应用小剂量第2信使调节剂混合物冰冻保存血小板的体外功能研究

目的探讨应用小剂量第2信使调节剂混合物[thrombosol(TS):250μmol/L阿米洛利、50μmol/L硝普钠、100μmol/L腺苷和2%二甲基亚砜(DMSO)]冰冻保存血小板的体外功能变化。方法新鲜浓缩血小板应用终浓度2%DMSO、1×TS或2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠为冰冻保护剂-80℃保存,分别在冰冻前,冻存1周、1个月、3个月和6个月复温后,检测Plt、平均血小板体积(MPV)、凝血酶诱导的聚集反应、血小板表面CD42b、CD62p和CD63分子改变。结果2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠冰冻保存血小板的Plt、凝血酶诱导的聚集反应和CD42b表达水平明显高于2%DMSO组(P<0.05或<0.01),CD62p和CD63表达显著低于2%DMSO组(P<0.05或P<0.01),所有检测结果均与TS组血小板差异无统计学意义(P>0.05),而且随冰冻保存时间的延长无明显改变(P>0.05)。结论2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠冰冻保存6个月血小板的体外功能与TS冰冻保存血小板相当。     

长春新碱载体红细胞体内代谢分布的初步研究

目的：初步探讨长春新碱载体红细胞在小鼠体内的分布代谢情况。方法i昆明种小鼠腋窝皮下接种S180肉瘤细胞建立荷瘤小鼠模型，将荷瘤小鼠随机分为长春新碱、长春新碱载药红细胞2组，经尾静脉分别注射长春新碱200ug及长春新碱载药红细胞（浓度1cg／L）。注射后0、1、2、3、4、24、48及72h取小鼠血液、肝脏及肿瘤组织，用高效液相色谱法测定其中药物浓度，计算半衰期。结果：长春新碱进入体内后血浆浓度迅速增高，其代谢速率也很快，48h后完全测不出，半衰期1．53h。长春新碱载药红细胞在血浆中浓度稳定而持久，72h仍可测出，药物半衰期达4．1h，是前者的2．68倍。载药红细胞在肝脏及肿瘤中的浓度和稳定性均高于游离药物，且随着时间延长，这种优势越来越大。结论：载药红细胞延缓药物释放，延长药物作用时间；增强了药物向肝脏及肿瘤的靶向聚集，减少不良反应。为临床肿瘤治疗提供新思路和可行方法。     

红细胞调控白细胞免疫功能新的自然实验研究体系

目的用血液免疫反应路线图实验体系评估红细胞在白细胞免疫活性中的作用。方法将0·3ml血浆加入0·2ml全血细胞悬液(全血细胞组)或0·2ml白细胞悬液(白细胞组)中,37℃温育1h,用免疫酶联法测定IL-8和IL-12水平,流式细胞仪测定白细胞膜CD4、CD8、CD35和CXCR4表达量。结果全血细胞组IL-8和IL-12水平(分别为5·96±4·26、9·84±2·23ρB·pg-1·ml-1)明显低于白细胞组(分别为15·09±9·86、13·59±3·69ρB·pg-1·ml-1,P<0·05),淋巴细胞CD4、CD35、CXCR4表达量(分别为37·79±12·00、154·66±70·00、34·40±20·45)明显高于白细胞组(分别为18·54±11·32、83·26±35·99、16·69±11·09,P<0.01),粒细胞CD35表达量(603·63±257·64)明显高于白细胞组(384·86±174·16,P<0.01)。成人全血细胞组淋巴细胞和粒细胞CD35和CXCR4表达量明显高于脐血全血细胞组(P<0·05或P<0·01)。结论红细胞是白细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞等)免疫功能的调控者和指导者,脐血红细胞免疫调节功能明显下降;本研究为红细胞免疫调控活性测定提供了新的近似自然的方法。     

