CYP3A4内含子10对CYP3A4基因表达的增强子作用

目的 探讨CYP3A4内含子10及其内SNP CYP3A4*1G对CYP3A4基因表达的调控作用.方法构建CYP3A4启动子启动转录的CYP3A4真核表达质粒, 将CYP3A4内含子10 (CYP3A4*1G野生型/突变型) 正向或反向插入该质粒的启动子上游, 从而构建出不同基因型、不同方向的CYP3A4内含子10调控的CYP3A4真核表达质粒.将构建好的各质粒分别转染入Hep G2细胞, 应用实时荧光定量PCR方法检测CYP3A4 m RNA表达水平.结果 构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定, 插入片段的序列和方向与预期完全一致.无论CYP3A4*1G野生型还是突变型, 反向组CYP3A4 m RNA表达水平均高于正向组 (P<0.01) ;而CYP3A4内含子10无论是正向还是反向, CYP3A4*1G野生型组CYP3A4 m RNA表达水平均高于突变型组 (P<0.01) .此外, 正向突变组CYP3A4 m RNA表达水平低于阳性对照组, 不但没有增强CYP3A4启动子的转录作用反而有所减弱.结论CYP3A4内含子10有类似于增强子的功能, 能够影响CYP3A4启动子对CYP3A4基因的转录, 且具有方向性和CYP3A4*1G等位基因依赖性.     

Sebia毛细管电泳仪检测HBA2对地中海贫血的诊断价值探讨

目的 用诊断性试验指标评价Sebia毛细管电泳仪检测血红蛋白A2 (HBA2)在地中海贫血(以下简称地贫)诊断中的价值.方法 产前筛查孕妇中疑似地贫携带者2 892例,同时检测HBA2、α和β地贫基因.HBA2用法国Sebia全自动电泳分析仪-Caplillarys检测,α、β地贫基因诊断分别用GAP-PCR法和PCR...     

血液学筛查指标在不同年龄组地中海贫血的诊断价值评价

目的:用诊断性实验指标评价平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞体积分布宽度标准差(RDW-SD)在不同年龄人群地中海贫血(以下简称地贫)检测中的价值。方法:选择不同年龄筛查人群5 564例,疑似地贫患者1 166例,其中成人780例,儿童260例,新生儿126例,地贫基因成人确诊336例,儿童确诊110例,新生儿确诊21例,MCV、RDW-SD、MCH用SYSMEX SF-3000检测,α、β地贫基因诊断分别用GAP-PCR法和PCR结合反向斑点杂交法(RDB)法。应用诊断性实验指标,以基因诊断结果为金标准,对以上几项血液学参数在不同年龄组对地中海贫血的诊断价值进行分析。结果:①在判断地贫时,MCV、MCH、RDW-SD ROC曲线下面(AUCROC)在成人组分别为0.917、0.895、0.869;在儿童组分别为0.965、0.956、0.778;在新生儿组分别为0.873、0.806、0.774;②MCV、MCH、RDW-SD判断地贫最佳临界值在成人组分别为75.45 fl,23.65 pg,36.76 fl;儿童组分别为68.95 fl,21.70 pg,33.75 fl;新生儿组分别为96.30 fl,32.85 pg,55.45 fl。③MCV,MCH,RDW-SD判断地贫阴性预测值在成人组分别为99.3%、99.2%、97.5%;儿童组分别为99.5%、99.3%、97.0%;新生儿组分别为99.0%,99.4%、99.0%。阳性似然比成人组分别为15.1,11.0,9.53;儿童组分别为17.3、17.2、13.8;新生儿组分别为16.3、20.8、13.5。阴性似然比成人组分别为0.08、0.10、0.28;儿童组分别为0.06、0.12、0.35;新生儿组分别为0.31、0.20、0.30。结论:①MCV,MCH,RDW-SD对不同年龄组地贫的诊断价值均较高,其中MCV诊断价值最大;②在诊断地贫时,新生儿,儿童,成人MCV、MCH、RDW-SD最佳临界值明显不同。