD14+HLA-DR+逐渐升高,死亡组CD14+ HLA-DR+明显低于存活组,且持续处于低水平状态;相关性分析显示,CD4+ CD25+/high CD127low/-与CD64指数、CRP正相关;CD14+ HLA-DR+与CD64指数、CRP明显负相关;CD54指数与WBC、CRP正相关.结论 CD4+CD25+/highCD127low/-、CD14+ HLA-DR+与疾病感染和炎症严重程度密切相关,可作为疾病严重程度及预后的指标.     

木瓜蛋白酶体外对血小板聚集的抑制作用

目的：以洗涤血小板为模型,观察木瓜蛋白酶在体外对血小板聚集的抑制作用,以探讨其抗血栓作用的可能机制。方法：将不同剂量木瓜蛋白酶与洗涤血小板作用,以血小板聚集分析仪检测ADP、花生四烯酸（AA）、胶原和凝血酶诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板膜纤维蛋白原受体（FIB-R）和P-选择素表达水平,以SDS-PAGE分析血小板肌动蛋白聚合体的变化。检测ADP诱导的原发性高血压（PH）及急性心肌梗死（AMI）患者血小板最大聚集率和FIB-R表达水平。结果：木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制血小板聚集,降低血小板最大聚集水平,血小板聚集水平与木瓜蛋白酶剂量呈负相关（P〈0.01）。木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制ADP诱导的血小板FIB-R表达,降低FIB-R表达水平（P〈0.01）。木瓜蛋白酶降低ADP诱导的血小板膜P-选择素表达水平和抑制肌动蛋白聚合体增加（P〈0.01）。木瓜蛋白酶抑制PH及AMI患者血小板聚集和FIB-R表达（P〈0.01）。结论：木瓜蛋白酶通过抑制活化血小板膜纤维蛋白原受体的表达,并抑制肌动蛋白聚合以及释放反应从而剂量依赖性地抑制血小板的聚集反应,有抗血栓形成作用。     

脓毒症患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与预后的关系

目的评价脓毒症患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化趋势及其与预后的相关性。方法采用流式细胞仪检测36例脓毒症患者自诊断成立第1、3、5天的CD4^＋CD25^＋细胞／CD4^＋细胞比值,并与15例健康体检者（对照组）比较。按照预后分为生存组和死亡组,分析两组CD4^＋CD25^＋调节性T细胞随时间的变化。结果脓毒症患者19例生存,17例死亡。生存组和死亡组第1天CD4^＋CD25^＋细胞／CD4^＋细胞比值均低于对照组[分别为（12．42±3．26）％、（12．96±3．00）％比（16．97±3．66）％,P〈0．05].生存组和死亡组第3天CD4^＋CD25^＋细胞／CD4^＋细胞比值分别为（24．47±4．62）％和（26．61±3．85）％,均高于第1天,差异有统计学意义（P〈0．05）。生存组第5天CD4^＋CD25^＋细胞／CD4^＋细胞比值为（18．28±4．28）％,较第3天显著下降,差异有统计学意义（P〈0．05）;死亡组第5天CD4^＋CD25^＋细胞／CD4^＋细胞比值为（36．19±5．33）％,较第3天显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。第1、3天生存组和死亡组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）;第5天生存组CD4^＋CD25^＋细胞/CD4^＋细胞比值显著低于死亡组（P〈0．05）。结论脓毒症患者血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞呈现先下降后上升的变化,而持续上升提示出现免疫功能麻痹,伴随病死率的升高。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可作为临床评价脓毒症患者炎性反应中免疫功能状态和预后的方便可靠的指标。     

脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其与预后的关系

目的 评价脓毒症患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化趋势及其与预后的相关性.方法 采用流式细胞仪检测36例脓毒症患者自诊断成立第1、3、5天的CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值,并与15例健康体检者(对照组)比较.按照预后分为生存组和死亡组,分析两组CD4+CD25+调节性T细胞随时间的变化.结果 脓毒症患者19例生存,17例死亡.生存组和死亡组第1天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值均低于对照组[分别为(12.42±3.26)%、(12.96±3.00)%比(16.97±3.66)%.P＜0.05].生存组和死亡组第3天CD4+CD25+s细胞/CD4+细胞比值分别为(24.47±4.62)%和(26.61±3.85)%.均高于第1天,差异有统计学意义(P＜0.05).生存组第5天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值为(18.28±4.28)%,较第3天显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);死亡组第5天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值为(36.19±5.33)%,较第3天显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).第1、3天生存组和死亡组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);第5天生存组CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值显著低于死亡组(P＜0.05).结论 脓毒症患者血中CD4+CD25+调节性T细胞呈现先下降后上升的变化,而持续上升提示出现免疫功能麻痹,伴随病死率的升高.CD4+CD25+调节性T细胞可作为临床评价脓毒症患者炎性反应中免疫功能状态和预后的方便可靠的指标.     

流式细胞术快速检测白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性的研究

目的 建立流式细胞术快速检测白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性试验(FCST)的方法.方法用FCST法对标准菌株在不同实验条件下检测以探讨最佳实验条件,对FCST法与NCCLS M27-A法进行对比,得出最低抑菌浓度(MIC)判断标准;同时对30株临床菌株进行FCST法双份平行检测并与M27-A进行比较.结果 流式细胞术快速检测不同比例死菌与活菌混合液检测值及设定值具有良好的相关性(r=0.999);MIC判断标准为死菌比率在连续系列管中高浓度管比低浓度管出现＞50.0%的增长,并且保持稳定或连续增长,则可判定高浓度管药物浓度为该菌的MIC值;对30株临床分离菌株的检测发现,该法具有很好的重复性,与M27-A比较,两者一致率为93.3%,结果差异无统计学意义(P＞0.05),并有很好的相关性(r=0.822).结论 FCST具有快速、重复性好、易于判断MIC值、准确性高等优点,在临床抗真菌药物敏感性检测中具有很大的应用前景.     

麻疹患儿外周血T淋巴细胞及杀伤细胞分析

目的探讨麻疹患儿外周血T淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞的变化。方法收集麻疹患儿174例作为病例组,以门诊健康体检婴幼儿作为对照组;采集外周血细胞,用标记荧光的抗体进行染色,流式细胞仪分析麻疹患儿T淋巴细胞和NK细胞的变化。结果麻疹患儿CD8细胞百分率为(24.98±8.24)%,NK细胞百分率为(13.14±6.49)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);2组间CD3、CD4细胞百分率及CD4/CD8比值差异无统计学意义(P0.05);麻疹患儿中,麻疹病毒高活性组CD3细胞为(2586.54±1635.90)个/μL,CD4细胞为(1450.06±849.06)个/μL,均低于麻疹病毒低活性组〔分别为(3527.36±1912.88),(2046.43±900.92)个/μL〕,差异均有统计学意义(P0.05);2组间CD8细胞和NK细胞差异无统计学意义(P0.05)。结论测定麻疹患儿外周血T淋巴细胞和NK细胞变化有助于评价麻疹患儿感染早期的免疫状况,而且对判断病毒复制的活跃程度具有重要价值。