红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用

目的探讨红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用。方法用淋巴细胞分离液分离健康成人ACD抗凝全血获得淋巴细胞悬液(1×106/ml)和红细胞悬液(1×108/ml),以灭活腹水癌细胞S180(1×106/ml)作为激活抗原,以自体血浆作为反应基质,考察红细胞对淋巴细胞的调控能力,流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD25的表达阳性率。单抗封闭红细胞CD35或EDTA破坏补体,观察淋巴细胞CD25表达的变化。结果CD35单抗封闭后淋巴细胞CD25表达量(18·22%±4·27%)明显降低;EDTA破坏补体后,淋巴细胞CD25表达量(18·79%±3·90%)比ACD抗凝组(23·29%±4·40%)明显降低,与CD35阻断组基本相同,但仍高于Hanks′液对照组(13·19%±2·96%)。结论红细胞CD35和血浆补体对抗原激活淋巴细胞免疫反应起着重要的调控作用;血浆中还存在其他调控淋巴细胞活化的机制。促进红细胞表面CD35分子表达、保持血浆补体活性对提高淋巴细胞免疫活性有着重要意义。     

长春新碱载体红细胞对小鼠S-（180）肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨长春新碱载体红细胞对昆明小鼠S180肿瘤的抑瘤作用.方法:用昆明种小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,将48只荷瘤小鼠随机分为长春新碱组、长春新碱载药红细胞组、未载药红细胞组和阴性对照组4组,每组各12只.分别经尾静脉注射长春新碱、长春新碱载药红细胞、洗涤红细胞及生理盐水,1次/3 d,共5次.所有治疗结束次日处死小鼠并称重,称瘤质量,计算各组瘤体平均质量及肿瘤抑瘤率.结果:长春新碱载药红细胞组的体质量增长幅度为(36.31±1.51) g,明显大于长春新碱组的(31.32±3.55) g(P＜0.01).长春新碱载药红细胞组平均瘤质量最轻,为(0.33±0.05)g,明显低于阴性对照组的(0.57±0.05) g(P＜0.05),该组抑瘤率达42.42%,是长春新碱组17.49%的2.43倍;未载药红细胞组瘤质量较阴性对照组大,抑瘤率呈负值,为-13.76%.结论:长春新碱载体红细胞体内抗肿瘤活性显著,有较强抑瘤作用,为临床肿瘤治疗提供新思路和可行方法.     

冰冻血小板对系统血液免疫功能影响的实验研究

目的:探讨不同冰冻血小板复温后对血液系统免疫功能的影响.方法:按不同的实验条件将血液反应系统分为4组,自体血小板组(自然体系对照组)、新鲜异体血小板组(自然体系实验组1)、新型血小板冷冻保护剂组(自然体系实验组2)、6%DMSO组(自然体系实验组3),以灭活S180作为激活抗原,采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法,检测血细胞表面相关免疫分子表达影响的变化规律.结果:血小板CD55和白细胞CD25表达水平,自然体系实验组1较自然体系对照组呈明显上调(P＜0.05),自然体系实验组2及组3均较自然体系对照组上调.血小板CD59表达水平,自然体系实验组1较自然体系对照组呈明显上调(P＜0.05),自然体系实验组2及组3较自然体系对照组下调.红细胞CD59表达水平,自然体系实验组3较自然体系对照组呈明显下调(P＜0.05).结论:冰冻血小板对红细胞免疫反应性的抑制作用强于新鲜异体血小板,对血小板、白细胞免疫反应性的激活作用弱于新鲜异体血小板.     

癌抗原激活红细胞调控白细胞CXCR4分子表达与意义

[目的]采用自然和分离实验体系研究大肠癌患者红细胞调控白细胞免疫反应。[方法]癌细胞加入全血细胞悬液(或白细胞悬液)和枸橼酸抗凝新鲜血浆,放37℃作用1h后,观察白细胞CXCR4表达和血清蛋白水平。[结果]癌细胞加入全血细胞和血浆组粒细胞CXCR4表达值(64.14±17.95)明显高于癌细胞加入白细胞和血浆组(41.57±1.58)(P<0.05),全血细胞和血浆组血清蛋白水平(20.63±1.41)明显低于白细胞和血浆组(24.25±1.58)(P<0.05)。大肠癌患者组白细胞CXCR4低于正常人。[结论]红细胞是白细胞CXCR4和分泌免疫球蛋白反应的调节器。大肠癌患者红细胞增强白细胞CXCR4表达能力明显下降。     

