我国钩端螺旋体疫苗的发展现状与挑战

目的：总结分析我国钩端螺旋体的发展现状以及面临的问题与挑战。方法：根据国内外文献材料进行整理、归纳和分析。结果与结论：应解决钩体疫苗发展中面临的一些困境,进一步优化我国钩体疫苗,从而保证国家扩大计划免疫规划成功实施。     

流行性脑脊髓膜炎的流行趋势变化与其疫苗接种

在过去几十年,随着疫苗的广泛使用,不同国家和区域引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病原体的血清群也发生了变迁。本文将脑膜炎球菌疫苗免疫接种、感染人群、不同区域和国家流脑的流行趋势及其内在机制研究进展进行综述,为进一步了解流脑流行趋势变化与其疫苗接种和后续制定免疫策略提供参考。     

不同来源金黄色葡萄球菌的全基因组序列分析北大核心CSCD

目的了解不同来源金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的全基因组序列基本特征,探究菌株的分子分型、耐药基因型、毒力及其遗传进化关系。方法应用solexa高通量测序技术对10株医源性和食源性代表株金葡菌进行全基因组测序,以此进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、金葡菌a蛋白(Staphylococcus aureus protein A,spa)基因分型分析,并比较分析不同菌株基因组中携带耐药基因和毒力因子,筛选核心基因,构建系统进化树。结果10株金葡菌染色体基因组大小相似,均为2.7Mbp,包含有2486~2648个基因不等,平均长度约为887bp。耐药基因注释分析显示9株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)携带的耐药基因少于另一株耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。尽管在不同菌株基因组之间的毒力因子数量无显著区别,但不同菌株存在的毒力因子却不同,食品来源金葡菌基因组携带1~4种数量不等的肠毒素基因。进化树分析显示不同来源金葡菌位于不同进化分支,2株为ST8型的MSSA和MRSA进化亲缘性较高,属于同一进化分支内。结论获得10株不同来源金葡菌的全基因组序列数据,并证实食源性或医院来源金葡菌为了适应不同生存环境,通过不同分子进化机制,获得不同耐药基因和毒力因子,形成菌株特定的分子遗传特征,可为金葡菌的分子流行病学和致病性机制研究提供参考依据。     

二维超声心电动图多普勒检测114例老年高血压病左心室舒张功能意义

目的应用二维超声心动图多普勒检测老年高血压左室舒张功能,并且肯定了临床价值,现在临床上正在广泛地应用这一项新的检测方法.方法对114例60岁以上的老年高血压患者通过二间瓣舒张充盈频谱的检测和M超同时测量二尖瓣前叶EF斜率的大小来判断左室舒张功能.结果本组A/E倒置,占83%,EF斜率《正常,占79.8%.结论A/E≥0.5对老年高血压心室舒张压功能减退,就可作出判断.     

抗百日咳毒素单克隆抗体的纯化及应用研究

目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经SDS-PAGE分析,纯化M cAb的纯度均在90%以上,选择二株识别不同抗原位点M cAbs,应用于检测PT的双抗夹心ELISA方法,灵敏度为2.14μg/L,批内变异系数5.85%,批间变异系数9.27%,平均回收率为108.12%,应用该法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中PT含量。结论获得了纯度高的抗PT M cAb,建立了一种特异、准确的定量检测PT的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中PT含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段。     

中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析

目的 了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征.方法 应用抗菌毛蛋白2(fim2)和3(fim3)单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型,并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析;同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fimd基因,并对这些PCR产物进行DNA测序分析.结果 研究表明,与多克隆抗体分析结果相比较,单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同,其余菌株的结果均一致.研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2&3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型.在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2&3型为主,随着大范围的百日咳疫苗接种,临床分离菌株中fimd型血清型细菌所占的比例逐渐增多.分析菌株中fim2和fimd的基因型以fim2-1(92.5%)和fim3-A(95.0%)亚型为主;18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A,而其他两株疫苗株的基因型均为fim2-1和fim3-A.在2000年以后,分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株,这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种,百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异.结论 本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性.对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析,为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础.     

铜绿假单胞菌核酸检测用试剂盒国家参考品的研究

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌.在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1].铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域.例如在水源水或成品水中检出铜绿假单胞菌,甚至多批次样品的检出率 大于 10％,为一种重要的水源和食源性致病菌[...     

愈疡整肠方灌肠治疗溃疡性结肠炎30例临床观察

目的 观察愈疡整肠方灌肠治疗溃疡性结肠炎的治疗效果。方法 本方灌肠治疗组30例,并与地塞米松灌肠对照组进行疗效比较。结果 治疗组总有效率96．7％,优于对照组(有效率为83．3％);两组治疗后血清TNF-α均明显降低,且治疗组明显低于对照组;两组治疗后CD4明显降低,CD4及CD4／CD8比值明显升高。结论 愈疡整肠方灌肠治疗UC疗效优于地塞米松灌肠治疗,该方作用机理可能与其降低血清TNF-α含量及调整T细胞亚群有关。     

百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用

目的 建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法,并进行临床应用研究.方法 根据百日咳杆菌IS481基因序列,设计并合成引物和荧光探针,建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法,并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价,检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份.结果 该方法的标准曲线显示模板浓度在102～108拷贝/μl线性范围与其循环阈值(Ct)具有较好的线性关系,相关系数(r)为0.998,最小检出量为102拷贝.特异度较好,灵敏度较高,重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μ1)10次,连续检测5次,变异系数(CV)为5.78%～16.7%.在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μl),连续7次,CV为8.25%～14.9%.经检测,疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性,30份健康人咽拭子均为阴性.结论 由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好,适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测,有较大的应用前景.     

抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及其夹心ELISA方法的建立

[目的]制备抗百咳丝状血凝素（FHA）的单克隆抗体（McAbs），并建立FHA定量检测方法。[方法]采用杂交瘤技术制备McAbs，以间接ELISA法筛选，对获得的稳定杂交瘤细胞株及其分泌抗FHA-McAbs进行了系统的鉴定和纯化，建立定量检测FHA的ELISA方法，并运用建立的ELISA方法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量。[结果]获得6株分泌抗FHA-McAbs的杂交瘤细胞株，抗体类别均为IgG1（K），效价达1：10^5和1：10^6，并能特异识别百日咳丝状血凝素，与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应，建立了检测FHA的ELISA，灵敏度为1．04μg/L，批内变异系数5．49％，批间变异系数9．31％，平均回收率为94．18％，实验结果显示同一单位送检的每批原液之间FHA含量不是很一致。[结论]成功地制备了抗FHA-McAbs，建立了一种特异、准确的定量检测FHA的ELISA方法，并用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测，为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段，同时也为以后FHA的研究奠定了基础。