肝癌、胃癌患者癌组织及血、尿中杂色曲霉素的检测

用改良的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法和间接竞争酶联免疫分析法（ＩＣ－ＥＬＩＳＡ），分别对１４名肝癌、胃癌患者的２８份癌组织、１３份血样及２０份尿样进行杂色曲霉素（ＳＴ）的检测，结果在１４份癌组织和／或癌周组织中检出了ＳＴ与ＤＮＡ形成的加合物（简称ＤＮＡ－ＳＴ加合物）。在４／１３份病人血样中ＳＴ检出值较高（６５－１１３μｇ／ｋｇ），１／１４份正常人血ＳＴ值较高（６８μｇ／ｋｇ）。尿液ＳＴ检出值均很低（最高值为１３μｇ／ｋｇ）。     

杂色曲霉素抗体的制备与应用

本文提出了一种抗杂色曲霉素抗体的制备方法,建立了检测食物及饲料中杂色曲霉素(ST)污染情况的酶联免疫吸附试验(ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)。两种方法对ST的最低检出限为2ppb(μg/kg)。液相萃取配合多次层析技术,从杂色曲霉纯培养物中提取到ST,经薄层层析和高效液相色谱鉴定后,以甲醛为偶联剂,将一定量ST连接到牛血清白蛋白(BSA)上,制得复合抗原BSA-ST,多次免疫大白鼠和青紫蓝兔,10～16周后获得不同滴度的抗体。用双向琼扩试验、对流免疫电泳和间接ELISA测定抗体的特异性和效价后,经饱和硫酸铵盐析和DEAE纤维素离子交换法纯化抗体。以ELISA和Dot-ELISA两种方法检测了24份饲料样品,发现其中14份含ST达8～6500ppb。     

杂色曲霉素单克隆抗体的研制与特性鉴定

杂色曲霉素（ＳＴ）衍生后偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）或血蓝蛋白（Ｈ）上，制得复合抗原ＢＳＡ－ＳＴ和Ｈ－ＳＴ。将ＢＳＡ－ＳＴ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。筛选到一株稳定分泌抗ＳＴ抗体的单克隆杂交瘤细胞株，该株细胞诱导的小鼠腹水及血清中均富含抗ＳＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ－ＳＴ）。经鉴定，ＭｃＡｂ－ＳＴ属于ＩｇＧ＿１，与Ｈ－ＳＴ反应之亲和力常数为１．２９ｘ１０￣９Ｌ／ｍｏｌ，其分子量为１６８０００（重链５３０００，轻链３１０００）。ＭｃＡｂ－ＳＴ的结构类似物的相对交叉反应下超过２％。应用ＭｃＡｂ－ＳＴ及Ｈ－ＳＴ建立的ＩＣ一ＥＬＩＳＡ法测定ＳＴ的线性范围是０．１～１０ｎｇ／ｍｌ，最低检测量是０．５ｐｇ／　２５μｌ，为快速检测粮食中ＳＴ提供厂重要手段。     

杂色曲霉素高产菌株的筛选

用薄层层析法初步筛选16株曲霉在5种培养基上产生杂色曲霉素(ST)的能力后,选定14株比较它们在玉米豆粉固体培养基上的ST产量。高压液相色谱测定发现,经28℃一个月静置培养后,ST最高产量达1.16g/kg,比国内文献报道产量高4～23倍。高产菌株已用于大量制备ST。     

胃癌、肝癌高发区和低发区粮食中杂色曲霉素污染量调查

采用间接竞争酶联免疫吸附试验（ＩＣ－ＥＬＩＳＡ）测定了２０８份粮食样品的杂色曲霉素（ＳＴ）污染量，发现其中７９份含ＳＴ少于４μｇ／ｋｇ，１１１份含４～３９μｇ／ｋｇ；ＳＴ污染量高于４０μｇ／ｋｇ的有１８份，最高含３４μｇ／ｋｇ。采自胃癌、肝癌高发区的１０７份样品，有４４．９％含２０μｇ／ｋｇ以上的ＳＴ，而低发区的６１份样品只有１４．８％含ＳＴ在２０μｇ／ｋｇ以上。二者，有极显著的差异（Ｐ＜０．０１）；高发区样品的ＳＴ污染量加权平均值为（１９．６±２１．６）μｇ／ｋｇ，低发区的为（１２．２±１１．８）μｇ／ｋｇ，二者也有极显著的差异（Ｐ＜０．０１）。在同一类地区，原粮的ＳＴ污染量显著高于成品粮的；不同粮食品种之间的ＳＴ污染量有差异，按ＳＴ污染量由大到小排列为：杂粮及饲料＞小麦＞稻谷＞玉米＞面粉＞大米。就单一品种比较，来自胃癌、肝癌高发区和低发区的小麦、玉米、大米三种粮食的ＳＴ污染量之间都有显著差异（Ｐ＜０．０５），而稻谷、面粉的ＳＴ污染量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。对其中的１６份样品按现行国家标准检测方法──薄层层析法测定ＳＴ含量，发现１５份样品的测定结果与ＩＣ－ＥＬＩＳＡ法的测定值相一致。二种测定方法的符合?