失血性休克犬自体回输洗涤血液与非洗涤血液后血栓弹力图各项指标比较分析

目的通过血栓弹力图仪对闭合性腹部损伤大出血导致的失血性休克犬术中自体回输洗涤血液与非洗涤血液后各项凝血功能指标的检测,评价自体回输洗涤血液与非洗涤血液后对体内凝血功能的影响。方法切除脾脏制造失血性休克犬模型,血液回收机回收术中腹部血液,设置过滤程序去除组织碎片、脂肪后,经过洗涤和非洗涤2种处理方式,分别分成洗涤血液组和非洗涤血液组,并将这2组血液分别回输给失血性休克犬。然后利用血栓弹力图仪普通检测法分别测定这2组血液回输前、回输后及回输后1 d R值、K值、Angle值、MA值的变化。结果回输非洗涤血液后R值无限制延长;回输洗涤血液后与回输洗涤血液前比较,MA值从62±43.31降至52.1±26.22,P<0.05;回输非洗涤血液1 d后与回输洗涤血液1 d后R值、K值、Angle值、MA值没有统计学意义,P>0.05。结论回输非洗涤血液1 d后与回输洗涤血液1 d后在凝血功能方面对失血性休克犬的影响效果相同。     

以溶血性贫血及血小板减少为首发临床表现的儿童谷固醇血症1例报告并文献复习

报道1例表现为溶血性贫血和血小板减少的儿童谷固醇血症病例。谷固醇血症是一种罕见的常染色体隐性脂质代谢障碍, 由于其非典型临床表现, 诊断具有挑战性。研究强调了识别此病的重要性, 尤其是在表现为溶血性贫血和血小板减少的患者中。案例涉及1例最初被误诊为丙酮酸激酶缺乏的8岁儿童。进行了详细的生化和分子分析, 包括基因测序。结果显示ABCG5基因的纯合突变, 确诊为谷固醇血症。这一病例强调了需要综合诊断方法和提高临床的认识。通过分析1例儿童病例, 展示了谷固醇血症的复杂性和诊断难度。这名8岁儿童最初被误诊为丙酮酸激酶缺乏症, 后经过全面的生化和分子生物学分析, 包括基因测序, 最终确诊为谷固醇血症。该病例表明, 对于表现为溶血性贫血和血小板减少的患者, 医生需要考虑更广泛的诊断可能性, 以减少误诊。这一研究强调了对谷固醇血症的认识和准确诊断的重要性。     

抗原激活系统血液免疫反应实验研究

目的：用系统免疫学研究体系探讨在系统血液免疫反应中不同抗原物质激活红细胞调控白细胞免疫反应的实验观察。方法：将卡介苗（1 mg/ml）、瘤苗（S180 5×106ml^-1）或酵母菌（5×10^8ml^-1）0.2 ml,以生理盐水（代替抗原物质）0.2 ml为各自对照组加入枸橼酸抗凝全血细胞或白细胞0.2 ml和血浆（或生理盐水0.3 ml）中,37℃水浴1小时,用免疫酶联法测定IL-8和IL-6,用流式细胞仪测定Fy6和CD35分子平均荧光强度。结果：各种抗原物质加入血细胞和血浆组其IL-8激活率为（2.71±0.37）显著高于血细胞和生理盐水组（-0.33±0.05）（P〈0.01）。前组IL-6激活率（1.01±0.37）也高于后组,其IL-6激活值为（-0.25±1.06）。各种抗原加入全血细胞和血浆组的IL-8激活率为（2.71±0.37）显著高于各种抗原加入白细胞和血浆组IL-8激活率（0±0.20）（P〈0.01）。在各种抗原加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平（28.85和25.35）低于生理盐水加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平（45.80）,各种抗原加入全血细胞和血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量（860.4±115.63）明显高于各种抗原加入白细胞血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量（565.07±96.35）（P〈0.01）。在无血浆组,红细胞对白细胞分泌的IL-8和IL-6有吸附作用。结论：在本实验体系中,各种抗原可激活红细胞调控系统血液免疫反应中的各种白细胞被活化所分泌的IL-8和IL-6含量。在体外抗原可快速激活系统血液免疫反应。红细胞调控各种白细胞释放IL-8和IL-6的机制是复杂的,如红细胞对IL-8和IL-6激活率与血浆和CD35分子量表达密切相关,红细胞IL-8和IL-6吸附率与Fy6和gp130表达密切相关。红细胞与血浆在系统血液免疫反应调控中扮演着重要的角色。