沉默视黄酸核受体α损伤大鼠原代海马神经元的钙兴奋性

目的:了解视黄酸核受体α (RARα)对大鼠神经元功能的必要性.方法:采用组织消化原代贴壁法分离培养大鼠原代海马神经元,利用腺病毒载体特异沉默RARα;利用Real-Time PCR分析沉默RARα对神经元视黄酸(RA)信号各受体以及神经细胞标志物的影响;利用活细胞钙影像分析沉默RARα对神经元钙兴奋性的影响.结果:免...     

重庆市228例产妇婴幼儿喂养知识态度行为的现况调查

目的通过调查重庆市部分产妇关于婴幼儿喂养的知识、态度、行为现况,为母婴保健宣传项目的开展提供有效参考和指导。方法对重庆医科大学附属第一、二医院妇产科住院产妇进行问卷调查,询问产妇对婴幼儿喂养相关知识的了解程度,以及与喂养相关的态度和行为情况。结果产妇对婴幼儿喂养方面的知识平均得分率为(61.40±0.21)%,产妇对于哺乳相关知识掌握较好,但对婴幼儿营养相关疾病预防了解较少。正性的关于婴幼儿喂养的态度和行为产妇的比例并不高,尤其是纯母乳喂养的比例仅23.25%,超过半数的人对喂养没有信心。结论重庆产妇关于婴幼儿喂养方面的知识、态度和行为情况并不理想,喂养方面的健康宣教有待进一步改进和加强。     

重庆市0～6岁儿童生活习惯调查分析

目的:文章旨在了解重庆市0～6岁儿童的生活习惯方式及其影响因素,分析并提出建议.方法:分层随机抽取重庆市三区县6个幼儿固及两个医院儿保科来访儿童1943名,采取自行设计的儿童生活习惯研究调查问卷进行现况调查.结果:父母索文化水平、家庭经济条件、教育等对儿童养成良好的生活习惯有一定影响;听力筛查、口腔检测率低;儿童的饮食习惯、与家长交流沟通等生活习惯情况有待改善.结论:儿童的各项健康生活习惯受家长的文化程度、对儿童的教育等因素影响较大,家长应培养儿童多方面养成生活中良好的健康习惯.     

全反式维甲酸抑制大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化信号通路中Fosl1直接调控PPARγ2

目的:研究激活蛋白1(AP-1)在全反式维甲酸(ATRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化信号通路中的调控机制。方法:采用SD大鼠原代BMSCs,体外分离、培养和成脂诱导。油红O染色鉴定细胞脂滴形成情况。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂肪细胞形成相关蛋白脂肪酸结合蛋白(FABP)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、脂肪酸转运蛋白(CD36)、脂滴包被蛋白(perilipin)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)以及AP-1家族各成员(Fosl1、Fosl2、c-Fos、c-Jun、Jun B、Jun D和Fos B)的mRNA表达水平。Western blot检测相关蛋白的表达水平。染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测相关蛋白(RARγ和Fosl1)与PPARγ2基因是否存在相互作用。结果:油红O染色显示ATRA处理组中细胞脂滴数量明显减少。BMSCs成脂诱导12 d后,与对照组相比,1μmol/L ATRA处理组FABP、LPL、CD36、perilipin和PPARγ2的mRNA表达均显著降低。RT-qPCR检测AP-1家族各转录因子表达结果显示Fosl1在ATRA处理组成脂诱导第2天、第6天和第10天表达均显著升高。Westren blot结果表明ATRA处理组Fosl1蛋白表达水平显著升高,而PPARγ2蛋白表达降低。Ch IP-qPCR实验发现Fosl1蛋白可结合在PPARγ2基因启动子区域,而RARγ蛋白未直接结合在PPARγ2基因启动子区域。结论:ATRA可抑制BMSCs成脂分化及脂质代谢相关蛋白的表达,可能与其通过上调Fosl1直接结合PPARγ2基因启动子区域、下调PPARγ2表达有关。     

多种营养素佐治新生儿肺炎疗效影响因素的多元分析

目的:探讨患儿背景情况对低剂量维生素A(VA)、维生素E(VE)、锌(Zn)、硒(Se)佐治新生儿肺炎效果的影响,了解在肺炎下影响患儿VA营养状况的危险因素.方法:随机纳入新生儿肺炎患儿150名,实际收到111例.口服低剂量VA、VE、Zn、Se.分别收集患儿背景资料和在入院时、干预7d后静脉血3ml,采用高效液相色谱法(HPLC)测VA、酶联免疫法(ELISA)测视黄醇结合蛋白(RBP)、免疫比浊法测IgM.采用多元逐步回归分析背景数据对临床效果和实验室指标的影响.结果:母亲年龄胎龄、日龄、出生体重和母亲产次正性影响临床改善效果.日龄和出生体重正性影响、母亲年龄负性影响激期IgM水平;日龄正性影响恢复期VA水平的升高、负性影响恢复期IgM水平的升高,母亲年龄负性影响恢复期RBP水平的升高.结论:母亲年龄、产次、胎龄、日龄是影响多种营养素临床佐治效果的重要因素.母高龄、多产次、早期儿和巨大儿在肺炎期更易发生VA营养不良,疾病恢复更缓慢,营养干预更为迫切.     

沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

目的 利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和磷酸酶并和张力蛋白同源物（PTEN）基因,论证它们在神经元体外氧糖剥夺（OGD）损伤后的功能调控作用。方法 构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体;提取并将原代神经元分为4组：（1）NC组,仅加空载病毒;（2）NC+OGD组,加空载病毒后缺氧;（3）Si-hif-1α+OGD组,加Si-hif-1α病毒后缺氧;（4）Si-pten+OGD组,加Si-pten病毒后缺氧,均在培养第3天感染病毒,第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测干扰效率,行乳酸脱氢酶（LDH）检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化,Western blot检测相应蛋白表达变化。结果 慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达;HIF-1α沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡加重,PTEN蛋白的表达升高,p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低（P<0.05）;PTEN沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻,p-PTEN、p-AKT表达升高（P<0.05）,HIF-1α、NR2A及VEGFa的表达无显著变化（P>0.05）。结论 慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达,逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制,参与神经元损伤调控。     

不同剂量维生素A强化饼干对3～6岁儿童维生素A营养状况的干预效果

背景:维生素A缺乏性疾病是一个世界性的儿童健康问题,中国西部及边远地区尤为严重,需要进行营养干预。目的:比较补充3种不同剂量强化维生素A饼干对3～6岁儿童维生素A营养状况的改善效果,探索预防维生素A缺乏性疾病的强化饼干的理想剂量。设计:随机对照观察。单位:重庆市卫生局卫生监督所、重庆医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室和重庆医科大学儿童医院儿童营养研究中心。对象:调查于2002-03/12完成,选择重庆市巴南区8个幼儿园的3～6岁儿童753名,监护人均知情同意。随机分为4组,即30%推荐摄入量组、100%推荐摄入量组、2万国际单位组及20万国际单位组。方法:①30%推荐摄入量组(177名)每日补充维生素A30%每日推荐摄入量(500IU)强化饼干1次。②100%推荐摄入量组(173名)每日补充维生素A100%每日推荐摄入量(1666IU)强化饼干1次。③2万国际单位组(209名)每周补充维生素A2万国际单位强化饼干1次。④20万国际单位组(194名)补充维生素A20万国际单位胶丸1次。所有儿童干预前及干预3个月时测定身高、体质量、血清视黄醇、前白蛋白、血红蛋白及视黄醇结合蛋白。30%推荐摄入量组中有87名儿童在补充9个月后再次复查以上指标。主要观察指标:①各组儿童干预前及干预3个月后维生素A缺乏性疾病检出率。②各组儿童干预前及干预3个月后血清视黄醇、血清前白蛋白、血清视黄醇结合蛋白、血红蛋白、身高和体质量。结果:因样本流失和检测技术的问题,复查仅得580名儿童的检测结果。①各组儿童维生素A缺乏性疾病检出率比较:补充3个月后,30%推荐摄入量组、100%推荐摄入量组、2万国际单位组及20万国际单位组儿童维生素A缺乏性疾病检出率均较治疗前显著下降[1.48%,1.42%,1.21%,2.16%;6.78%,6.54%,8.61%,8.25%(χ2=3.86～8.57,P<0.05～0.01)]。②各组儿童血清视黄醇、血清前白蛋白、血清维生素A、血红蛋白、身高和体质量比较:补充3个月后,自身对照除30%推荐摄入量组的前白蛋白和血红蛋白外,各组儿童其余各项指标均明显增加(t=2.52～37.44,P<0.05～0.01)。2万国际单位组血清维生素A的升高幅度明显大于其他组(F=4.62,P<0.01),30%推荐摄入量组血红蛋白、前白蛋白和身高的增长幅度明显小于其他组(F=5.0～7.78,P<0.01)。30%推荐摄入量组补充9个月后,血红蛋白和前白蛋白的升高明显大于其余组(F=11.62,10.21,P<0.01),血清视黄醇的升高仍低于2万国际单位组(F=4.21,P<0.01)。结论:补充3种不同剂量的维生素A强化饼干和20万国际单位维生素A胶丸,均可明显改善维生素A的营养状况和血红蛋白水平。其中30%推荐摄入量和100%推荐摄入量风险小、且每日补充能稳定维持体内维生素A水平,可能是更适于儿童的长期补充剂量,而30%推荐摄入最优于100%推荐摄入量。     

孤独症谱系障碍儿童饮食行为及营养素问题的研究进展

孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)的主要核心症状为社交互动障碍,狭隘的兴趣和重复刻板行为,后者常常也表现在饮食行为方面。ASD儿童存在严重的饮食行为问题,易引起摄入的食物种类减少,营养素水平降低,进一步加重ASD儿童的症状。因此,本文就ASD儿童的饮食行为、营养素问题及其干预进行总结和阐述。     

大鼠siTLR4重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建特异性针对大鼠TLR4基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究TLR4在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。方法设计并合成3对大鼠TLR4基因的siRNA序列,退火处理后定向克隆到pSES-HUS穿梭质粒中,获得pSES-HUS-siTLR4,经Pme I线性化后与pAdEasy-1骨架质粒在BJ5183细菌中进行同源重组,从而构建pAd-siTLR4质粒,通过脂质体转染,在HEK293细胞中包装形成Ad-siTLR4腺病毒颗粒,用该病毒感染PC12细胞,从基因和蛋白质水平分别检测3对siTLR4的抑制效果,同时从蛋白质水平检测TLR4下游关键分子NF-κB的表达。结果 PCR、酶切和测序均证实目的基因正确克隆到所构建的pAd-siTLR4重组腺病毒载体中;经包装获得的Ad-siTLR4病毒颗粒在PC12细胞中能够有效地抑制TLR4 mRNA和蛋白水平的表达,并显著地降低了NF-κB的表达。结论成功构建了pAd-siTLR4重组腺病毒质粒,同时包装获得了Ad-siTLR4重组腺病毒,转染PC12细胞后不仅能明显降低TLR4的表达,而且有效地抑制了TLR4通路下游关键分子NF-κB的表达。