杭州地区497例孕妇凝血指标和D-二聚体在妊娠期的变化情况分析

目的观察分析杭州地区497例孕妇凝血指标、D-二聚体(D-D)在妊娠各期的变化情况,初步建立妊娠期的D-二聚体和纤维蛋白原的参考区间。方法选取2016年1月-6月于本院进行健康体检的正常孕妇497例作为研究对象,分为早孕组164例,中孕组174例,晚孕组159例和健康对照组159例,对以上4组的凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)和D-二聚体(D-D)进行检测和比较。结果妊娠各组的PT、APTT、TT与对照组比较有明显降低,PT、APTT随着孕龄的增加而逐渐降低(P0.05)。FIB和D-D随着妊娠进程的增加而逐渐升高(P0.05)。正常孕妇的血浆PT、APTT、TT、FIB和D-D在妊娠各组间差异有统计学意义(P0.05),但PT、APTT、TT落在现行正常人群的参考区间,而FIB和D-D在不同孕期的差异较大。结论本研究通过观察分析杭州地区正常孕妇妊娠期的凝血指标和D-二聚体的变化情况,建立不同孕期正常孕妇的血浆纤维蛋白原和D-二聚体的参考区间。     

多基因启动子甲基化诊断乙型肝炎病毒相关肝癌的研究

目的  探讨血清多基因启动子甲基化在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）中的诊断价值。方法  随机收集98例HCC、75例肝硬化（LC）、90例慢性乙型肝炎（CHB）患者以及80例健康者血清各2ml,以血清BVES、APC、RASSF1A、TIMP3、GSTP1和HOXA9基因作为候选靶标。采用磁珠法提取血清DNA,MethyLight法检测基因启动子甲基化。通过构建受试者工作特征曲线（ROC）评价各检测指标的诊断效能。结果  血清各基因启动子甲基化在HCC患者检测阳性率分别为：RASSF1A（52.04%）、APC（36.73%）、BVES（29.59%）、HOXA9（20.41%）、GSTP1（17.35%）和TIMP3（11.22%）,其中APC甲基化阳性完全与RASSF1A重叠。血清RASSF1A甲基化从慢性HBV感染患者中诊断HCC的效能最高[敏感性=0.520,特异性=0.915,曲线下面积（AUC）=0.718],优于血清AFP（敏感性=0.480,特异性=0.739,AUC=0.609）;血清6个基因启动子甲基化联合使用的敏感性、特异性及诊断效能进一步提高,分别为0.806、0.855和0.845。结论  血清BVES、APC、RASSF1A、TIMP3、GSTP1及HOXA9基因启动甲基化联合检测能显著提高高危人群中HCC的诊断能力。

     

葛根素对急性乙醇中毒大鼠超氧化物歧化酶和丙二醛水平的影响

目的观察葛根素对急性乙醇中毒大鼠超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平的影响。方法健康成年体重相近的雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、模型组、葛根素预防性给药组及葛根素治疗性给药组。测定血中乙醇浓度变化,观察各组大鼠下丘脑和海马中超氧化物歧化酶和丙二醛活性及水平变化。结果预防组和治疗组大鼠的血中乙醇浓度均比模型组低;与对照组相比,模型组大鼠下丘脑和海马SOD,MDA发生了明显变化,而葛根素治疗及预防性给药均能够拮抗SOD,MDA的变化,表现为增强SOD活力,降低MDA含量,其中治疗组的对抗性更明显。结论葛根素对急性乙醇中毒大鼠脑内氧化反应有明显的拮抗作用,能起到保护及治疗的作用。     

四重逆转录重组酶聚合酶等温扩增技术快速联检四种难鉴别蚊媒病毒的效果观察

目的建立针对登革病毒（DENV）、黄热病毒（YFV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）、寨卡病毒（ZIKV）的四重逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）技术,用于同时快速检测上述4种病毒。方法通过正交设计建立检测4种蚊媒病毒（DENV、YFV、CHIKV、ZIKV）的四重RT-RPA反应体系。通过质粒标准品、体外转录RNA和临床血清验证单重RT-RPA和四重RT-RPA的检测灵敏度、特异度、重复性和临床应用符合率。结果单重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV、ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、＜1×102Copies/ml,对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV体外合成RNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml,四重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml,对体外合成RNA的检出限分别为5×102、5×102、5×102、5×102Copies/ml。本研究建立的单重及四重RT-RPA反应体系与其他常见病毒不存在交叉反应,RT-RPA法测定的阈值时间值（TT）的变异系数为1.76%~5.96%。四重RT-RPA法对不同病毒体外转录RNA检出率不同,DENV、YFV和CHIKV为100.00%,ZIKV为83.33%。单重RT-RPA、四重RT-RPA、RT-PCR对DENV临床样本的检出率无统计学差异（P＞0.05）。结论本研究建立的针对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV的单重RT-RPA和四重RT-RPA检测方法特异度好、灵敏度高、重复性好,对蚊媒传染病的早期诊断及鉴别诊断具有重要作用,同时也为其他新发再发传染病的快速诊断方法建立提供研究方向。     

遗传性耳聋基因筛查中2种耳聋基因检测方法的应用比较

  目的   探讨PCR+导流杂交法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法在遗传性耳聋基因筛查中的临床应用价值。  方法  选取杭州市第一人民医院自2016年7月—2017年7月经耳鼻咽喉科检测为听力障碍患者236例, 应用PCR+导流杂交法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测常见的4个耳聋相关基因: GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体12SrRNA的20个位点突变情况。所有样本均采用Sanger测序法进行验证。  结果   PCR+导流杂交法检测出耳聋基因突变48例, 其中GJB2基因突变率为11.44%, 杂合突变17例, 纯合突变10例; GJB3基因突变率为0.42%, 杂合突变1例; SLC26A4基因突变率为5.08%, 杂合突变10例, 纯合突变2例; 12 s RNA基因突变率为0.85%, 异质突变2例; 双杂合突变6例。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测出耳聋基因突变53例, 其中GJB2基因突变率为11.86%, 杂合突变18例, 纯合突变10例; GJB3基因突变率为0.85%, 杂合突变2例; SLC26A4基因突变率为5.51%, 杂合突变10例, 纯合突变3例; 12 s RNA基因突变率为0.85%, 异质突变2例; 双杂合突变8例。2种方法的耳聋基因检出率分别为20.3%和22.5%, 检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)。  结论  采用合理的检测方法进行耳聋基因筛查, 是预防和降低遗传性耳聋发生的重要手段之一。      

急性乙醇中毒大鼠下丘脑阿片肽含量的变化及葛根素的干预研究

目的观察急性乙醇中毒大鼠下丘脑β-内啡肽（β—endorphine,β—EP）、亮脑啡肽（leu—enkephalin,LENK）和强啡肽A（dynorphin A,DynA）含量变化及葛根素的干预作用。方法选雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、模型组和葛根素组,分别测定血中乙醇浓度变化,下丘脑β—EP,LENK,Dyn A的含量。结果葛根素组的血乙醇浓度比模型组低,与对照组相比,模型组大鼠下丘脑β-EP,LENK水平显著增高,DynA的含量变化不明显。葛根素组与模型组相比,β-EP,LENK水平均显著降低,Dyn A含量变化不明显。结论急性乙醇中毒时阿片肽释放增加,葛根素可能通过降低血乙醇浓度来抑制阿片肽的释放,对乙醇中毒起到治疗作用。     

PCR-荧光探针法和核酸序列测 定法对呼吸道病原体的检测效能 比较及呼吸道病原体的流行特征 分析

目的 比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能，进一步分析呼吸道病原体的流行特 征。 方法 选择 2019 年 7 至 12 月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者 309 例，采集鼻咽拭子标本，分别采 用核酸序列测定法和 PCR-荧光探针法进行同步盲法检测，以核酸序列测定法的检测结果为金标准，分析 PCR-荧光探针法检测 不同病原体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，并分析不同呼吸道病原体的流行特征。 结果 309 例鼻咽拭子标本中， 两种方法检测结果不一致或不完全一致的样本共 2 例，针对不同病原体，PCR-荧光探针法的检测灵敏度均为 100.00%，特异度为 99.65%~100.00%，阴性预测值均为 100.00%，阳性预测值为 75.00%~100.00% 。309 例呼吸道感染患者，人鼻病毒检出率为 25.6%（79/309），人腺病毒检出率次之，为 11.3%（35/309）；学龄前儿童（＜6 岁）和 6~21 岁人群检测出 18 种呼吸道病原体，其中 以人鼻病毒检出率最高。 结论 与核酸序列测定法相比，PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的呼吸道病原体更灵敏、安全、简 便、稳定，具有较高的临床应用价值。本院呼吸道感染以人鼻病毒为主。